Simplifié LC / MS / MS de développement de méthodes bioanalytiques avec la technologie radar - PUBLICITÉ

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Le développement d'un dosage de bioanalyse nécessite le développement d'une méthode MRM ainsi que d'une méthode de chromatographie, qui nécessite un positionnement du pic de l'analyte d'intérêt depuis le signal de fond endogène. Le Xevo ™ TQ-S spectromètre de masse en tandem quadripolaire avec RADAR ™ Technology permet la collecte simultanée des analyse complète et MS / MS MRM, largement simplifier le processus de développement de méthode.

Pour une méthode de bioanalyse pour être efficace il doit être transférable, reproductible et robuste. Le développement d'un dosage de la bioanalyse LC / MS / MS fiable passe par l'optimisation approfondie de la préparation des échantillons, la détection MS, et les conditions de chromatographie. Cela peut souvent être un processus fastidieux, nécessitant des sommets analyte (s) être résolu à partir des composants matriciels endogènes qui entraînent la suppression d'ions et de irreproducibility dosage. Cela nécessite souvent plusieurs séries d'analyses d'acquérir les MRM nécessaire, d'ions produit, et des données scan complet.

Décrit ici est l'utilisation d'un spectromètre de masse Xevo ™ TQ-S avec RADAR ™ Technology - un roman à double scan capacité de collecte de données pour simplifier le développement des méthodes de bioanalyse. Le Xevo TQ-S emploie un plan de collision roman cellulaire qui permet la collecte simultanée de MS et analyse complète des données de MRM.

I. simplifié LC / MS / MS de développement de méthodes bioanalytiques Avec la technologie RADAR

1. Pour démontrer simplifiée LC / MS / MS de développement de méthodes bioanalytiques avec la technologie radar, la chromatographie a été réalisée sur une ACQUITY UPLC Waters System ®, en utilisant une ACQUITY UPLC éthylique Bridged hybride colonne C18.
   
   Conditions LC:
   ACQUITY UPLC BEH C18 2,1 x 50 mm, 1,7 um
   Phase mobile:
   1. 0,1% d'acide formique ou 0,1% d'hydroxyde d'ammonium aqueux
   2. Méthanol ou l'acétonitrile
   
   Dégradé: 5-95% organique sur 0-2 minutes à un débit de 600 pi / min.
2. Les analytes ont été élues à un débit de 600 pl / min avec un gradient de 5 à 95% bio plus de 2 minutes, où 0,1% d'acide formique aqueux ou 0,1% d'hydroxyde d'ammonium aqueux a été échangé pour le méthanol ou l'acétonitrile.
3. La spectrométrie de masse de détection a été effectuée sur un spectromètre de masse Waters Xevo ™ TQ-S utilisé dans un mode positif électronébulisation d'ions MRM, avec acquisition simultanée de données de scan complet.
   
   Conditions MS:
   Électronébulisation d'ions positifs:
   MRM: 315> 129
   Analyse complète MS: 50-500 m / z à 5000 uma / sec.
   Produit d'ions scan: Précurseurs de m / z = 184 200 à 600
4. Pour illustrer l'utilisation de la technologie radar, le récepteur antagoniste H2 commune chlorhydrate de ranitidine a été enrichi en plasma de rat, précipité avec de l'acétonitrile (2:1), et analysées en utilisant un système UPLC / MS / MS.

II.Representative Bioanalyse Résultats utilisant un radar ™ Technology

Chromatogrammes obtenus selon un procédé classique de tampon aqueuse acide et le gradient de modificateur organique l'acétonitrile ont été comparés avec chromatogrammes obtenus en utilisant un tampon aqueuse basique (fig. 1). Dans l'analyse LC / MS / MS de chlorhydrate de ranitidine dans le plasma chez le rat, les données montrent que MRM RADAR avec un modificateur aqueuse acide, la ranitidine est non retenu, en éluant avec le vide du système chromatographique. Cependant, quand un modificateur aqueuse basique est utilisé, le composé est retenu, en éluant à 0,9 min. L'analyse complète et les parents de m / z = 184 données montrent que les deux la séparation acide et basique, l'analyte est résolu à partir de phospholipides et d'autres matériaux endogènes dans la matrice.

L'utilisation d'un modificateur de méthanol organique avec un tampon aqueuse basique augmenté la rétention analyte à 1,30 min. La réponse du signal analyte a également été augmenté par un facteur 4 (Fig. 2). Cependant, avec un simple base 5-95% de méthanol-pente, les données de numérisation complète a révélé que le pic de l'analyte co-élue avec le matériel endogène dans l'échantillon. Cette co-élution pourrait provoquer la suppression d'ions et de irreproducibility dosage.

Pour résoudre le pic de l'analyte à partir du matériel endogène, la pente du gradient a été ajusté. La fonctionnalité Xevo TQ-S RADAR a été utilisé pour sélectionner rapidement les meilleures conditions LC avec le meilleur débit. Les conditions chromatographiques finales ont été d'un gradient de méthanol 15-60% plus de 2 minutes avec un lavage à 95% organique de 2 à 2,5 minutes (Fig. 3). Le pic de l'analyte est bien résolue à partir du matériel endogène dans l'échantillon, vu de la trace de balayage complet, en vert. Cette approche peut également être utilisé pendant l'analyse d'échantillons pour vérifier liés à la drogue métabolites, co-administré thérapies, et les variations de la matrice qui pourrait affecter la véracité des résultats.

Figure 1: Chromatogrammes obtenus selon un procédé classique de tampon aqueuse acide et le gradient de modificateur organique l'acétonitrile par rapport chromatogrammes obtenus en utilisant un tampon aqueuse basique. Avec un modificateur aqueuse acide, la ranitidine est non retenu, en éluant avec le vide. Quand un modificateur de base aqueuse est employée, le composé est retenu, en éluant à 0,9 min. L'analyse complète et les parents de m / z = 184 données montrent que les deux la séparation acide et basique, l'analyte est résolu à partir de phospholipides et d'autres matériaux endogènes dans la matrice.

Figure 2: L'utilisation d'un modificateur de méthanol organique avec un tampon aqueuse basique augmenté la rétention chlorhydrate de ranitidine à 1,30 min. La réponse du signal analyte a également été augmenté par un facteur 4. Cependant, les données scan complet révèle pic de l'analyte co-élue avec le matériel endogène dans l'échantillon lors d'une simple base 5-95% de méthanol-gradient est employé.

Figure 3: Les conditions définitives de chromatographie pour le chlorhydrate de ranitidine inclus un gradient de méthanol 15-60% plus de 2 minutes avec un lavage à 95% organique de 2 à 2,5 minutes. Le pic de l'analyte est bien résolue à partir du matériel endogène dans l'échantillon, vu de la trace de balayage complet, en vert.

Développement de méthodes bioanalytiques est considérablement simplifié grâce à la technologie RADAR Xevo TQ-S. La capacité d'acquérir simultanément les données scan complet ainsi que MS / MS et MRM de données permet à la matrice de l'échantillon endogènes à surveiller en même temps que le pic de l'analyte, en facilitant:

• Développement de méthode plus rapide
• Élimination de la nécessité d'injections répétées pour obtenir un signal de fond
• Matrice de contrôle en cours d'analyse d'échantillon
• Faciliter le dépannage
• Détection des métabolites dans vivo au cours du développement pré-clinique et clinique

L'auteur de cet article est un employé de Waters Corporation.

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