The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.
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Department of Physiology and Biophysics, University of California, Irvine (UCI)
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Froger, A., Hall, J. E. Transformation of Plasmid DNA into E. coli Using the Heat Shock Method. J. Vis. Exp. (6), e253, doi:10.3791/253 (2007).
Trasformazione del DNA plasmidico in E. coli con il metodo dello shock termico è una tecnica di base della biologia molecolare. Si compone di inserimento di un prodotto straniero plasmide o legatura nei batteri. Questo protocollo video descrive il metodo tradizionale di trasformazione utilizzando batteri chimicamente disponibili in commercio competente da Genlantis. Dopo una breve incubazione in ghiaccio, una miscela di batteri chimicamente competenti e il DNA è posizionato a 42 ° C per 45 secondi (shock termico) e poi rimesso nel ghiaccio. SOC mezzi di comunicazione si aggiunge e trasforma le cellule vengono incubate a 37 ° C per 30 minuti con agitazione. Per essere certi di isolare colonie a prescindere dalla efficienza della trasformazione, due quantità di batteri trasformati sono placcati. Questo protocollo tradizionali possono essere utilizzati con successo per trasformare i batteri più competente reperibile in commercio. Il turbocells da Genlantis può essere utilizzato anche in un romanzo di 3 minuti protocollo di trasformazione, come descritto nel manuale di istruzioni.
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ReplyPosted by: AnonymousFebruary 1, 2008, 7:57 PM