Vereinfachte LC / MS / MS Bioanalytische Methodenentwicklung mit Radar-Technologie - WERBUNG

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Die Entwicklung eines bioanalytischen Assays erfordert die Entwicklung einer MRM-Methode sowie eine Chromatographie-Methode, die Positionierung des Analyten Höhepunkt Interesse erfordert vom endogenen Hintergrund-Signal. Die Xevo ™ TQ-S Tandem-Quadrupol-Massenspektrometer mit RADAR ™-Technologie ermöglicht die gleichzeitige Erfassung von Full-Scan-und MS / MS MRM-Daten deutlich erleichtert die Methode Entwicklungsprozess.

Für eine Bioanalytik-Methode effektiv zu sein, muss übertragbar, reproduzierbar und robust. Die Entwicklung eines zuverlässigen LC / MS / MS Bioanalytik-Test umfasst die sorgfältige Optimierung der Probenvorbereitung, MS-Detektion und-Chromatographie Bedingungen. Dies kann oft ein zeitaufwendiger Prozess sein, benötigt der Analyt Peaks (s) von endogenen Matrix-Komponenten, die Ionen-Unterdrückung und Assay Nichtreproduzierbarkeit Ursache geklärt werden. Dies erfordert oft mehrere analytische läuft die notwendigen MRM-, Produkt-Ionen-und Full-Scan-Daten zu erwerben.

Beschrieben ist hier die Verwendung von Xevo ™ TQ-S-Massenspektrometer mit RADAR ™-Technologie - eine neuartige Dual-Scan-Daten-Sammlung Fähigkeit, Bioanalytik Methodenentwicklung vereinfachen. Die Xevo TQ-S beschäftigt Roman Stoßzelle Design, das für die simultane Erfassung der vollständigen Scan MS und MRM-Daten ermöglicht.

I. Vereinfachtes LC / MS / MS Bioanalytische Methodenentwicklung mit Radartechnik

1. Um vereinfachte LC / MS / MS-Methode bioanalytische Entwicklung mit RADAR-Technologie zu demonstrieren, wurde Chromatographie auf einer Waters ACQUITY UPLC ®-System durchgeführt, unter Verwendung eines ACQUITY UPLC Bridged Ethyl Hybrid-C18-Säule.
   
   LC Bedingungen:
   ACQUITY UPLC BEH C18-Säule 2,1 x 50 mm, 1,7 um
   Mobile Phase:
   1. 0,1% Ameisensäure oder 0,1% ige wässrige Ammoniumhydroxid
   2. Methanol oder Acetonitril
   
   Gradient: 5-95% organisches über 0-2 Minuten bei einer Durchflussrate von 600 ul / min.
2. Die Analyten wurden mit einer Flussrate von 600 ul / min mit einer 5 bis 95% Bio-Gradienten über 2 Minuten, in denen 0,1% wässriger Ameisensäure oder 0,1% ige wässrige Ammoniumhydroxid für Methanol oder Acetonitril ausgetauscht wurde eluiert.
3. Massenspektrometrie-Erkennung wurde auf einer Waters Xevo ™ TQ-S-Massenspektrometer in ein positives Ion Elektrospray MRM-Modus betrieben werden, bei gleichzeitiger Übernahme der vollen Scan-Daten durchgeführt.
   
   MS Bedingungen:
   Positive Ionen-Elektrospray:
   MRM: 315> 129
   Full Scan MS: 50-500 m / z bei 5000 amu / sec.
   Produkt-Ionen-Scan: Vorläufer von m / z = 184 200 bis 600
4. Zur Veranschaulichung der Verwendung der RADAR-Technologie, wurde die gemeinsame H2-Rezeptor-Antagonisten Ranitidin-Hydrochlorid in Rattenplasma versetzt, fällt mit Acetonitril (2:1), und unter Verwendung eines UPLC / MS / MS-System.

II.Representative Ergebnisse Bioanalytik mittels Radar â„¢-Technologie

Chromatogramme unter Verwendung eines konventionellen sauren wässrigen Puffer und Acetonitril organische Modifier Gradienten verglichen mit Chromatogramme unter Verwendung einer basischen wässrigen Puffer (Abb. 1). In der LC / MS / MS-Analyse von Ranitidin-Hydrochlorid in Rattenplasma, zeigt die RADAR MRM Daten, die mit einer sauren wässrigen modifier, Ranitidin unretardierten ist, wobei mit der Leere des chromatographischen Systems. Wenn jedoch eine basische wässrige Modifikator verwendet wird, ist die Verbindung beibehalten, eluting bei 0,9 min. Die vollständige Untersuchung und Eltern von m / z = 184 Daten zeigen, dass sowohl mit der sauren und basischen Trennung der Analyten aus Phospholipid und andere körpereigene Stoffe in der Matrix gelöst ist.

