Simplificada LC / MS / MS Desenvolvimento método bioanalítico com Tecnologia Radar - PROPAGANDA

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O desenvolvimento de um ensaio bioanalíticos requer o desenvolvimento de um método MRM, bem como um método de cromatografia, o que exige posicionamento do pico do analito de interesse de distância do sinal de fundo endógena. O Xevo ™ TQ-S em tandem espectrômetro de massa quadrupolar com RADAR Technology ™ permite a coleta simultânea de varredura completa e os dados MS / MS MRM, simplificando o processo de desenvolvimento do método.

Para um método bioanalysis ser eficaz, deve ser transferível, reprodutível e robusto. O desenvolvimento de um ensaio bioanalysis confiável LC / MS / MS envolve a otimização completa de preparação de amostras, detecção de MS, e as condições de cromatografia. Isso muitas vezes pode ser um processo demorado, exigindo os picos do analito (s) ser resolvido a partir de componentes da matriz endógenas que causam a supressão de íons e irreproducibility ensaio. Isso muitas vezes requer várias corridas analíticas para adquirir a MRM necessário, íon produto, e os dados varredura completa.

Descrito aqui é o uso de Xevo Espectrômetro de Massa ™ TQ-S com RADAR ™ - um romance dual-scan capacidade de coleta de dados para simplificar o desenvolvimento de método bioanalysis. O Xevo TQ-S emprega um design da célula de colisão romance que permite a coleta simultânea de verificação completa do MS e dados MRM.

I. simplificado LC / MS / MS Desenvolvimento método bioanalítico Com Tecnologia RADAR

1. Para demonstrar simplificado LC / MS / MS desenvolvimento método bioanalítico com tecnologia de radar, cromatografia foi realizada em um ACQUITY UPLC Waters System ®, usando um ACQUITY UPLC Bridged Ethyl coluna híbrido C18.
   
   Condições LC:
   ACQUITY UPLC BEH C18 coluna 2,1 x 50 mm, 1,7 mM
   Fase móvel:
   1. 0,1% de ácido fórmico ou 0,1% de hidróxido de amônio aquoso
   2. Metanol ou acetonitrila
   
   Gradiente: 5-95% orgânico mais 0-2 minutos a uma vazão de 600 mL / min.
2. Os analitos foram eluídos a uma vazão de 600 mL / min com um gradiente de 5-95% orgânicos mais de 2 minutos, onde hidróxido de amônio 0,1% de ácido fórmico aquoso ou 0,1% aquoso foi trocado por metanol ou acetonitrila.
3. Massa de detecção de espectrometria foi realizada em um Xevo Waters ™ TQ-S Espectrômetro de Massa operado em um modo electrospray positivo ion MRM, com aquisição simultânea de dados de varredura completa.
   
   Condições MS:
   Electrospray íon positivo:
   MRM: 315> 129
   Verificação completa do MS: 50-500 m / z em 5000 amu / sec.
   Produto ion scan: Precursores de m / z = 184 200-600
4. Para ilustrar o uso da tecnologia de radar, o comum dos receptores H2 cloridrato de ranitidina antagonista foi cravado em plasma de rato, o precipitado com acetonitrila (2:1), e analisados ​​utilizando um sistema UPLC / MS / MS.

Bioanalysis Resultados II.Representative Usando RADAR ™ Tecnologia

Cromatogramas obtidos utilizando um buffer aquoso ácido convencional e acetonitrila gradiente de modificador orgânico foram comparados com os cromatogramas obtidos usando um tampão básico aquoso (Fig. 1). Na análise de LC / MS / MS de cloridrato de ranitidina em plasma de ratos, os dados MRM RADAR mostra que com um modificador de ácido aquosa, ranitidina é unretained, eluição com o vazio do sistema cromatográfico. No entanto, quando um modificador básica aquosa é empregada, o composto é mantido, com eluição em 0,9 min. A verificação completa e os pais de m / z = 184 dados mostram que tanto a separação com o ácidas e básicas, o analito é resolvido a partir de fosfolipídios e outros materiais endógenos na matriz.

O uso de um modificador de metanol orgânica com um tampão básico aquosa aumento da retenção do analito a 1,30 min. A resposta do sinal do analito também foi aumentada por um fator de 4 (Fig. 2). No entanto, com um simples gradiente de 5-95% de metanol de base, os dados varredura completa revelou que o pico do analito co-eluídos com o material endógeno na amostra. Esta co-eluição pode causar a supressão de íons e irreproducibility ensaio.

Para resolver o pico do analito a partir do material endógeno, a inclinação do gradiente foi ajustado. A funcionalidade Xevo RADAR TQ-S foi usado para selecionar rapidamente as melhores condições LC com o melhor rendimento. As condições cromatográficas finais foram um gradiente de metanol 15-60% mais de 2 minutos com uma lavagem de 95% orgânicos 2-2,5 minutos (Fig. 3). O pico do analito é bem resolvida a partir do material endógeno na amostra como pode ser visto a partir do traço varredura completa, em verde. Esta abordagem também pode ser usado durante a análise da amostra para verificar relacionados com a droga metabólitos, co-administrado terapias, e variações na matriz que pode afetar a veracidade dos resultados.

Figura 1: Cromatogramas obtidos utilizando um buffer aquoso ácido convencional e acetonitrila gradiente de modificador orgânico em comparação com cromatogramas obtidos usando um tampão básico aquosa. Com um modificador de ácido aquosa, ranitidina é unretained, eluição com o vazio. Quando um modificador básica aquosa é empregada, o composto é mantido, com eluição em 0,9 min. A verificação completa e os pais de m / z = 184 dados mostram que tanto a separação com o ácidas e básicas, o analito é resolvido a partir de fosfolipídios e outros materiais endógenos na matriz.

Figura 2: O uso de um modificador de metanol orgânica com um tampão básico aquosa aumentou a retenção de cloridrato de ranitidina a 1,30 min. A resposta do sinal do analito também foi aumentada por um fator de 4. No entanto, os dados varredura completa revela o pico do analito co-eluídos com o material endógeno na amostra quando um simples gradiente de 5-95% de metanol básico é empregado.

Figura 3: As condições finais cromatográfico para cloridrato de ranitidina incluído um gradiente de metanol 15-60% mais de 2 minutos com uma lavagem de 95% orgânicos 2-2,5 minutos. O pico do analito é bem resolvida a partir do material endógeno na amostra como pode ser visto a partir do traço varredura completa, em verde.

Desenvolvimento de método bioanalítico é significativamente simplificada usando tecnologia Xevo RADAR TQ-S. A capacidade de adquirir simultaneamente dados varredura completa, bem como MS / MS e MRM de dados permite que a matriz da amostra endógena a ser monitorado, ao mesmo tempo como o pico do analito, facilitando:

• Desenvolvimento método mais rápido
• Eliminação da necessidade de injeções repetidas para obter sinal de fundo
• Matriz de monitoramento durante a análise da amostra
• Fácil resolução de problemas
• Detecção de metabólitos em vivo durante o desenvolvimento pré-clínicos e clínicos

O autor deste artigo é um empregado da Waters Corporation.

Materials: Simplificada LC / MS / MS Desenvolvimento método bioanalítico com Tecnologia Radar - PROPAGANDA

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