ラットにおける急性心筋梗塞

1。営業エリアの準備

1. 操作面は、最初に70％エタノールでエリアを消毒することによって調製される。
2. すべての手術器具は、手術前にホットビーズ滅菌器（および個々のラットの手術との間で）で滅菌することがあります。これらの楽器が含まれます：外科はさみ（2）、ピンセット（1）、湾曲鉗子（1）、ニードルホルダー（2）、および胸のrectractorを。
3. 綿のガーゼとアプリケーターが出血を管理するために利用できるようになります。
4. ° C、体温の劇的な低下を防ぐために37℃で± 1の動物の体温を維持するために使用される恒温ブランケットシステム（加熱パッド）の温度を調整し、梗塞の大きさは、依存していますよく体温などの閉塞の持続期間（Tarnavski ら ）。
5. 手術の前日、前の麻酔に、各動物はブプレノルフィン（0.1〜2.5 mg / kgのSQ）とカルプロフェン経口錠剤（1錠Rimadyl、Bioserv錠剤）の投与量を受け取ります。手術直前に一度、各動物は再びブプレノルフィン（0.1〜2.5 mg / kgをSQ）の投与量を受け取ります。
6. 注：一定期間の心機能と心臓リモデリングの評価対象とした研究では（7 - 28日以降に）、ブプレノルフィン（0.1〜2.5 mg / kgをSQ）の用量を投与される、すべての6時間24〜48時間後に手術とカルプロフェン経口錠剤のための手術後に（"手術後の回復"を参照してください）​​1日1回提供されます。

2。ラットの作製と挿管

1. 前の麻酔導入まで、動物は手術成績を複雑にする可能性のある既存の条件を識別するために検討され、身体検査は目視検査と心拍数、呼吸数、及び体温と体重の測定が含まれます。
2. 動物が健康であると判断されれば、250〜300グラムの雄ラット（例えば、スプラーグドーリー）を検討する予定との識別特性が記録されます。
3. ラットは、ペントバルビタール80 mg / kg体重で麻酔、麻酔の適切なレベルは、ラットの爪床の圧力（つま先ピンチ反射）と定期的手続きを通してを適用することにより、四肢の撤退の応答によって確認されます。
4. ブプレノルフィン（0.1〜2.5 mg / kg体重; SQ）は手術時に投与される。
5. 電気シェーバーは、毛皮のフォーム首と胸の部分を剃るのに使用されます。注：一定の期間（7 - 28日以降に）上の心機能と心臓リモデリングの評価を対象とした研究では、毛皮は完全に無菌状態を維持するために外科領域から離れて剃毛する必要があります。
6. 剃毛の分野では、スクラブと70％アルコールでエリアを拭いて、続いbetadine液で消毒するか、このbetadineとアルコールのスクラブと消毒の手順が3回繰り返されることです。
7. 麻酔動物は、体温を維持するために、恒温毛布のシステム上で仰臥位（加熱パッド）に配置されます。
8. 気管内挿管は、それから気管の上に5 mmの半ばに首を切開し、筋肉組織の退縮することで、挿管の可視化を強化するためには、まず慎重に気管を露出することによって行われます。
9. チューブが喉頭を介して入口を容易にするためにエッジに面取りされ、これは、気管内チューブ（PE 90ポリエチレンサイズ90）の挿入のためのよりよい視覚化することができます。
10. 気管内チューブは、手術用実体顕微鏡を用いて支援可視化と、気管や気管内チューブの入り口を見ながら慎重に舌を操作することによって、気管に挿入されます。
11. 機械換気は、ケント科学人工呼吸器（TOPOデュアルモード）80分あたりの呼吸と100グラムの体重当たり1.2 mlの一回換気量でのサイクリングに気管内チューブを接続することによって実現されます。
12. 滅菌ドレープは、したがって、動作中に潜在的な汚染を最小限に抑え、露出だけ外科領域を残して、ラットの上に配置されている。
13. 動物の外科医とアシスタントは、マスク、ガウン、手袋を着用すること。手袋は、個々のラットの手術の間で変更されていると。

