Radar Teknolojisi ile Basitleştirilmiş LC / MS / MS Biyoanalitik Yöntem Geliştirme - REKLAM

Sign in to register to receive emails with product information.

Biyoanalitik bir testin geliştirilmesi, MRM yöntemi geliştirme gibi endojen arka plan sinyali uzak ilgi analit tepe konumlandırma gerektiren bir kromatografi yöntemi, gerektirir. RADAR ™ Teknolojisi ile Xevo ™ TQ-S tandem quadrupole kütle spektrometresi yöntemi geliştirme süreci büyük ölçüde basitleştirerek, aynı anda tam bir tarama ve MS / MS MRM veri toplama sağlar.

Etkili olmak üzere bir bioanalysis yöntemi için, devredilemez, tekrarlanabilir ve sağlam olmalıdır. Güvenilir bir LC / MS / MS bioanalysis testin geliştirilmesi, numune hazırlama kapsamlı optimizasyonu, MS algılama, ve kromatografi koşulları içerir. Bu genellikle piklerinin (ler) iyon bastırma ve tahlil irreproducibility neden olan endojen matris bileşenleri çözülecektir gerektiren, zaman alıcı bir süreç olabilir. Bu genellikle birden fazla analitik çalışır gerekli MRM, ürün iyon ve tam tarama verileri elde etmek için gereklidir.

Bioanalysis yöntem geliştirme basitleştirmek için yeni bir çift tarama veri toplama yeteneği burada açıklanan RADAR ile Xevo ™ TQ-S Kütle Spektrometresi kullanımı ™ Teknolojisi. Xevo TQ-S aynı anda tam tarama MS ve MRM veri toplanması için izin veren bir roman çarpışma hücre tasarımı kullanmaktadır.

RADAR Teknolojisi ile I. Basitleştirilmiş LC / MS / MS Biyoanalitik Yöntem Geliştirme

1. RADAR teknolojisi ile LC / MS / MS biyoanalitik yöntem geliştirme basitleştirilmiş göstermek için, kromatografi, bir ACQUITY UPLC Köprülü Etil Hibrid C18 kolon kullanarak Waters ACQUITY UPLC ® Sistemi yapıldı.
   
   LC KoÅŸullar:
   ACQUITY UPLC BEH C18 kolon 2,1 x 50 mm, 1.7 mm
   Mobil Faz:
   1. % 0.1 formik asit ya da% 0,1 sulu amonyum hidroksit
   2. Metanol veya asetonitril
   
   Eğim:% 5-95 600 mcL / dk akış hızında 0-2 dakika içinde organik.
2. Analitlerin% 0,1 sulu formik asid veya% 0.1 sulu amonyum hidroksit, metanol veya asetonitril alışverişinde 2 dakika içinde% 5 ila% 95 organik degrade, 600 mcL / dk akış hızında kolonda sürüklenecektir.
3. Kütle spektrometresi algılama Waters Xevo tam tarama verilerinin eş zamanlı olarak satın alarak, pozitif iyon elektrosprey MRM modunda işletilen ™ TQ-S Kütle Spektrometresi yapıldı.
   
   MS KoÅŸullar:
   Pozitif iyon elektrosprey:
   MRM: 315> 129
   Tam tarama MS: (50-500) 5000 amu / sn m / z.
   Ürün iyon tarama: 200-600 gelen m / z = 184 Öncüleri
4. RADAR teknoloji kullanımını göstermek için, ortak bir H2 reseptör antagonisti ranitidin hidroklorür, sıçan plazma çivili asetonitril (2:1) ile çöktürülmüş ve UPLC / MS / MS sistemi ile analiz.

II.Representative Sonuçlar Bioanalysis RADAR ™ Teknolojisi Kullanımı

Kromatogramlar temel sulu bir tampon (Şekil 1) kullanılarak elde edilen kromatogramlar ile karşılaştırıldı geleneksel bir asidik sulu tampon ve asetonitril organik değiştirici degrade kullanılarak elde. Sıçan plazma ranitidin hidroklorür LC / MS / MS analizi, RADAR MRM veri asidik bir sulu değiştirici, ranitidin, kromatografik sistem geçersiz ile salınımlı unretained olduğunu gösterir. Ancak, temel bir sulu değiştirici istihdam, bileşik, 0,9 dakika az salınımlı korunur. Tam tarama ve veliler m / z = 184 veri hem asidik ve bazik ayırma, analit matris fosfolipid ve diğer endojen maddeler giderilmiş olduğunu göstermektedir.

