Vereenvoudigde LC / MS / MS Bioanalytisch Methode Ontwikkeling met Radar Technology - ADVERTENTIE

Sign in to register to receive emails with product information.

De ontwikkeling van een bio-analytische test vereist de ontwikkeling van een MRM-methode als een chromatografie methode, die de positionering van de analyt piek van belang vereist weg van de endogene achtergrond signaal. De Xevo â„¢ TQ-S tandem quadrupool massaspectrometer met RADAR â„¢-technologie maakt het mogelijk gelijktijdige ophaling van de volledige scan en MS / MS MRM gegevens enorm vereenvoudigen van de methode-ontwikkeling proces.

Voor een bioanalyse methode om effectief te zijn moet overdraagbaar zijn, reproduceerbaar en robuust. De ontwikkeling van een betrouwbare LC / MS / MS bioanalyse test heeft betrekking op de grondige optimalisering van monstervoorbereiding, MS-detectie, en chromatografie voorwaarden. Dit kan vaak een tijdrovend proces, waarbij de analyt pieken (s) op te lossen van de endogene matrixcomponenten dat ion onderdrukking en assay irreproducibility veroorzaken. Dit vereist vaak meerdere analytische loopt tot het verwerven van de noodzakelijke MRM-, product-ion, en de volledige scan data.

Hier beschreven is het gebruik van Xevo â„¢ TQ-S massaspectrometer met RADAR â„¢-technologie - een nieuwe dual-scan het verzamelen van gegevens mogelijkheid om bioanalyse methode-ontwikkeling te vereenvoudigen. De Xevo TQ-S maakt gebruik van een nieuw botsing cel ontwerp dat zorgt voor de gelijktijdige ophaling van de volledige scan MS en MRM data.

I. Vereenvoudigd LC / MS / MS Bioanalytisch methode-ontwikkeling met RADAR-technologie

1. Aan LC / MS / MS bioanalytische methode ontwikkeling met RADAR technologie te demonstreren vereenvoudigd, werd chromatografie uitgevoerd op een Waters ACQUITY UPLC ®-systeem, met behulp van een ACQUITY UPLC bridged Ethyl Hybrid C18 kolom.
   
   LC Voorwaarden:
   ACQUITY UPLC BEH C18 kolom 2.1 x 50 mm, 1,7 micrometer
   Mobiele fase:
   1. 0,1% mierenzuur of 0,1% waterige ammoniumhydroxyde
   2. Methanol of acetonitril
   
   Verloop: 5-95% organische gedurende 0-2 minuten bij een debiet van 600 pL / min.
2. De analyten werden geëlueerd met een stroomsnelheid van 600 pL / min met een 5 tot 95% organische helling van meer dan 2 minuten, waar 0,1% waterig mierenzuur of 0,1% waterige ammoniumhydroxyde werd ingeruild voor methanol of acetonitril.
3. Massaspectrometrie detectie werd uitgevoerd op een Waters Xevo â„¢ TQ-S Mass Spectrometer gebruikt in een positieve ion elektrospray MRM-modus, met gelijktijdige verwerving van de volledige scan gegevens.
   
   MS Voorwaarden:
   Positieve ion electrospray:
   MRM: 315> 129
   Volledige scan MS: 50 tot 500 m / z bij 5000 amu / sec.
   Product ion scan: Voorlopers van m / z = 184 200-600
4. Ter illustratie van het gebruik van de RADAR-technologie, was de gemeenschappelijke H2-receptor antagonist ranitidine hydrochloride spiked in de rat plasma, neergeslagen met acetonitril (2:1), en geanalyseerd met behulp van een UPLC / MS / MS systeem.

II.Representative Resultaten Bioanalyse met behulp van radar â„¢-technologie

Chromatogrammen verkregen met behulp van een conventionele zure waterige buffer en acetonitril organische modifier gradiënt werden vergeleken met chromatogrammen verkregen met behulp van een basische waterige buffer (afb. 1). In de LC / MS / MS analyse van ranitidine hydrochloride in de rat plasma, de RADAR MRM gegevens blijkt dat met een zure waterige modifier, ranitidine is unretained, elueren met de leegte van het chromatografische systeem. Echter, wanneer een basische waterige modifier wordt gebruikt, is de verbinding behouden, eluerende op 0,9 minuten. De volledige scan en de ouders van m / z = 184 gegevens tonen aan dat met zowel de zure of basische scheiding, de analyt wordt opgelost uit fosfolipiden en andere endogene materialen in de matrix.

