Выделение и расширение взрослой мыши нервные стволовые клетки Использование Neurosphere Пробирной

Neurosphere анализа ² получила широкое внимание в научное сообщество не только для выделения и изучения NSCs из ЦНС ^4-5, но и для выделения других типов предполагаемых стволовых клеток из различных тканей, таких как рак молочной железы ⁶ и ⁷ и сердце для идентификации мозга, молочной железы и толстой кишки опухолью стволовые клетки ^8-9 предполагая, что эта культура система может быть применена к ряду соматических и опухолевых предшественников клеточных популяций по всему телу. Некоторые из преимуществ этого метода является его простота, воспроизводимость и генерации неопределенного числа клеток с небольшой кусочек ткани или даже небольшое число клеток в химически определенной среде без сыворотки.

Следует подчеркнуть, что число нейросферы в культуре не представляет количество стволовых клеток в качестве нейросферы могут быть получены либо из добросовестных стволовых клеток или из более ограниченного клеток-предшественников ^10. В этой связи анализ был разработан правильно перечислить NSCs в культуре ^11.

Различные методы используются, чтобы отделить нейросферы в суспензии отдельных клеток, включая механические и ферментативные методы. Хотя механический метод является оригинальным neurosphere диссоциации метод ^2, она требует большого опыта и его эффективность зависит от оператора. Этот метод также может нанести значительный клеточной гибели и повреждения при нанесении неопытного человека, который может уменьшить точность анализов, которые полагаются на neurosphere диссоциации ^3. Трипсин-EDTA ферментативной диссоциации также имеет некоторые преимущества и недостатки. Ферментативной диссоциации нейросферы легко, эффективный и воспроизводимый, если оно проводится для соответствующего периода времени, а справа размером нейросферы. Хотя Есть не рядом исследований, сравнивающих эффекты этих двух методов neurosphere диссоциации, наш опыт показывает, что краткие инкубации (3-5 мин) из нейросферы (до 250 мкм) с трипсин-ЭДТА приводит к эффективной диссоциации без нарушения их жизнеспособности, пролиферации и дифференцировки возможностей. С другой стороны, длинные выдержки из нейросферы (особенно для больших заросших нейросферы) для трипсина-EDTA может привести к серьезному повреждению поверхности клеточных рецепторов, клеточных пищеварения и, возможно, гибели клеток. Длительное воздействие трипсина-EDTA может также вмешиваться в формирование сферы и вызвать клеткам прикрепляться к субстрату и дифференцировать.