Submit
Browse  

The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.

Recommend to Librarian

Automatic Translation

This translation into Hebrew was automatically generated through Google Translate.
English Version | Other Languages

 JoVE General

בידוד של האדם עורקי טבורי תאים שרירים חלקים (HUASMC)

, , ,

Centro de Investigação em Ciências da Saúde, Faculdade de Ciências da Saúde, Universidade da Beira Interior

You must be subscribed to JoVE to access this content.

This article is a part of   JoVE General. If you think this article would be useful for your research, please recommend JoVE to your institution's librarian.

Recommend JoVE to Your Librarian

Current Access Through Your IP Address

You do not have access to any JoVE content through your current IP address.

IP: 54.234.231.49, User IP: 54.234.231.49, User IP Hex: 921364273

Current Access Through Your Registered Email Address

You aren't signed into JoVE. If your institution subscribes to JoVE, please or create an account with your institutional email address to access this content.

 

Video Article Chapters

Cite this Article: בידוד של האדם עורקי טבורי תאים שרירים חלקים (HUASMC)

Ribeiro, M. P., Relvas, R., Chiquita, S., Correia, I. J. Isolation of Human Umbilical Arterial Smooth Muscle Cells (HUASMC). J. Vis. Exp. (41), e1940, doi:10.3791/1940 (2010).

Abstract: בידוד של האדם עורקי טבורי תאים שרירים חלקים (HUASMC)

חבל הטבור האנושי (UC) היא מדגם ביולוגי שניתן להשיג בקלות רק לאחר הלידה. זה מדגם ביולוגי, רוב הזמן, מושלך ואיסוף שלהם אינה מעידה על כל סיכון נוסף בריאות היילוד או של אמו. יתר על כן חששות לא אתית גדלים. UC מורכב ידי וריד אחד ושני עורקים שממנו הן בתאי האנדותל (ECS)

Protocol: בידוד של האדם עורקי טבורי תאים שרירים חלקים (HUASMC)

  1. העורקים מתקבלים UC חתיכות של 3-7 ס"מ.
  2. ג'לי וורטון של שמקיפה את העורקים הוסר בקפידה על ידי גזירה במספריים זה.
  3. מחט קהה סוף בקוטר חיצוני של 0.6-1mm הוכנס על 7mm מקצה אחד של העורקים גזור.
  4. כדי להסיר את הדם שנותר בתוך כלי הדם, העורקים מוחזקים אנכית perfused עם כ 20-40 מ"ל, תמיסת מלח פיזיולוגית (PSS), באמצעות מזרק 20 מ"ל קשור מחט. אם יש צורך, בשלב זה כביסה חזר על עצמו כמה פעמים.
  5. הנוהל חזר על עצמו אותו משתמש RPMI 1640 בתוספת 10% בסרום שור העובר (FBS).
  6. אחת הגפיים של כלי הדם נסגר. מזרק 10 מ"ל היה קשור מחט ו perfused עם 3 מ"ל של collagenase סוג אני (800 יחידות / מ"ל ​​בפתרון שנאגרו של האנק מלח (HBSS)). ואז extremityof שני כלי נסגר גם הוא.
  7. הספינה הודגר עם פוספט שנאגרו תמיסת מלח (PBS), במשך 15 דקות ב 37 מעלות צלזיוס בהתרגשות.
  8. אחרי הקצוות של כלי קוצצו כדי לאסוף את SMCs חינם. העורקים היו perfuse עם מ"ל כ 20 עד 40 מתוך DMEM-F12 בתוספת 5% FBS ו אנטיביוטיקה כדי שפופרת 50 מ"ל.
  9. הצינור היה centrifuged בטמפרטורת החדר (250 גר ', 8 דקות), ותא גלולה היה resuspended ב 5 מ"ל של DMEM-F12 בתוספת 5% FBS.
  10. השעיית תא הועבר קולגן מצופה T-בקבוק וטופחו על 37 ° C, תחת אווירה של 5% CO 2 humidified.
  11. לאחר 16 שעות 5, הלא חסיד תאים drebis הסלולר הוסרו, 5 מ"ל של מדיום תרבות נוספה התאים הודגרו ב 37 ° C, תחת אווירה של 5% CO 2 humidified.
  12. תרבות התקשורת התא שונה כל 2 3 ימים, עד SMCs הגיעו למפגש.
  13. לאחר המפגש הגיע תאים שהם זורעים לתוך שניים או שלושה 25 ס"מ 2 T-צלוחיות.