Metanol organik değiştirici temel sulu tampon kullanımı, 1.30 dk analit tutma arttı. Analit sinyali tepki de bir faktör 4 (Şekil 2) artmıştır. Ancak, basit bir temel metanol 5-95% degrade, tam tarama verileri analit tepe örnek endojen malzeme ile birlikte yıkandı, bu ortaya çıkardı. Bu ko-elüsyon iyon bastırma ve tahlil irreproducibility neden olabilir.

Endojen malzemeden analit pik gidermek için, degrade eğimi ayarlanabilir. Xevo TQ-S RADAR işlevselliği, hızlı bir şekilde en iyi verim ile en iyi LC koşulları seçmek için kullanılır oldu. Son kromatografik koşullar,% 2-2.5 dakika% 95 organik yıkama (Şekil 3) ile 2 dakika içinde 15-60 metanol bir degrade. Analit tepe yeşil tam tarama iz görüldüğü gibi örnek endojen malzemeden çözümlenir. Bu yaklaşım aynı zamanda uyuşturucu metabolitleri, birlikte uygulanan tedaviler ve sonuçların doğruluğu etkileyebilecek matris farklılıklar kontrol etmek için numune analizi sırasında kullanılabilir.

Şekil 1: Kromatogramlar temel sulu tampon kullanarak elde kromatogramlar ile karşılaştırıldığında geleneksel bir asidik sulu tampon ve asetonitril organik değiştirici degrade kullanılarak elde. Sulu asidik bir değiştirici, ranitidin, unretained boşluğu ile salınımlı. Temel bir sulu değiştirici istihdam, bileşik 0.9 min salınımlı korunur. Tam tarama ve veliler m / z = 184 veri hem asidik ve bazik ayırma, analit matris fosfolipid ve diğer endojen maddeler giderilmiş olduğunu göstermektedir.

Şekil 2: metanol organik değiştirici bir temel sulu tampon kullanımı 1.30 dakika ranitidin hidroklorür tutma arttı. Analit sinyal yanıt da 4 kat artmıştır. Ancak, tam tarama verileri 5-95% basit bir temel-metanol degrade istihdam örnek endojen malzeme ile birlikte yıkandı, analit pik ortaya koymaktadır.

Şekil 3: ranitidin hidroklorür için son kromatografik koşullar% 2-2.5 dakika% 95 organik yıkama ile 2 dakika içinde 15-60 metanol bir degrade dahildir. Analit tepe yeşil tam tarama iz görüldüğü gibi örnek endojen malzemeden çözümlenir.

Biyoanalitik yöntem geliştirme Xevo TQ-S RADAR teknolojisi kullanılarak önemli ölçüde basitleştirilmiştir. Aynı anda tam tarama verilerin yanı sıra MS / MS ve MRM veri elde etmek için yeteneği endojen numune matrisi kolaylaştırılması, analit zirve aynı zamanda kontrol edilmesi için izin verir:

• Daha hızlı yöntem geliÅŸtirme
• Arka plan sinyal elde etmek için tekrar enjeksiyonlar için ihtiyacı ortadan kaldırılması
• Matrix izlenmesi numune analizi sırasında
• Kolay sorun giderme
• Klinik öncesi ve klinik geliÅŸtirme sırasında in vivo metabolitlerin Algılama

Bu makalenin yazarı Waters Corporation'ın bir çalışanı.

Materials: Radar Teknolojisi ile Basitleştirilmiş LC / MS / MS Biyoanalitik Yöntem Geliştirme - REKLAM

Ask the Author: Radar Teknolojisi ile Basitleştirilmiş LC / MS / MS Biyoanalitik Yöntem Geliştirme - REKLAM