3。一時的な左前下行（LAD）動脈結紮

1. いったん安定した呼吸が確立されると、胸がスペースを開くには、止血やラウンド終了のはさみを使用して、左第四肋間スペースで開かれているが、組織を切断することなく、出血のリスクを低減することができる。
2. 胸のリトラクタは、4番目の肋間スペース内に配置され、左心室（LV）が露出するようにリブを広めるために、肺を傷つけないように最大限の注意を取る。
3. 心膜は、その後開いたが、可能であれば場所に残されている。
4. 近左前下行（LAD）動脈は、の使用と、（図A - 1）識別されます。urgicalステレオ顕微鏡、およびLADは、一過的に30分間の虚血性周期（図A - 1）については6から0 proleneの縫合糸を使用して（またはスリップノットで接続することができます）ライゲーションが、心の具象化なしている。
5. 心臓の再灌流を可能にするために、顕微はさみは、LADの結紮は、次の6から0 prolene縫合、30分で作られた合字（またはスリップノットを解放することによって）、に結び目を切断するために使用されます。
6. シャム対照ラットでは、手順はLADが一時的に結紮されていない場合を除き、同一です。
7. 流出は、肺の再膨張を可能にするために人工呼吸器でピンチオフ（1-2秒）簡単にしています。
8. 胸のリトラクタが除去され、肋骨を結節縫合パターンを2から0 proleneの縫合糸を使用して一緒に描画されます。
9. リブがクローズされると、人工呼吸器の流出は、適切な呼吸を確保するために、もう一度簡単に（1-2秒）ピンチオフです​​。
10. 皮膚は連続縫合パターンを6から0 proleneの縫合糸を使用して閉じられます。

4。 LADの動脈の成功ライゲーションの確認

1. LADの適切なライゲーションは縫合だけでなく、前壁の機能不全への遠位心筋組織の白化を観察することにより確認される;のような一時的LAD結紮の間に観察。
2. 再灌流は心筋組織および前壁の運動のいくつかの回復のデモに赤い色のリターンによって検証されます。のような一時的なLAD結紮直後に観察。
3. 注：一定期間の心機能と心臓リモデリングの評価対象とした研究では（7 - 28日以降にして）、心エコー図は、誘導の程度を決定するために、24時間後のLAD結紮を実行されます心筋梗塞。左室内径短縮率（LV FS）<20％、などの心エコー図から決定だけでなく、梗塞と一致して前壁の運動機能障害を持つすべての動物は、心機能およびリモデリングの研究をフォローアップのために特定され、使用されます。シャム対照ラットを40-45％の間で通常のLV FS（デルモンテらを）持つことが期待されています。

5。手術後の回復

1. 手術が完了すると、動物の上に滅菌ドレープが削除されます。体温（直腸温度計による）、呼吸数（目視検査で）、心拍数（動悸によって）、そして痛みの異常な兆候は、動物が歩行可能になるまで監視する必要があります。
2. ラットは、人工呼吸器から削除されますし、動物のケージに入れ、麻酔から回復するために許可される。このケージで、ケージの一端は、ラットが暖かさを追求できるように、加温パッドによって暖められます。また、水は、この観測期間中のラットに利用できるようになります。
3. 脱水の兆候が手術後に観察されている場合、滅菌生理食塩水0.5mlを腹腔​​内（IP）に注射されます。
4. ブプレノルフィン（0.1〜2.5 mg / kg体重; SQ）は、その後、手術直後、および手術後の回復中に投与されるであろう。
5. 注：一定期間の心機能と心臓リモデリングの評価対象とした研究では（7 - 28日以降に）、ブプレノルフィン（0.1〜2.5 mg / kgをSQ）の用量を投与される、すべての6時間24〜48時間後に手術の手術後。カルプロフェン経口錠剤（Rimadyl、Bioservタブレット）も、少なくとも48時間後の手術のために（1錠毎日）提供されます。

6。虚血再灌流の組織学的評価

1. 4時間の再灌流期間終了後、ラットをペントバルビタールとLADの80 mg / kgので再び麻酔される（Huangらとカイザーら）（またはスリップノットがretiedすることができます）再び連結されている。
2. 1ミリリットルの5％エバンスブルーは（リン酸緩衝生理食塩水で）、右心室に注入し、2分間灌流することが許可されます。
3. 2分後、飽和塩化カリウム溶液1mlは、拍動から心臓を停止させるために右心室に注入される。
4. 心臓はその後、急速に、切り出したアガロースはリン酸緩衝生理食塩水2％に埋め込まれており、1〜2ミリメートルのスライスにして区画されている。
5. 生存心筋は、キャプチャされた20分、各スライスの画像を2％トリフェニルテトラゾリウムクロライド（TTC）で染色される。画像は心筋の領域の量を識別するために定量化されています：（1）それはないアットリスク（ブルーセクション）、（2）エリア - アットリスク（AAR、赤と白のセクション）であり、及び（3梗塞された）領域（白"染色"の項）（図-2）。

