The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.
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Department of Physiology and Biophysics, University of California, Irvine (UCI)
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Beeton, C., Garcia, A., Chandy, K. G. Induction and Clinical Scoring of Chronic-Relapsing Experimental Autoimmune Encephalomyelitis. J. Vis. Exp. (5), e224, doi:10.3791/224 (2007).
एकाधिक काठिन्य (एमएस) केंद्रीय तंत्रिका तंत्र (CNS) प्रणाली है कि आमतौर पर युवा वयस्कों को प्रभावित करता है एक जीर्ण सूजन की बीमारी है. यह demyelination और मस्तिष्क और रीढ़ की हड्डी में फैलाया क्षेत्रों में glial डरा द्वारा विशेषता है. इन घावों तंत्रिका प्रवाहकत्त्व बदलने और अक्षम न्यूरोलॉजिकल घाटा है कि CNS (जैसे paraparesis, पक्षाघात, असंयम अंधापन,) में demyelinated सजीले टुकड़े के स्थान के साथ बदलती प्रेरित.
प्रायोगिक autoimmune Encephalomyelitis (EAE) एमएस के लिए एक मॉडल है. EAE पहली बार मानव में रेबीज के खिलाफ टीकाकरण के दौरान गलती से, प्रेरित खरगोश स्पाइनल तार पर हो वायरस का उपयोग करते हुए. निष्क्रिय वायरस के साथ रीढ़ की हड्डी में इंजेक्शन के Residues सीएनएस रोग प्रेरित किया. इन टिप्पणियों के बाद, EAE पहला मॉडल की एक गैर मानव प्राइमेट नदियों द्वारा homogenate और 1935 में Schwenther सीएनएस के साथ प्रतिरक्षित में वर्णित किया गया था. EAE के बाद प्रजाति की एक किस्म में उत्पन्न किया गया और विभिन्न प्रजातियों / तनाव पर निर्भर करता है और प्रतिजन इस्तेमाल किया immunizing पाठ्यक्रम का पालन कर सकते हैं. उदाहरण के लिए, सहायक के साथ पायसन में माइलिन बुनियादी प्रोटीन के साथ लुईस चूहों immunizing EAE के एक तीव्र मॉडल लाती है, जबकि एक ही प्रतिजन गिनी सूअरों में एक पुरानी बीमारी लाती है.
EAE मॉडल यहाँ वर्णित डीए चूहे रीढ़ की हड्डी के खिलाफ पूरा है Freund सहायक में पायस में डीए चूहों immunizing से प्रेरित है. चूहे 7-14 के बाद टीकाकरण दिनों के भीतर एक आरोही झूलता हुआ पक्षाघात का विकास. नैदानिक लक्षण कई सप्ताह से अधिक relapsing-remitting के पाठ्यक्रम का पालन करें. पैथोलॉजी सीएनएस और demyelination सजीले टुकड़े में बड़े प्रतिरक्षा पैठ से पता चलता है. EAE के साथ जानवरों के लिए देखभाल करने के लिए विशेष कारणों से वीडियो के अंत में वर्णित हैं.
प्रेरण और जीर्ण - relapsing EAE के निगरानी
पायस पूरक पूरा Freund सहायक जोडी जलीय समाधान में प्रतिजन की एक 1:1 मिश्रण है. यह बहुत महत्वपूर्ण है और दूसरे दौर की तरह नहीं सहायक प्रतिजन जोड़ने!
वहाँ कचरे का एक बहुत कुछ है जब बना रही है और एक रासायनिक पायस इंजेक्शन. हमेशा 1.5 या 2 बार तुम क्या जरूरत से अधिक तैयार.
Autoclaved मोर्टार, मूसल, कांच के सीरिंज, और पुलों का प्रयोग करें. सभी प्लास्टिक बाँझ होना चाहिए. तैयारी एक नियमित प्रयोगशाला बेंच पर किया जा सकता है.
1. पूरक सहायक तैयार
माइकोबैक्टीरियम तपेदिक (Difco सूची # 231,141) और एक मोर्टार में जगह के 30 मिलीग्राम वजन. पतली पाउडर में भी मुश्किल दबाने के बैक्टीरिया को तोड़ने से बचने के बिना बनाओ. Freund सहायक H37Ra (Difco सूची # 231,131) और मिश्रण को पूरा करने के 10 मिलीलीटर जोड़ें. यह पूरक सहायक अब 4 मिलीग्राम / एमएल माइकोबैक्टीरियम क्षयरोग शामिल हैं. एक ट्यूब के लिए स्थानांतरण.
2. रीढ़ की हड्डी homogenate की तैयारी
डीए चूहों (उम्र / उदासीन लिंग) और स्टोर -80 में जमे हुए डिग्री सेल्सियस से रीढ़ की हड्डी डोरियों लीजिए 01:01 (वज़न: मात्रा) मिश्रण के लिए पर्याप्त है पूरक सहायक के साथ जमे हुए स्पाइनल तार का वजन. के रूप में रीढ़ की हड्डी डोरियों के रूप में ठीक एक धार के साथ संभव कीमा, 1 अनुभाग में इस्तेमाल किया मोर्टार के लिए स्थानांतरण, और मूसल के साथ एक पेस्ट करें.
