慢性沙门氏菌感染小鼠模型

该协议包括三部分：细菌培养，小鼠灌胃，检测和沙门氏菌 。

1。 沙门氏菌的生长条件。

1. 准备沙门氏菌卢里亚Bertani肉汤（LB）板，37℃过夜孵育。
2. 从LB平板克隆选择和投入7毫升LB培养基，在12毫升管，并在37 ° C为5小时左右摇晃。
3. 固定相的文化和​​孵化用0.05毫升50毫升LB培养基，接种于37 ° C，不摇晃时间约18小时。
4. 自旋在室温下过夜的细菌培养，10分钟6000转，暂停使用比率100:3（LB：HBSS）的HBSS的细菌。例如：
   每50毫升LB培养将暂停在1.5毫升的HBSS。
5. 对于动物灌胃，进一步在1:10的比例稀释的细菌培养。例如：
   每1.5毫升LB培养将暂停在15毫升的HBSS。

2。 沙门氏菌感染模型*.

1. 准备链霉素溶液。每个鼠标将在100μL的HBSS 7.5毫克链霉素。例如，准备10只小鼠在1.2毫升的HBSS总链霉素90毫克。准备链霉素溶液时，总是有一些额外的体积。
2. 水和食物4小时之前撤回灌胃治疗。
3. 链霉素（100μL对照组小鼠的HBSS）7.5毫克链霉素灌胃的小鼠。牢牢抓住用大拇指和中指在鼠标肩的皮肤，舒展的头部和颈部，用食指伸直，使食道。直接喂养针沿口的屋顶，向咽后部的右侧球头，然后轻轻地向下传递到食道，并注入100μL解决方案。应该感到无电阻。
4. 链霉素治疗后，被撤回的水和食物与细菌感染小鼠前再次的20小时。
5. 灌胃100μL悬浮在HBSS中每个鼠标或用无菌的HBSS（对照组）灌胃治疗。灌胃过程是相同的2.3）灌胃小鼠，用链霉素。

*动物实验，通过使用无特定病原体的雌性C57BL / 6小鼠（泰康利，哈德森，NY）6-7周龄，正如先前所^描述的1。该协议被批准，由美国罗切斯特大学委员会的动物资源（UCAR）大学。

3。肠道沙门氏菌检测。

1. 收集小鼠粪便（约100毫克）。
2. 粪便样品转移到1.5微离心管中，用1ml PBS和涡大力。
3. 离心10分钟800转。上清液转移到一个干净的离心管。
4. 离心5分钟转速6000。丢弃上清液200μL的PBS添加到颗粒和振荡。
5. 数的200μLPBS与一次性细胞吊具上BBL CHROMagar板检测沙门氏菌沙门氏菌出现紫红色（上升到紫色，参见图1）。如果200μL产量上盘太多的殖民地，使用100μL或50μL的连胜纪录。

4。代表性的成果。

鼠伤寒沙门氏菌的定植是正确的协议时，可以在小鼠小肠中检测到6个月以上的沙门氏菌可通过粪便文化检测6个月以上（图1 ）。作为一个典型的出这种模式，车身重量损失和死亡，感染后4个星期内发生。依赖感染沙门氏菌株，有些老鼠可能无法存活超过6个月。

图1。肠道沙门氏菌沙门氏菌出现紫红色上升到紫色的颜色，由于代谢差异的存在，在选定chromogens的。是抑制其他细菌或产生蓝绿色或无色菌落。

图2。感染沙门氏菌突变株PhoP ^{C，PhoP彗星}的小鼠的存活比例阿夫拉， ^和 PhoP彗星AvrA-/AvrA ⁺ PhoP彗星阿夫拉4周（28天）。

表1。 沙门氏菌感染4周的小鼠的体重。

*与对照组比较P <0.05
**相比，对照组P <0.01

表2。 沙门菌在这项研究中使用。

使用这个系统，它的研究人员，以了解如何灌胃动物是必要的。我们详细准备细菌培养和灌胃的小鼠的一种方法。我们还展示了如何监测在胃肠道（GI） 的沙门氏菌持久。在这个协议中的关键步骤包括：

1. 链霉素预处理：链霉素预处理可以摆脱一些共生的肠道菌群，使小鼠受到沙门氏菌 ^感染 2 。
2. 沙门氏菌灌胃：对于初学者来说，灌胃可以是具有挑战性的的。有时，灌胃失败，因为该解决方案是不小心注入呼吸道，导致小鼠死亡。
3. 持久性细菌定植：需要密切监测细菌在胃肠道。除了 ​​鼠粪文化，盲肠的内容也可以被用于在沙门氏菌检测BBL CHROMagar板。 沙门氏菌感染后处死小鼠时收集盲肠内容。

