Semplificata LC / MS / MS per lo sviluppo Metodo Bioanalytical con tecnologia radar - PUBBLICITA '

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Lo sviluppo di un test bioanalitici richiede lo sviluppo di un metodo MRM così come un metodo di cromatografia, che richiede il posizionamento del picco dell'analita di interesse di distanza dal segnale di fondo endogeno. Il ™ TQ-S Xevo spettrometro di massa a quadrupolo tandem con RADAR Technology ™ permette la raccolta simultanea di scansione completa e MS / MS dati MRM, semplificando enormemente il processo di sviluppo del metodo.

Per un metodo di analisi biologiche per essere efficace deve essere trasferibile, riproducibile e robusto. Lo sviluppo di un affidabile LC / MS / MS saggio bioanalisi comporta la completa ottimizzazione della preparazione dei campioni, rilevamento MS, e le condizioni di cromatografia. Questo spesso può essere un processo che richiede tempo, che richiede i picchi degli analiti (s) essere risolto da componenti della matrice endogena che provocano la soppressione di ioni e irriproducibilità test. Questo richiede spesso più corre analitici per acquisire le necessarie MRM, agli ioni di prodotto e dati di scansione completa.

Qui descritto è l'uso di Xevo ™ TQ-S spettrometro di massa con RADAR ™ Technology - un romanzo a doppia scansione capacità di raccolta dati per semplificare metodo di sviluppo bioanalisi. Il Xevo TQ-S si avvale di un romanzo di progettazione cella di collisione che permette la raccolta simultanea di scansione completa MS e dati MRM.

I. semplificato LC / MS / MS per lo sviluppo Metodo Bioanalytical Con la tecnologia radar

1. Per dimostrare semplificata LC / MS / MS sviluppo bioanalitici metodo con tecnologia radar, cromatografia è stata effettuata su un sistema Waters ACQUITY UPLC ®, utilizzando un UPLC ACQUITY Bridged colonna Hybrid etil C18.
   
   LC Condizioni:
   ACQUITY UPLC BEH C18 colonna 2,1 x 50 mm, 1,7 micron
   Fase mobile:
   1. 0,1% di acido formico o 0,1% di idrossido di ammonio, acquoso
   2. Metanolo o acetonitrile
   
   Pendenza: 5-95% organico oltre 0-2 minuti ad una portata di 600 microlitri / min.
2. Gli analiti sono stati eluiti con una portata di 600 microlitri / min con un gradiente 5 al 95% organico più di 2 minuti, dove è stato scambiato lo 0,1% acido formico acquosa o 0,1% di idrossido di ammonio acquosa per metanolo o acetonitrile.
3. Spettrometria di massa di rilevazione è stata effettuata su un Xevo Waters ™ TQ-S spettrometro di massa utilizzato in un modo positivo elettrospray agli ioni di MRM, con acquisizione contemporanea dei dati scansione completa.
   
   MS Condizioni:
   Ione elettrospray positivo:
   MRM: 315> 129
   Scansione completa MS: 50-500 m / z a 5000 amu / sec.
   Prodotto agli ioni di scansione: Precursori di m / z = 184 200-600
4. Per illustrare l'utilizzo della tecnologia radar, i comuni cloridrato recettore H2 antagonista ranitidina è stata aggiunta in plasma di ratto, precipitato con acetonitrile (2:1), e analizzati utilizzando un UPLC / MS / MS di sistema.

II.Representative Risultati bioanalisi Utilizzando RADAR â„¢ Technology

Cromatogrammi ottenuti utilizzando un convenzionale tampone acido acquoso e gradiente di acetonitrile modificatore organico sono stati confrontati con cromatogrammi ottenuti utilizzando un buffer di base acquosa (Fig. 1). In LC / MS / MS di cloridrato ranitidina nel plasma di ratto, i dati RADAR MRM dimostra che con un modificatore acido acquoso, la ranitidina è unretained, eluizione con il vuoto del sistema cromatografico. Tuttavia, quando un modificatore di base acquosa è impiegato, il composto viene mantenuta, a eluizione di 0,9 min. La scansione completa e genitori di m / z = 184 dati mostrano che la separazione sia con acidi e basici, l'analita viene risolto da fosfolipidi e altri materiali endogeni nella matrice.

L'uso di un modificatore metanolo organica con un buffer di base acquosa aumentato il mantenimento analita a 1,30 min. La risposta del segnale dell'analita è stato anche aumentato di un fattore 4 (Fig. 2). Tuttavia, con un semplice 5-95% di base-metanolo gradiente, i dati di scansione completa ha rivelato che il picco analita co-eluiti con il materiale endogena nel campione. Questo co-eluizione può causare soppressione ionica e irriproducibilità test.

Per risolvere il picco dell'analita dal materiale endogeno, la pendenza del gradiente è stato rettificato. Il CT-S funzionalità RADAR Xevo è stato utilizzato per selezionare rapidamente le migliori condizioni LC con la più alta velocità. Le condizioni cromatografiche finali sono stati una pendenza del 15-60% metanolo oltre 2 minuti con un lavaggio del 95% organico 2-2,5 minuti (Fig. 3). Il picco analita è ben risolto dal materiale endogeno del campione come si vede dalla traccia scansione completa, in verde. Questo approccio può essere utilizzato anche durante l'analisi del campione per verificare la presenza di droga metaboliti, somministrati terapie, e le variazioni nella matrice che potrebbero influenzare la veridicità dei risultati.

Figura 1: cromatogrammi ottenuti utilizzando un convenzionale tampone acido acquoso e gradiente di acetonitrile modificatore organico rispetto ai cromatogrammi ottenuti utilizzando un buffer di base acquosa. Con un modificatore acido acquoso, la ranitidina è unretained, eluizione con il vuoto. Quando un modificatore di base acquosa è impiegato, il composto viene mantenuta, a eluizione di 0,9 min. La scansione completa e genitori di m / z = 184 dati mostrano che la separazione sia con acidi e basici, l'analita viene risolto da fosfolipidi e altri materiali endogeni nella matrice.

Figura 2: L'uso di un modificatore di metanolo organica con un buffer di base acquosa aumentato il mantenimento ranitidina cloridrato a 1,30 min. La risposta del segnale dell'analita è stato anche aumentato di un fattore 4. Tuttavia, i dati di scansione completa rivela il picco analita co-eluiti con il materiale endogeno nel campione, quando un semplice 5-95% di base-metanolo gradiente è impiegato.

Figura 3: Le condizioni finali cromatografico per la ranitidina cloridrato incluso una pendenza del 15-60% metanolo oltre 2 minuti con un lavaggio del 95% organico 2-2,5 minuti. Il picco analita è ben risolto dal materiale endogeno del campione come si vede dalla traccia scansione completa, in verde.

Lo sviluppo del metodo Bioanalytical è notevolmente semplificato utilizzando Xevo TQ-S tecnologia radar. La capacità di acquisire simultaneamente i dati di scansione completa e MS / MS e MRM dati consente la matrice del campione endogeno di monitorare allo stesso tempo come il picco dell'analita, facilitando:

• Metodo di sviluppo più veloce
• Eliminazione della necessità di iniezioni ripetute di ottenere segnale di fondo
• Monitoraggio matrice durante l'analisi del campione
• Facile risoluzione dei problemi
• Rilevamento di metaboliti in vivo durante lo sviluppo pre-clinico e clinico

L'autore di questo articolo è un dipendente di Acque Corporation.

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