The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.
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Department of Physiology and Biophysics, University of California, Irvine (UCI)
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Froger, A., Hall, J. E. Transformation of Plasmid DNA into E. coli Using the Heat Shock Method. J. Vis. Exp. (6), e253, doi:10.3791/253 (2007).
Transformation d'ADN plasmidique dans E. coli en utilisant la méthode du choc thermique est une technique de base de la biologie moléculaire. Elle consiste à insérer un produit étranger plasmide ou ligature dans des bactéries. Ce protocole vidéo décrit la méthode traditionnelle de transformation à l'aide disponible dans le commerce chimiquement les bactéries compétentes Genlantis. Après une incubation courte de glace, un mélange de bactéries compétentes et chimiquement l'ADN est placé à 42 ° C pendant 45 secondes (choc thermique), puis replacés dans la glace. SOC médias est ajouté et les cellules transformées sont incubées à 37 ° C pendant 30 min avec agitation. Pour être assuré d'isoler des colonies indépendamment de l'efficacité de transformation, deux quantités de bactéries transformées sont étalées. Ce protocole traditionnel peut être utilisé avec succès pour transformer les plus disponibles dans le commerce des bactéries compétentes. Le turbocells partir Genlantis peut également être utilisé dans un protocole de transformation de 3 minutes roman, décrit dans le manuel d'instruction.
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ReplyPosted by: AnonymousFebruary 1, 2008, 7:57 PM