7。代表的な結果

梗塞サイズと領域アットリスク（AAR）の評価を含む研究については、エバンスブルー色素、トリフェニルテトラゾリウムクロライド（TTC）で、再灌流の4時間以下、LADの適切なライゲーションを確認することができます。として一時的なLADを結紮中に観察された。縫合だけでなく、前壁の機能不全への遠位心筋組織の白化を観察すること。再灌流は心筋組織および前壁の運動のいくつかの回復のデモに赤い色のリターンによって検証することができる、一時的なLAD結紮直後に観察。 （ - 28〜 - 7日以降）、時間の期間にわたって心機能と心臓リモデリングの評価を含む研究の場合は、再灌流に続いて虚血の適切なライゲーションは、前壁の組織、機能不全のブランチングすることにより確認することができる再灌流は、次の壁運動のいくつかの回復と赤の色のとリターン。さらに、心臓機能障害が誘発される心筋梗塞の程度を決定するために、24時間後のLAD結紮を実行される心エコー図によって決定することができる。左室内径短縮率（LV FS）<20％、などの心エコー図から決定だけでなく、梗塞と一致して前壁の運動機能障害を持つすべての動物は、心機能およびリモデリングの研究をフォローアップのために特定され、使用されます。シャム対照ラットを40-45％の間で通常のLV FS（デルモンテ）を持つことが期待されています。

図1。心筋梗塞とLADの結紮の模式図。 （1）心筋梗塞と疫病の形成によって引き起こされる心筋梗塞を模倣するために使用される縫合糸を用いて左心室の左前下（LAD）動脈、（2）ライゲーションの模式図。

図2。AMIに続いてラット心臓の代表的なイメージ。代表的な青（非閉塞冠状動脈灌流領域）で領域を示すラットの心臓の画像、梗​​塞の領域アットリスク（AAR）を示す赤色（閉塞冠動脈灌流領域の面積、および黄色/白（梗塞ゾーンのエリアAAR以内）。

また、虚血再灌流（IR）と呼ばれるラットの急性心筋梗塞（AMI）は、、一般的に心不全につながる人間の心室リモデリングを模倣するために使用されます。動物モデル（ラット及びマウス）における左室機能不全および心不全の進行は、MIを維持存続し、その後心不全（ゴールド）を開発し、ヒトで観察されたのと似ています。このプロシージャは、このテクニックのあるバージョンを紹介し、また方法論的な変動を説明する追加の注意事項が含まれている。急性心筋梗塞（AMI）プロシージャへの追加のようなバリエーションが虚血の持続時間と再灌流の持続時間が含まれています。また、アクセス権を取得し、LADを連結するために使用される外科的処置についてのバリエーションがあります。 （; MI永久）慢性的に制限され、代わりに、または、虚血期間の長さに関しては、心筋梗塞を誘発するためにLAD結紮の時間は（AMI 60分〜30分）急性制限することができます。心筋梗塞の評価（すなわち、その後の再灌流の期間）にこの初期虚血期間に続く再灌流の持続時間に関しては、梗塞サイズと領域アットリスク（AARを評価するために、（4時間24時間まで）短くすることができます）エバンスブルー色素、トリフェニルテトラゾリウムクロライド（TTC）、または心機能およびリモデリングを評価するために（7日間28日間以降に）代わりに、長期で。この病的心臓リモデリング（アポトーシス、ネクローシス及び左室機能不全）は、虚血と再灌流の選択された期間によって異なります。 、胸骨切開：最小限の（一時的な左前下行（LAD）動脈結紮パート3を参照）第四肋間スペース内と心の具象化せずにLADを結紮するために、心臓を露出させるの外科手術に代わるものとして、 、心のより大きなアクセスとビューを作成するために、実行することができる。簡単に言えば、切開は、胸部が半ば胸骨に開かれている後に半ば胸部の腹側胸部の皮膚を介して行われます。この部分的な開胸術が後退リトラクターと胸骨の縁が続いている。近位LADの動脈は、手術用顕微鏡を用いて、識別、およびいずれかの一過30分虚血期間（AMI）6 - 0 - prolene縫合糸を使用して（またはスリップノットで接続することができます）ライゲーションまたは恒久的に連結されている6から0 - prolene縫合（MI）を使用。 AMI手順については、顕微はさみ、30分LAD結紮以下の合字に結び目を切断するために使用されます。流出は、肺の再膨張を可能にするために人工呼吸器でピンチオフ（1-2秒）簡単にしています。リトラクターは削除され、肋骨を一緒に描画され、結節縫合パターンを2から0 proleneを使用して縫合されています。胸がクローズされると、流出は、適切な呼吸を確保するために、もう一度簡単にピンチオフです​​と皮膚は連続縫合パターンを6から0 prolene縫合糸を使用して閉じている。全体的に、このプロトコルで説明されている急性心筋梗塞（AMI）の動物モデルはヒトの虚血性心疾患を模倣し、心臓リモデリングと心不全に関与する分子シグナル伝達機構を解明するための重要なツールとして機能します。