The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.
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The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.
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एक bioanalytical परख के विकास के एक MRM पद्धति के विकास के रूप में के रूप में अच्छी तरह से एक क्रोमैटोग्राफी विधि है, जो ब्याज की analyte चोटी की स्थिति अंतर्जात पृष्ठभूमि संकेत से दूर की आवश्यकता की आवश्यकता है. Xevo ™ TQ-एस राडार ™ प्रौद्योगिकी के साथ मिलकर quadrupole मास स्पेक्ट्रोमीटर पूर्ण स्कैन और एमएस / एमएस MRM डेटा के साथ - साथ संग्रह की अनुमति देता है, बेहद पद्धति के विकास की प्रक्रिया को सरल बनाने.
Bioanalysis विधि करने के लिए प्रभावी होने के लिए यह हस्तांतरणीय, प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य है, और मजबूत किया जाना चाहिए. एक विश्वसनीय नियंत्रण रेखा / एमएस / एमएस bioanalysis परख के विकास के लिए नमूना तैयार करने की पूरी तरह से अनुकूलन, एमएस का पता लगाने, और क्रोमैटोग्राफी स्थितियों शामिल है. यह अक्सर एक समय लेने वाली प्रक्रिया हो सकता है, analyte चोटियों (ओं) की आवश्यकता होती अंतर्जात मैट्रिक्स घटक है कि आयन दमन और परख irreproducibility कारण से हल किया जा. यह अक्सर कई विश्लेषणात्मक रन आवश्यक MRM, उत्पाद आयन, और पूर्ण स्कैन डेटा प्राप्त करने के लिए की आवश्यकता है.
एक उपन्यास दोहरी स्कैन डेटा संग्रह क्षमता bioanalysis विधि के विकास को आसान बनाने के लिए - यहाँ वर्णित Xevo मास ™ TQ-एस स्पेक्ट्रोमीटर के राडार के साथ उपयोग ™ प्रौद्योगिकी है. TQ-एस Xevo एक उपन्यास टक्कर सेल डिजाइन जो पूर्ण स्कैन एमएस और MRM डेटा के एक साथ संग्रह के लिए अनुमति देता है रोजगार.
मैं सरलीकृत नियंत्रण रेखा / एमएस / एमएस राडार प्रौद्योगिकी के साथ विकास Bioanalytical विधि
II.Representative परिणाम bioanalysis ™ राडार प्रौद्योगिकी का उपयोग करना
Chromatograms थे एक बुनियादी जलीय बफर (1 छवि) का उपयोग कर से प्राप्त chromatograms के साथ तुलना में एक परंपरागत अम्लीय जलीय बफर और acetonitrile जैविक आपरिवर्तक ढाल का उपयोग कर प्राप्त की. नियंत्रण रेखा / एमएस / एमएस चूहे प्लाज्मा में ranitidine हाइड्रोक्लोराइड के विश्लेषण में, राडार MRM आंकड़ों से पता चलता है कि एक अम्लीय जलीय आपरिवर्तक के साथ, ranitidine unretained, chromatographic प्रणाली के शून्य के साथ eluting. हालांकि, जब एक बुनियादी जलीय आपरिवर्तक कार्यरत है, यौगिक बनाए रखा है, 0.9 मिनट में eluting. और / मीटर की पूर्ण स्कैन माता पिता Z = 184 डेटा बताते हैं कि दोनों अम्लीय और बुनियादी जुदाई के साथ, analyte फॉस्फोलिपिड और मैट्रिक्स में अन्य अंतर्जात सामग्री से हल हो गई है.
एक बुनियादी जलीय बफर के साथ एक मेथनॉल जैविक आपरिवर्तक का उपयोग 1.30 मिनट analyte प्रतिधारण वृद्धि हुई है. analyte संकेत प्रतिक्रिया भी 4 (छवि 2) का एक पहलू की वृद्धि हुई थी. हालांकि, एक साधारण 5-95% बुनियादी मेथनॉल ढाल के साथ, पूर्ण स्कैन डेटा से पता चला है कि analyte चोटी नमूने में अंतर्जात सामग्री के साथ सह - eluted है. इस सह - elution आयन दमन और परख irreproducibility का कारण बन सकता है.
