Förenklad LC / MS / MS Bioanalytiska Metodutveckling med radarteknik - Annons

Sign in to register to receive emails with product information.

Utvecklingen av en bioanalytiska analys kräver utveckling av ett MRM metod samt en kromatografi metod, som kräver placering av analyttoppen av intresse från den endogena bakgrunden signalen. Den Xevo ™ TQ-S tandem quadrupol masspektrometer med radar ™-teknik gör det möjligt att samtidigt samla in fullständig genomsökning och MS / MS MRM data, kraftigt förenkla processen metodutveckling.

För en bioanalys metod att vara effektiv måste den vara överförbara, reproducerbar och robust. Utvecklingen av ett pålitligt LC / MS / MS bioanalys analys innebär noggrann optimering av provberedning, MS detektion och villkor kromatografi. Detta kan ofta vara en tidskrävande process som kräver analyt toppar (s) lösas från endogen matriskomponenterna som orsakar jon förtryck och analys irreproducibility. Detta kräver ofta flera analytiska går att skaffa sig nödvändig MRM, produkt-jon och fullständiga uppgifter skanning.

Beskrivs här är användningen av Xevo ™ TQ-S masspektrometer med radar ™-teknik - en ny dubbel-scan datainsamling förmåga att förenkla utvecklingen bioanalys metod. Den Xevo TQ-S sysselsätter en ny konstruktion kollision cell som möjliggör att samtidigt samla in fullständig genomsökning MS och MRM data.

I. Förenklad LC / MS / MS Bioanalytiska Metod utveckling med radarteknik

1. För att visa förenklad LC / MS / MS bioanalytiska metodutveckling med radarteknik, var kromatografi utförs på en Waters ACQUITY UPLC ®-systemet, med hjälp av en ACQUITY UPLC Bridged Ethyl Hybrid C18 kolonn.
   
   LC Villkor:
   ACQUITY UPLC BEH C18 kolonn 2,1 x 50 mm, 1,7 ìm
   Mobil fas:
   1. 0,1% myrsyra eller 0,1% vattenlösning ammoniumhydroxid
   2. Metanol eller acetonitril
   
   Fallhöjd: 5-95% ekologiskt under 0-2 minuter med en flödeshastighet av 600 ml / min.
2. Analyterna var elueras med en flödeshastighet av 600 ml / min med en 5 till 95% organisk lutning under 2 minuter, där 0,1% vattenlösning myrsyra eller 0,1% vattenlösning ammoniumhydroxid byttes för metanol eller acetonitril.
3. Masspektrometri detektion utfördes på en Waters Xevo ™ TQ-S masspektrometer används i en positiv jon elektrospray MRM-läge, med samtidig förvärv av fullständig genomsökning data.
   
   MS Villkor:
   Positiv jon elektrospray:
   MRM: 315> 129
   Fullständig skanning MS: 50-500 m / z på 5000 amu / sek.
   Produkt ion scan: förstadier till m / z = 184 200 till 600
4. För att illustrera användningen av radarteknik, var den gemensamma H2-receptorantagonist ranitidin hydroklorid spetsade till råtta plasma, fälls ut med acetonitril (2:1), och analyseras med hjälp av en UPLC / MS / MS-systemet.

II.Representative Resultat Bioanalys hjälp av radar ™-teknik

Kromatogram som erhålls med hjälp av en vanlig sur vattenlösning buffert och acetonitril organisk modifierare lutning jämfördes med kromatogram som erhålls med hjälp av en grundläggande vattenlösning buffert (Fig. 1). I LC / MS / MS-analys av ranitidin hydroklorid i råtta plasma visar RADAR MRM data som med en sur vattenlösning modifierare är ranitidin unretained, eluerar med att ogiltigförklara det kromatografiska systemet. Men när en grundläggande vattenlösning modifierare är anställd, är den förening kvar, eluerande på 0,9 min. Hela skanna och föräldrar till m / z = 184 data visar att med både sura och basiska separation, är analyten löst från fosfolipid och andra kroppsegna ämnen i matrisen.

Användningen av en metanol organisk modifierare med en grundläggande vattenlösning buffert ökat analyten retention till 1,30 min. Analyten signalen svar var också ökat med en faktor 4 (Fig. 2). Men med en enkel 5-95% basic-metanol gradient visade fullständig genomsökning data som analyttoppen samarbete elueras med endogena material i provet. Detta samarbete eluering kan orsaka jon förtryck och analys irreproducibility.

För att lösa analyttoppen från den endogena materialet var lutningen brant justeras. Den Xevo TQ-S RADAR funktionalitet används för att snabbt välja ut de bästa LC villkor med de bästa genomströmning. Den slutliga kromatografi var en lutning på 15-60% metanol under 2 minuter med 95% organisk tvätta 2 till 2,5 minuter (bild 3). Den analyttoppen är väl löst från det kroppsegna materialet i provet sett från fullständig genomsökning spår, i grönt. Denna metod kan också användas under provanalys för att kontrollera narkotikarelaterade metaboliter, administrerat terapier, och variationer i matrisen som kan påverka sanningshalten i resultaten.

Figur 1: kromatogram som erhålls med hjälp av en vanlig sur vattenlösning buffert och acetonitril organisk modifierare lutning jämfört med kromatogram som erhålls med hjälp av en grundläggande vattenlösning buffert. Med en sur vattenlösning modifierare är ranitidin unretained, eluerar med ogiltig. När en grundläggande vattenlösning modifierare är anställd, är den förening kvar, eluerande på 0,9 min. Hela skanna och föräldrar till m / z = 184 data visar att med både sura och basiska separation, är analyten löst från fosfolipid och andra kroppsegna ämnen i matrisen.

Figur 2: Användning av en metanol organisk modifierare med en grundläggande vattenlösning buffert ökade behålla ranitidin hydrochloride att 1,30 min. Analyten signalen svar var också ökat med en faktor 4. Visar dock fullständig genomsökning data analyttoppen samarbete elueras med endogena materialet i provet när en enkel 5-95% basic-metanol gradient är anställd.

Figur 3: Den sista kromatografi för ranitidin hydroklorid ingår en lutning på 15-60% metanol under 2 minuter med 95% organisk tvätta 2 till 2,5 minuter. Den analyttoppen är väl löst från det kroppsegna materialet i provet sett från fullständig genomsökning spår, i grönt.

Bioanalytiska metodutveckling är betydligt enklare att använda Xevo TQ-S radarteknik. Förmågan att samtidigt få fullständig genomsökning data samt MS / MS och MRM uppgifter gör den endogena provmatrisen som skall övervakas samtidigt som analyttoppen, underlätta:

• Snabbare metodutveckling
• Eliminering av behovet av upprepade injektioner att få bakgrundsinformation signal
• Matrix övervakning under provanalys
• Enkel felsökning
• Upptäckt av in vivo-metaboliter under preklinisk och klinisk utveckling

Författaren till denna artikel är en anställd hos Waters Corporation.

Materials: Förenklad LC / MS / MS Bioanalytiska Metodutveckling med radarteknik - Annons

Ask the Author: Förenklad LC / MS / MS Bioanalytiska Metodutveckling med radarteknik - Annons