我们已经测试了不同浓度的沙门氏菌定植鼠标：1 × 10 ³ 1 × 10 ⁸集落形成单位（100μL/鼠标）的菌落形成单位。在1 × 10 ⁶至10 × 10 ⁸菌落形成单位， 沙门氏菌是能够拓殖小鼠。因此，根据我们以前的出版物^1，5和未发表的数据，在此解决方案中的沙门氏菌终浓度不会被测量前灌胃。

在这个实验过程中，我们使用无特定病原体的雌性C57BL / 6小鼠（泰康利，哈德逊，纽约州）6-7周龄。使用的菌株包括野生型鼠伤寒沙门氏菌株ATCC14028s（WT - SL），非致病性沙门氏菌突变株^{PhoP C3，PhoP}彗星阿夫拉，和^PhoP彗星AvrA-/AvrA + ^PhoP彗星阿夫拉（见表2） 。使用此协议， 鼠伤寒沙门氏菌的定植，可在小鼠小肠中检测到6个月以上（图1）通过观察排泄物和男孩体重测量。沙门氏菌感染和炎症。当收集组织样本和血液，小肠长度测量肠道炎症的一个特点。脾脏和肝脏的重量还审议。 ELISA5小鼠血清细胞因子进行了测试。此外，生物化学和分子生物学方法进一步用于测试5 沙门氏菌引起的炎性细胞因子的变化和病理变化。

通常情况下，身体消瘦和死亡发生在感染后4个星期内（见表1）。邮政沙门氏菌感染，细菌感染组有显着的体重损失相比，无细菌治疗的对照组（P <0.05或P <0.001见表1）。每周测量体重。如图所示的生存比例4周后感染。 2。总体而言，92％（N = 50）感染沙门氏菌株PhoP ^彗星的小鼠^，78％PhoP彗星阿夫拉，或^70％PhoP彗星AvrA-/AvrA +可以在肠道中生存与持久性沙门氏菌。急性感染后，所有的幸存者仍然进行沙门氏菌 ，它可以检测到感染后6个月使用这项建议中所述的方法。一旦小鼠生存感染3周后，小鼠获得了体重，少死亡发生（图2）。此外，immunofluroscence染色数据还显示，在肠道黏膜27周后感染（图3） 沙门氏菌的入侵。这些数据表明^，C，PhoP PhoP ^彗星阿夫拉，或PhoP ^彗星 AvrA-/AvrA +可用于慢性感染模型。

与寄主抗性因子NRAMP1的小鼠+ / + 抗沙门氏菌 ^感染 3-6 。 C57/BL6小鼠与Nramp缺陷，在目前的研究中使用。我们发现，90％的小鼠感染致病的沙门氏菌菌株14028s无法生存超过4周（数据未显示）。为了解野生型鼠伤寒沙门氏菌感染的长期影响，小鼠与Nampr1 + / +可以使用。

这种模式是建立在BSL - 2实验室。我们的协议是，由美国罗切斯特大学委员会的动物资源（UCAR）大学批准。 沙门氏菌感染小鼠有可能遭受的不适和痛苦，变得不活跃，走动缓慢。有可能成为它们的皮毛竖起，他们可能无法正常饲料或饮。动物将密切观察，如果无法走动不够好，保持水化和热量的摄入量，如果鼠标迹象表明，它已吸气液体或显着的体重损失^（10％或以上）7，并没有任何不适，如签署没有立即死亡，鼠标是人道的安乐死。所有实验室人员进行培训观察小鼠适当^8，9。

许多研究使用链霉素预处理已在感染^1,2,10的早期阶段的研究由鼠伤寒沙门氏菌引起的结肠炎的优势。然而，只有少数报告在慢性感染小鼠体内¹¹模型。小鼠消化道沙门氏菌持久存在，使我们能够探索长期的宿主细菌的相互作用，信号转导和肿瘤。我们建立了鼠伤寒沙门氏菌在小鼠小肠6个月以上的殖民化是一种慢性细菌感染小鼠模型。这种模式也可以用于大肠杆菌的发病机制及益生菌的研究。总体而言，这一协议将有助于研究人员利用小鼠模型，从根本上解决重要的生物学和微生物学的问题。