3. पायस की तैयारी
4. चूहों का टीकाकरण
क्लीनिकल स्कोरिंग:
0: कोई रोग
0.5: बाहर का लंगड़ा पूंछ
1: लंगड़ा पूंछ
2: हल्के paraparesis, गतिभंग
3: मध्यम paraparesis, समय समय पर चूहों यात्राएं
3.5: एक पिछले अंग झोले के मारे हुए है, अन्य चाल
4: पूरा हिंद अंग पक्षाघात
5: पूरी तरह से पिछले अंग पक्षाघात और असंयम
6: मरणासन्न, साँस लेने में कठिनाई, खाने या नहीं पी है. तुरंत euthanize.
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इस प्रोटोकॉल के लिए कुछ महत्वपूर्ण विचार कर रहे हैं.
डीए चूहों के जेनेटिक्स थोड़ा ब्रीडर जो वे से खरीदे जाते हैं पर निर्भर करता है अलग होगा. इन मतभेदों को बढ़ाने या चूहों की संवेदनशीलता के प्रेरण EAE कम हो सकती है. यदि आपका चूहों अधिक EAE करने के लिए अतिसंवेदनशील हैं आप गैर पूरक पूरा Freund सहायक या अधूरा Freund सहायक का उपयोग करके प्रतिरक्षण की ताकत को कम करना चाहते हैं जाएगा. आप भी पायस तैयार करने से पहले इंजेक्शन पायस की राशि को कम करने या नमक के साथ रीढ़ की हड्डी homogenate गिराए पर विचार कर सकते हैं. यदि आपके चूहों EAE के नैदानिक लक्षण immunizing पायस अपने आवास की सुविधा के सफाई की जांच पूरी शक्ति का उपयोग विकसित नहीं है. परजीवी (जैसे pinworm) के साथ संक्रमित चूहे EAE विकास नहीं होगा. आप फिल्टर में सबसे ऊपर के साथ autoclaved पिंजरों में क्लीनर की शर्तों के तहत अपने पशुओं के आवास, और उन्हें acidified पानी विज्ञापन libitum (acidified पानी तैयार करने के लिए प्रोटोकॉल संलग्न है) देने पर विचार कर सकते हैं.
पानी में तेल पायस किया जाना चाहिए इतना है कि तेल सहायक में पूरी तरह से आप ड्रॉप द्वारा ड्रॉप जोड़ने प्रतिजन कोट. एक रासायनिक पायस तैयार दूसरे दौर की तरह (तेल में पानी) मोटी के रूप में हो जाएगा, लेकिन encephalitogenic नहीं होगा.
चूहे के अनुकूल जानवर हैं अगर वे अपने हैंडलर के आदी रहे हैं, इसलिए यह encephalitogenic पायस के इंजेक्शन से पहले एक दैनिक आधार पर उन्हें धीरे संभाल के लिए एक अच्छा विचार है. यह तनाव और एक काटने का खतरा कम हो जाएगा.
गंभीर EAE (3 या अधिक के स्कोर) के साथ पशु विशेष देखभाल की जरूरत है. चूहे पूंछ द्वारा बल्कि लेकिन शरीर द्वारा कभी नहीं उठाया जाना चाहिए. यह भी बीमार पशुओं में तनाव को कम करने के लिए और अधिक महत्वपूर्ण है. यह बहुत महत्वपूर्ण है करने के लिए सुनिश्चित करें कि सभी जानवरों बिस्तर में भोजन और जेल पैक डालने और पानी की बोतलों पर लंबे समय से sipper ट्यूबों उपलब्ध कराने के द्वारा भोजन और पानी के लिए उपयोग किया है. EAE के साथ चूहे खाने और पीने के जारी रखने के लिए, यदि एक जानवर रोक या तो खाने या पीने के अपने संस्थान के पशु चिकित्सक से परामर्श या जानवर euthanize. बीमार चूहों स्वस्थ पशुओं से अलग किया जाना चाहिए करने के लिए सुनिश्चित करें के लिए वे लगातार नहीं कुचल कर रहे हैं, लेकिन अकेले छोड़ने चूहों से बचने के बाद से वे सामाजिक जानवर हैं और कंपनी की जरूरत है.
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सीबी और KGC Airmid इंक के लिए और सह संस्थापक सलाहकार हैं
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| Complete Freund’s Adjuvant | Reagent | Fisher Scientific | DF 311-360-5 | Manufactured by Difco |
| Mycobacterium tuberculosis H37Ra | Reagent | Fisher Scientific | DF3114-33-8 | Manufactured by Difco |
| DA rat | Animal | Harlan Laboratories | Females, 7-9 weeks old. | |
| Glass syringes - 5 ml | Tool | Fisher Scientific | 14-823-10 B | |
| Metal bridge - 18G | Tool | Fisher Scientific | 14-825-17L | |
| Luer Lok plastic syringes - 3 ml | Tool | BD Biosciences | 309585 | |
| Needles - 20G 1 1/2 | Tool | Fisher Scientific | 14-826-5C |
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ReplyPosted by: AnonymousJuly 24, 2007, 4:14 PM