Simplificado LC / MS / MS desarrollo de métodos bioanalíticos con tecnología de radar - PUBLICIDAD

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El desarrollo de un ensayo bioanalíticos requiere el desarrollo de un método de MRM, así como un método de cromatografía, que requiere la posición del pico del analito de interés fuera de la señal de fondo endógeno. El Xevo ™ TQ-S en tándem con el espectrómetro de masas cuadrupolar RADAR ™ La tecnología permite la recolección simultánea de análisis completo y MS / MS de datos MRM, muy simplifica el proceso de desarrollo del método.

Para un método de bioanálisis para ser eficaz, debe ser transferible, reproducible y robusto. El desarrollo de un ensayo fiable bioanálisis LC / MS / MS consiste en la optimización completa de la preparación de muestras, detección de MS, y las condiciones de cromatografía. A menudo, esto puede ser un proceso lento, que requiere de los picos del analito (s) se resolverá de componentes de la matriz endógena que causa la supresión de iones y irreproductibilidad ensayo. Esto requiere a menudo varias tandas de análisis para adquirir la necesaria MRM, iones producto, y los datos de análisis completo.

Aquí se describe es el uso de Espectrómetro de Masa Xevo ™ TQ-S con el RADAR ™ - una novela de doble barrido capacidad de recopilación de datos para simplificar el desarrollo de bioanálisis método. El Xevo TQ-S emplea un diseño novedoso celular de colisión que permite la recolección simultánea de MS completo análisis y los datos de MRM.

I. simplificado LC / MS / MS desarrollo de métodos bioanalíticos con tecnología de radar

1. Para demostrar simplificado LC / MS / MS desarrollo de métodos bioanalíticos con tecnología de radar, la cromatografía se realizó en un sistema de aguas ACQUITY UPLC ®, utilizando un ACQUITY UPLC etílico puente híbrido columna C18.
   
   LC condiciones:
   ACQUITY UPLC BEH columna C18 de 2,1 x 50 mm, 1,7 m
   Fase móvil:
   1. 0,1% de ácido fórmico o el 0,1% de hidróxido de amonio acuoso
   2. Metanol o acetonitrilo
   
   Gradiente: 5-95% orgánico en 0-2 minutos, con un caudal de 600 l / min.
2. Los analitos se eluyeron a un caudal de 600 l / min con un gradiente de 5 a 95% orgánico de más de 2 minutos, donde se intercambiaron 0,1% de ácido fórmico acuoso o un 0,1% de hidróxido de amonio acuoso para el metanol o el acetonitrilo.
3. Detección por espectrometría de masas se realizó en un Xevo Aguas ™ TQ-S espectrómetro de masas funciona en un modo de iones positivos electrospray MRM, con la adquisición simultánea de datos de análisis completo.
   
   MS condiciones:
   Electrospray ión positivo:
   MRM: 315> 129
   Análisis completo del MS: 50-500 m / z de 5000 amu / sec.
   Producto de iones de análisis: Los precursores de m / z = 184 200 a 600
4. Para ilustrar el uso de la tecnología de radar, el receptor antagonista H2 común clorhidrato de ranitidina, se añadieron en plasma de rata, se precipitó con acetonitrilo (2:1), y se analizaron mediante un sistema de UPLC / MS / MS.

Resultados Bioanálisis II.Representative uso de RADAR ™ Technology

Cromatogramas obtenidos mediante un convencional tampón ácido acuoso y el gradiente de acetonitrilo modificador orgánico se compararon con los cromatogramas obtenidos con un tampón acuosa básica (Fig. 1). En el análisis LC / MS / MS de clorhidrato de ranitidina en plasma de rata, los datos de MRM RADAR muestra que con un modificador acuosa ácida, la ranitidina es no retenida, eluyendo con el vacío del sistema cromatográfico. Sin embargo, cuando un modificador de base acuosa se emplea el compuesto se conserva, eluyendo a 0,9 min. El análisis completo y los padres de m / z = 184 datos muestran que tanto con la separación de ácidos y básicos, el analito se resuelve a partir de fosfolípidos y otros materiales endógenos de la matriz.

El uso de un modificador orgánico metanol con un tampón acuoso básico aumentó la retención de analitos a 1.30 min. La respuesta de la señal del analito se incrementó también en un factor de 4 (Fig. 2). Sin embargo, con un simple 5-95% básico gradiente de metanol, los datos del análisis completo reveló que el pico del analito co-eluyeron con el material endógeno en la muestra. Esta co-elución puede causar supresión de iones y irreproductibilidad análisis.

Para resolver el pico del analito a partir del material endógeno, la pendiente del gradiente se ajustó. El Xevo TQ-S funcionalidad RADAR se utilizó para seleccionar rápidamente las mejores condiciones de LC con el mejor rendimiento. Las condiciones cromatográficas finales fueron un gradiente de 15-60% de metanol durante 2 minutos con un lavado de 95% orgánica 2 a 2,5 minutos (Fig. 3). El pico del analito está bien resuelto desde el material endógeno en la muestra como se ve desde la traza análisis completo, en color verde. Este enfoque también puede ser utilizado durante el análisis de muestras para comprobar si hay metabolitos relacionados con las drogas, los tratamientos se administran simultáneamente, y las variaciones en la matriz, que podría afectar a la veracidad de los resultados.

Figura 1: Cromatogramas obtenidos mediante un convencional tampón ácido acuoso y el gradiente de acetonitrilo modificador orgánico en comparación con los cromatogramas obtenidos con un tampón acuoso básico. Con un modificador acuosa ácida, la ranitidina es no retenida, eluyendo con el vacío. Cuando un modificador de base acuosa se emplea el compuesto se conserva, eluyendo a 0,9 min. El análisis completo y los padres de m / z = 184 datos muestran que tanto con la separación de ácidos y básicos, el analito se resuelve a partir de fosfolípidos y otros materiales endógenos de la matriz.

Figura 2: El uso de un modificador orgánico metanol con un tampón acuoso básico aumentó la retención de clorhidrato de ranitidina a 1.30 min. La respuesta de la señal del analito se incrementó también en un factor de 4. Sin embargo, los datos de exploración completa revela el pico del analito co-eluyeron con el material endógeno de la muestra cuando un simple 5-95% básico gradiente metanol se utiliza.

Figura 3: Las condiciones finales de cromatografía de clorhidrato de ranitidina incluye un gradiente de 15-60% de metanol durante 2 minutos con un lavado de 95% orgánica 2 a 2.5 minutos. El pico del analito está bien resuelto desde el material endógeno en la muestra como se ve desde la traza análisis completo, en color verde.

El desarrollo de métodos de bioanálisis se simplifica significativamente el uso Xevo TQ-S tecnología de radar. La capacidad para adquirir al mismo tiempo los datos de análisis completo, así como MS / MS y los datos de MRM permite la matriz de la muestra endógena a un control en el mismo tiempo que el pico del analito, lo que facilita:

• Método más rápido desarrollo
• Eliminación de la necesidad de repetir las inyecciones para obtener la señal de fondo
• Matriz de seguimiento durante el análisis de las muestras
• Detección de averías
• La detección de metabolitos en vivo durante el desarrollo pre-clínico y clínico

El autor de este artículo es un empleado de Aguas Corporation.

Materials: Simplificado LC / MS / MS desarrollo de métodos bioanalíticos con tecnología de radar - PUBLICIDAD

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