Het gebruik van een methanol organische modifier met een basische waterige buffer verhoogde de analyt retentie tot 1.30 minuten. De analyt signaal respons werd ook verhoogd met een factor 4 (figuur 2). Echter, met een simpele 5-95% basic-methanol gradiënt, de volledige scan gegevens bleek dat de analyt piek co-geëlueerd met de endogene materiaal in het monster. Deze co-elutie kunnen veroorzaken ion onderdrukking en assay irreproducibility.

Op te lossen de analyt piek van de endogene materiaal, was de gradiënt steilheid aangepast. De Xevo TQ-S RADAR functionaliteit werd gebruikt om snel de beste LC voorwaarden met de beste doorvoersnelheid. De laatste chromatografische omstandigheden waren een helling van 15-60% methanol gedurende 2 minuten met een 95% organische wassen 2 tot 2,5 minuten (afb. 3). De analyt piek is goed opgelost door de endogene materiaal in het monster gezien vanaf de volledige scan te sporen, in het groen. Deze benadering kan ook gebruikt worden tijdens de analyse van het monster om te controleren op drugs-gerelateerde metabolieten, toegediend therapieën, en variaties in matrix waarin de juistheid van de resultaten kunnen beïnvloeden.

Figuur 1: Chromatogrammen verkregen met behulp van een conventionele zure waterige buffer en acetonitril organische modifier gradiënt in vergelijking met chromatogrammen verkregen met behulp van een basische waterige buffer. Met een zure waterige modifier, is ranitidine unretained, elueren met de leegte. Wanneer een basische waterige modifier wordt gebruikt, is de verbinding behouden, eluerende op 0,9 minuten. De volledige scan en de ouders van m / z = 184 gegevens tonen aan dat met zowel de zure of basische scheiding, de analyt wordt opgelost uit fosfolipiden en andere endogene materialen in de matrix.

Figuur 2: Het gebruik van een methanol organische modifier met een basische waterige buffer verhoogde de ranitidine hydrochloride retentie tot 1.30 minuten. De analyt signaal respons werd ook verhoogd met een factor 4. Echter, de volledige scan gegevens openbaart de analyt piek co-geëlueerd met de endogene materiaal in het monster wanneer een simpele 5-95% basic-methanol gradiënt wordt gebruikt.

Figuur 3: De laatste chromatografische voorwaarden voor ranitidine hydrochloride onder een helling van 15-60% methanol gedurende 2 minuten met een 95% organische wassen 2 tot 2,5 minuten. De analyt piek is goed opgelost door de endogene materiaal in het monster gezien vanaf de volledige scan te sporen, in het groen.

Bioanalytisch methode ontwikkeling is sterk vereenvoudigd met behulp van Xevo TQ-S RADAR-technologie. De mogelijkheid om tegelijkertijd te verwerven volledige scan data als MS / MS en MRM gegevens kan de endogene monstermatrix te worden gecontroleerd op hetzelfde tijdstip als de analyt piek, faciliteren:

• Snellere methode voor ontwikkeling
• Eliminatie van de noodzaak van herhaalde injecties op de achtergrond signaal te krijgen
• Matrix monitoring tijdens de monsteranalyse
• Eenvoudig oplossen van problemen
• Detectie van in vivo metabolieten tijdens de pre-klinische en klinische ontwikkeling

De auteur van dit artikel is een medewerker van Waters Corporation.

Materials: Vereenvoudigde LC / MS / MS Bioanalytisch Methode Ontwikkeling met Radar Technology - ADVERTENTIE

Ask the Author: Vereenvoudigde LC / MS / MS Bioanalytisch Methode Ontwikkeling met Radar Technology - ADVERTENTIE