El aislamiento y la expansión de las células troncales nerviosas de ratones adultos mediante el ensayo de neuroesfera

El ensayo neuroesfera ² ha ganado gran atención en la comunidad de investigación no sólo para el aislamiento y estudio de los comités directivos de la CNS ^05/04, sino también para el aislamiento de otros tipos de células madre putativa de numerosos tejidos, como el de mama ⁶ y ⁷ y el corazón para la identificación de cerebro, mama y colon células madre tumorales ^8-9 lo que sugiere que este sistema de cultivo se puede aplicar a una serie de síntomas somáticos y el tumor de las poblaciones de células precursoras a través del cuerpo. Algunas de las ventajas de este método son su sencillez, reproducibilidad y la generación de número indeterminado de células de un pequeño trozo de tejido o incluso un pequeño número de células en un medio químicamente definido libre de suero.

Cabe destacar que el número de neuroesferas en la cultura no representa el número de células madre como neuroesferas se pueden derivar ya sea de buena fe o las células madre a partir de células progenitoras más restringida ^10. A este respecto, un ensayo ha sido desarrollado para enumerar correctamente NSCs en la cultura ^11.

Se utilizan diferentes métodos para disociar neuroesferas en suspensión de células individuales incluyendo los métodos mecánicos y enzimáticos. Aunque el método mecánico es el método original de disociación neuroesfera ^2, se requiere de mucha experiencia y su eficacia varía según el operador. Este método también puede causar la muerte celular y daño si se aplica a una persona sin experiencia, lo cual puede disminuir la precisión de los ensayos que se basan en la disociación neuroesfera ^3. Tripsina-EDTA disociación enzimática también tiene algunas ventajas y desventajas. Enzimático de disociación de neuroesferas es fácil, eficiente y reproducible si se realiza para el periodo de tiempo adecuado y en el neuroesferas tamaño adecuado. Aunque no hay estudios de lado a lado la comparación de los efectos de estos dos métodos de neuroesfera disociación, nuestra experiencia muestra que una incubación breve (3-5 minutos) de las neuroesferas (hasta 250 m) con tripsina-EDTA resultados de manera eficiente la disociación sin afectar su capacidad de viabilidad, proliferación y diferenciación. Por otro lado, la exposición prolongada de neuroesferas (especialmente para las neuroesferas cubierto de gran tamaño) a la tripsina-EDTA podría causar graves daños a los receptores de superficie celular, la digestión celular y potencialmente la muerte celular. La sobreexposición a la tripsina-EDTA también pueden interferir con la formación de la esfera y las células de la causa para unir al sustrato y se diferencian.