Isolering och utvidgning av den vuxna Mouse neurala stamceller Använda Neurosphere analys

Den neurosphere analys ² har fått bred uppmärksamhet i forskarvärlden, inte bara för isoleringen och studiet av NSCs från CNS ^4-5, men också för isolering av andra typer av förmodade stamceller från många vävnader, såsom ^bröst-6 och hjärta ⁷ och för identifiering av hjärnan, bröst-och tjocktarmscancer tumör stamceller ^8-9 tyder på att denna kultur systemet kan tillämpas på ett antal somatiska och tumör föregångare populationer cell i hela kroppen. Några av fördelarna med denna metod är bland annat dess enkelhet, reproducerbarhet och generering av obestämt antal celler från en liten bit vävnad eller ens ett litet antal celler i ett kemiskt definierade serum fritt medium.

Det bör understrykas att antalet neurospheres i kultur inte representerar antalet stamceller som neurospheres kan härledas antingen från seriösa stamceller eller från mer begränsade progenitorceller ^10. I detta avseende ett test har utvecklats för att korrekt räkna NSCs i kultur ^11.

Olika metoder används för att särskilja neurospheres till en enda cellsuspension inklusive mekaniska och enzymatiska metoder. Även mekaniska metod är den ursprungliga neurosphere dissociation metod ^2, kräver det en hel del erfarenhet och dess effektivitet varierar beroende på operatör. Denna metod kan också orsaka betydande celldöd och skador om tillämpas av en oerfaren individ, vilket kan minska noggrannheten i analyser som bygger på neurosphere dissociation ^3. Trypsin-EDTA enzymatiska dissociation har också några fördelar och nackdelar. Enzymatisk dissociation av neurospheres är enkelt, effektivt och reproducerbar, om de utförs under lämplig tid och på rätt storlek neurospheres. Även om det finns någon sida vid sida studier som jämför effekterna av dessa två metoder för neurosphere dissociation, visar vår erfarenhet att en kort inkubationstid (3-5 min) av neurospheres (upp till 250 mikrometer) med trypsin-EDTA resulterar i en effektiv dissociation utan att störa deras livskraft, tillväxt och differentiering kapacitet. Å andra sidan kan långa exponering av neurospheres (särskilt för stora övervuxna neurospheres) till trypsin-EDTA orsaka allvarliga skador på cellens yta receptorer, cell matsmältningen och potentiellt celldöd. Överexponering av trypsin-EDTA kan också störa sfären bildning och celler anledning att fästa till underlaget och differentiera.