Isolamento ed espansione della cellule staminali neurali del mouse utilizzando il saggio neurosfere

Il test neurosfere ² ha guadagnato l'attenzione generale della comunità di ricerca non solo per l'isolamento e lo studio di NSCs da SNC ^4-5, ma anche per l'isolamento di altri tipi di cellule staminali provenienti da tessuti diversi putativo, come il petto ⁶ e ⁷ e cuore per l'identificazione del cervello, della mammella e del colon cellule staminali tumorali ^8-9 suggerendo che questo sistema di coltura può essere applicato a una serie di somatiche e le popolazioni precursore delle cellule tumorali in tutto il corpo. Alcuni dei vantaggi di questo metodo sono la sua semplicità, la riproducibilità e la generazione di un numero indefinito di cellule da un piccolo pezzo di tessuto o anche un piccolo numero di cellule in una struttura chimica definita media i livelli di free.

Va sottolineato che il numero di neurosfere nella cultura non rappresenta il numero di cellule staminali come neurosfere possono essere derivati ​​sia da cellule staminali in buona fede o da più cellule progenitrici ristretta ^10. A questo proposito un test è stato sviluppato per enumerare correttamente NSCs nella cultura ^11.

Diversi metodi sono utilizzati per dissociarsi neurosfere in sospensione singola cella compresi i metodi meccanici ed enzimatiche. Sebbene il metodo meccanico è l'originale metodo di neurosfere dissociazione ^2, richiede molta esperienza e la sua efficienza varia a seconda dell'operatore. Questo metodo può anche causare la morte cellulare e danni significativi se applicato da un individuo inesperto, che può ridurre l'accuratezza delle analisi che si basano su neurosfere dissociazione ^3. Tripsina-EDTA dissociazione enzimatica ha anche alcuni vantaggi e svantaggi. Dissociazione enzimatica delle neurosfere è facile, efficiente e riproducibile, se effettuata per la lunghezza appropriata del tempo e sulla destra neurosfere dimensioni. Anche se non esistono studi fianco a fianco a confronto gli effetti di questi due metodi di neurosfere dissociazione, la nostra esperienza dimostra che una incubazione breve (3-5 minuti) del neurosfere (fino a 250 micron) con tripsina-EDTA risultati in modo efficiente dissociazione senza disturbare le loro capacità vitalità, proliferazione e differenziazione. D'altra parte, una lunga esposizione di neurosfere (soprattutto per i grandi invasi neurosfere) di tripsina-EDTA potrebbe causare seri danni ai recettori della superficie cellulare, la digestione e la morte delle cellule potenzialmente cellulare. Sovraesposizione alla tripsina-EDTA potrebbe anche interferire con la formazione di sfera e le cellule causa di allegare al substrato e differenziare.