ניקוי

  1. השלך מחטים במיכל החדים.
  2. השלך מזרקים במיכל Biohazard גדול.
  3. מכניסים את כל רקמת לשקית Biohazard קטן. סגור את השקית להקפיא ב -20 מעלות צלזיוס עד שריפה.
  4. משרים את כל המכשירים virucide דקות לפחות 10.
  5. חזור התקשורת בשימוש למקרר.
  6. השלך את הכפפות פסולת Biohazard.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion: בידוד של האדם עורקי טבורי תאים שרירים חלקים (HUASMC)

SMC יכול לשמש כמודל עבור מבחני העתיד עם תרופות נחש, לבודד מבנית לאפיין L-סוג ערוצי סידן, ללמוד היבטים תאית ומולקולרית של תפקוד כלי הדם, ולהשתמש בהם בהנדסת רקמות. SMCs ו ECS הם היסוד לפיתוח biomaterials חדש שיכול לשמש בייצור של כלי דם סינתטי למחצה לשימוש בבני אדם.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures: בידוד של האדם עורקי טבורי תאים שרירים חלקים (HUASMC)

Acknowledgements: בידוד של האדם עורקי טבורי תאים שרירים חלקים (HUASMC)

החולים אמאטו Lusitano, קסטלו ברנקו מפורטוגל.
החולים סוזה מרטינס, Guarda פורטוגל.

Materials: בידוד של האדם עורקי טבורי תאים שרירים חלקים (HUASMC)

Name Company Catalog Number Comments
DMEM-F12 Sigma-Aldrich 095K8311
Fetal bovine serum (FBS) Biochrom AG 0117T
RPMI 1640 GIBCO, by Life Technologies 3103806
Collagen Sigma-Aldrich 067K2302
Antibiotic 10 μL/ 1 mL of medium
Scissors Sterilized
Needle Diameter of 0.6-1mm
Syringe 10 - 20 mL
Physiological Saline Solution (PSS) 20-40 mL per artery
Collagenase type I Sigma-Aldrich 047K1052 3 mL per artery
Hank’s Buffered Salt Solution(HBSS) Diluted collagenase
Phosphate buffered saline solution (PBS) Warmed to 37°C

References: בידוד של האדם עורקי טבורי תאים שרירים חלקים (HUASMC)

  1. Van Rijen, H. et al., Gap junctions in human umbilical cord endothelial cells contain multiple connexins. The American journal of physiology 272 (1 Pt 1), C117 (1997).
  2. Martín de Llano, J. et al., Procedure to consistently obtain endothelial and smooth muscle cell cultures from umbilical cord vessels. Translational Research 149 (1), 1-9 (2007).
  3. Jaffe, E.A., Nachman, R.L., Becker, C.G., & Minick, C.R., Culture of human endothelial cells derived from umbilical veins. Identification by morphologic and immunologic criteria. J Clin Invest 52 (11), 2745-2756 (1973).
  4. Cairrão, E., Santos-Silva, A., Alvarez, E., Correia, I., & Verde, I., Isolation and culture of human umbilical artery smooth muscle cells expressing functional calcium channels. In Vitro Cellular & Developmental Biology-Animal 45 (3), 175-184 (2009).

Ask the Author: בידוד של האדם עורקי טבורי תאים שרירים חלקים (HUASMC)

0 Comments

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Waiting
simple hit counter