अंतर्जात सामग्री से analyte चोटी को हल करने के लिए, ग्रैडिएंट steepness समायोजित किया गया था. Xevo TQ-एस राडार कार्यक्षमता जल्दी से सबसे अच्छा सबसे अच्छा throughput के साथ नियंत्रण रेखा शर्तों का चयन करने के लिए इस्तेमाल किया गया था. अंतिम chromatographic स्थितियों एक 95% 2-2.5 मिनट से कार्बनिक धोने (3 छवि) के साथ 2 मिनट में 15-60% मेथनॉल की एक ढाल थे. analyte चोटी अच्छी तरह से नमूने में अंतर्जात सामग्री के रूप में पूर्ण स्कैन ट्रेस, हरे रंग में से देखा से हल हो गई है. यह दृष्टिकोण भी नमूना विश्लेषण के दौरान इस्तेमाल किया जा सकता मादक पदार्थों से संबंधित चयापचयों, सह प्रशासित चिकित्सा, और मैट्रिक्स में बदलाव जो परिणाम की सच्चाई को प्रभावित कर सकता है के लिए जाँच करने के लिए.
चित्रा 1: Chromatograms एक बुनियादी जलीय बफर का उपयोग कर से प्राप्त chromatograms के साथ तुलना में एक परंपरागत अम्लीय जलीय बफर और acetonitrile जैविक आपरिवर्तक ढाल का उपयोग कर प्राप्त है. एक अम्लीय जलीय आपरिवर्तक के साथ, ranitidine unretained है, शून्य से eluting. जब एक बुनियादी जलीय आपरिवर्तक कार्यरत है, यौगिक बनाए रखा है, 0.9 मिनट में eluting. और / मीटर की पूर्ण स्कैन माता पिता Z = 184 डेटा बताते हैं कि दोनों अम्लीय और बुनियादी जुदाई के साथ, analyte फॉस्फोलिपिड और मैट्रिक्स में अन्य अंतर्जात सामग्री से हल हो गई है.
चित्रा 2: एक बुनियादी जलीय बफर के साथ एक मेथनॉल जैविक आपरिवर्तक का उपयोग 1.30 मिनट ranitidine हाइड्रोक्लोराइड प्रतिधारण वृद्धि हुई है. analyte संकेत प्रतिक्रिया भी 4 का एक पहलू की वृद्धि हुई थी. हालांकि, पूर्ण स्कैन डेटा analyte चोटी सह नमूना जब एक साधारण 5-95% बुनियादी मेथनॉल ढाल कार्यरत है अंतर्जात सामग्री के साथ eluted पता चलता है.
Bioanalytical पद्धति के विकास में काफी Xevo TQ-एस राडार प्रौद्योगिकी का उपयोग करने के लिए सरल है. अंतर्जात नमूना मैट्रिक्स analyte चोटी के रूप में एक ही समय पर निगरानी करने के लिए, की सुविधा के लिए एक साथ पूर्ण स्कैन के रूप में के रूप में अच्छी तरह से डेटा एमएस / एमएस और MRM डेटा प्राप्त करने की क्षमता की अनुमति देता है:
इस लेख के लेखक वाटर्स निगम के एक कर्मचारी है.
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Xevo TQ-S Mass Spectrometer | Waters | More information available at http://www.waters.com | Mass Spectrometer |
| ACQUITY UPLC System | Waters | More information available at http://www.waters.com | Chromatography System |
| ACQUITY UPLC BEH C18, 2.1 x 50 mm, 1.7 m Column | Waters | More information available at http://www.waters.com | Chromatography Column |