Die Verwendung einer Methanol organische Modifier mit einer basischen wässrigen Puffer erhöht den Analyten Zurückbehaltungsrecht bis 1,30 min. Der Analyt-Signal Antwort war auch mit einem Faktor von 4 (Abb. 2). Doch mit einem einfachen 5-95% basic-Methanol-Gradienten ergab die Full-Scan-Daten, die der Analyt-Peak mit dem endogenen Material in der Probe co-eluiert. Diese Co-Elution könnte Ionenunterdrückung und Assay Nichtreproduzierbarkeit.

Zur Lösung des Analyten Peak aus dem endogenen Materials wurde der Gradient Steilheit eingestellt. Die Xevo TQ-S RADAR-Funktionalität wurde benutzt, um schnell die beste LC Bedingungen mit den besten Durchsatz. Die endgültige chromatographischen Bedingungen waren ein Gefälle von 15-60% Methanol über 2 Minuten mit 95% Bio-wash 2 bis 2,5 Minuten (Abb. 3). Der Analyt Gipfel ist auch von der endogenen Material in der Probe aus dem Full-Scan-Spur, in Grün gesehen aufgelöst. Dieser Ansatz kann auch während der Analyse von Proben verwendet werden, um für Drogen-Metaboliten, die Zusammenarbeit zu verabreichenden Therapien, und Variationen in Matrix, die die Richtigkeit der Ergebnisse beeinflussen könnten, zu überprüfen.

Abbildung 1: Chromatogramme unter Verwendung eines konventionellen sauren wässrigen Puffer und Acetonitril organische Modifier Gradienten verglichen mit Chromatogramme unter Verwendung einer basischen wässrigen Puffer. Mit einer sauren wässrigen Modifier ist Ranitidin unretardierten, wobei mit der Leere. Wenn einer basischen wässrigen Modifikator verwendet wird, ist die Verbindung beibehalten, eluting bei 0,9 min. Die vollständige Untersuchung und Eltern von m / z = 184 Daten zeigen, dass sowohl mit der sauren und basischen Trennung der Analyten aus Phospholipid und andere körpereigene Stoffe in der Matrix gelöst ist.

Abbildung 2: Die Verwendung einer Methanol organische Modifier mit einer basischen wässrigen Puffer erhöht die Ranitidin-Hydrochlorid Zurückbehaltungsrecht bis 1,30 min. Der Analyt-Signal Antwort wurde auch durch den Faktor 4 erhöht. Allerdings zeigt die Full-Scan-Daten der Analyt-Peak mit dem endogenen Material in der Probe, wenn eine einfache 5-95% basic-Methanol-Gradienten eingesetzt wird co-eluiert.

Abbildung 3: Der letzte chromatographischen Bedingungen für Ranitidin-Hydrochlorid enthalten ein Gefälle von 15-60% Methanol über 2 Minuten mit 95% Bio-wash 2 bis 2,5 Minuten. Der Analyt Gipfel ist auch von der endogenen Material in der Probe aus dem Full-Scan-Spur, in Grün gesehen aufgelöst.

Bioanalytische Methodenentwicklung wesentlich vereinfacht mit Xevo TQ-S RADAR-Technologie. Die Möglichkeit, gleichzeitig zu erwerben Full-Scan-Daten sowie MS / MS und MRM-Daten ermöglicht die endogene Probenmatrix zur gleichen Zeit wie die Analyten peak überwacht werden, zu erleichtern:

• Schnellere Methodenentwicklung
• Die Eliminierung der Notwendigkeit für wiederholte Injektionen in den Hintergrund Signal zu erhalten
• Matrix Ãœberwachung während der Probenanalyse
• Einfache Fehlersuche
• Detektion von in vivo Metaboliten während der prä-klinischen und klinischen Entwicklung

Der Autor dieses Artikels ist ein Mitarbeiter von Waters Corporation.

Materials: Vereinfachte LC / MS / MS Bioanalytische Methodenentwicklung mit Radar-Technologie - WERBUNG

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