The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.
This article is a part of JoVE General. If you think this article would be useful for your research, please recommend JoVE to your institution's librarian.
You do not have access to any JoVE content through your current IP address.
IP: 54.234.126.92, User IP: 54.234.126.92, User IP Hex: 921337436
Current Access Through Your Registered Email Address
You aren't signed into JoVE. If your institution subscribes to JoVE, please sign in or create an account with your institutional email address to access this content.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
Unable to load video. Please check your Internet connection and reload this page. If the problem continues, please let us know and we'll try to help.
An unexpected error occurred. Please check your Internet connection and reload this page. If the problem continues, please let us know and we'll try to help.
Ters genetik yaklaşımlar sivrisinek vektör patojenler için hangi genlerin altta ya direncini belirlemek için son derece yararlı olduğu kanıtlanmıştır. Bu video protokolü James laboratuar tarafından dsRNA kadın dang virüs limanı A. aegypti sivrisinek, içine enjekte etmek için kullanılan bir yöntem gösteriyor. , Enjeksiyon iğneleri kalibre, enjeksiyon kurulum manipüle ve toraks içine enjekte dsRNA tekniği gösterilmiştir.
Cam kılcal tüpler çekerek mikroenjeksiyon iğneler olun. Biz bir iğne çektirme, Sutter Enstrüman CO (Model P-2000) kullanın. İğne çektirmesi programın özellikleri şunlardır:
ısı: 275 Fil: 3 vel: 37 del: 250 pul: 125
Iğneler bilinen bir su hacmi (örneğin, 1 ul) yükleyin ve ince bir sharpie elle ölçek işareti.
Sivrisinekler için bir enjeksiyon sonrası fincan kadar ayarlayın. İlk olarak 1000 ul pipet ucu kapalı dışarıdaki ucu kesilir. Sonra, bir fincan yan tarafına bir delik ve fincanda pipet kalan kısmını takın. Net veya kapak fincan üstüne koyun.
Iki strafor kutulara buz ile doldurun. Place stereomicroscope altında buz kutusu # 1 ve buz üzerinde bir cam Dürbün yerleştirin.
CO 2 ve buz kutusu # 2 yetişkin ile fincan yetişkin sivrisinek anestezisi.
DsRNA enjeksiyon için iğne hazırlayın. (Enjeksiyon blok aşağıdaki açıklamayı görmek için), enjeksiyon blok plastik hortum dsRNA ile dolu iğne koyun.
Fincan saat camı forseps ile bir anestezi sivrisinek hareket ettirin. Sivrisinek manikür enjeksiyon iğne ucu kırın. Bu sivrisinek atın.
Enjeksiyon için iğne sivrisinek toraks içine eklenir. Serbest elinizle "dinlenme pozisyonu", "enjeksiyon pozisyonu" enjektörü valf ayarlamak ve piston dsRNA, istenilen miktarda enjekte edilmiş kadar sıkıştırabilirsiniz.
Enjeksiyon sonrası kabına yerleştirin sivrisinek enjekte etti.
Enjeksiyon bloğu kurmak
Bir kül engellemek için, 50 ml şırınga Fix.
Şırınganın sonuna kadar en az 2 hava çıkışları ile ayarlanabilir bir 1-yollu vana takın.
Hava geçirmez bir plastik hortum, 1 hava prize takın.
Hortumun ucunu bir mikropipet adaptörü takın.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.