Спинной мозг электрофизиологии II: внеклеточной изготовление электродов Всасывающая

Электрофизиологические записи изолированных спинного мозга может выявить генетические и развития изменений в нервной системы ^1. Ранее мы показали метод препарировать новорожденных мышей спинной мозг ^2. Здесь мы представляем метод подготовки всасывания полезных электродов в записи фиктивного передвижения в изолированных спинного мозга ^3.

Кончик электрода пластиковые трубы может быть обращено на очень тонкой наконечником вручную с помощью низкотемпературной спиртовки ^3-5. Пластиковые трубы (PE90, Клей Адамс Intramedic ^TM) проходит над пламенем, чтобы смягчить трубку в податливый форме. Как трубка начинает таять и становится более прозрачным он удаляется от источника тепла и концы аккуратно вытащил друг от друга. Сроки удаления трубки из пламени важно, чтобы застраховать пластик не свернуть или раскол в то же время выводы. Тонкая часть трубки разрезают бритвой в зависимости от желаемого внутреннего диаметра, как это диктуется возраст образца или сегментарного уровня мозга. Для удобства размещения уплотнительного кольца на трубу, 45 ° надрез на толстый конец трубки с лезвием бритвы. Наконечником и уплотнительные кольца установлены на толстый конец приложите электрод к стволу электрода.

Для того чтобы учесть в частности размера электродов и избежать трудностей, ручной потянув электрода советы, электроды могут быть построены с использованием малых трубки вставляется в толще трубки (PE90). Длины трубы являются специфическими для требований настройки записи и переменной. Мы представляем измерений, используемых в наших экспериментах ^1-3,5. 1 см длины PTFE тонкая трубка (Зевс, мелкие детали) и 10 см длиной PE90 трубки разрезают бритвой. Концы небольшие трубки должны быть рассмотрены с целью убедиться, что они не задавить или закрыты. Они могут быть открыты с помощью насекомых контактный (Fine Инструменты наук). Каплю клея (JB Weld) помещается на середину трубки PTFE. Трубки из тефлона и клей втягиваются в PE90 трубки использованием рот всасывание на PE90 труб. 45 ° надрез на толстом конце трубки и наконечника и уплотнительное кольцо соединены, как и предыдущие.

Наконечником и BNC разъема отвинтил от коммерческих электрода всасывания. Разъем BNC замачивают в ксилоле в течение одного часа, чтобы удалить сургучной печати. Разъем затем промыть в воде и сушат.

Нижний угловой левого борта должны быть сделаны на стороне ствола. Металлический стержень нагревается использования горелки Бунзена и прессуют в существующие отверстия на боковой стороне ствола под небольшим углом. 15 см длиной 0,010 дюйма серебряной проволоки (AM Systems) разрезают и вымачивают в отбеливателя в течение пятнадцати минут. Это сделано, чтобы создать серебряное покрытие хлорид, который помогает в проведении сигнала ^6. Проволокой промывают водой, сушат, а затем припаяны BNC разъем. BNC-разъемами и серебра вставляются в ствол всасывания электрод с достаточно места для BNC разъем оставаться в стороне от ствола. Всасывающая трубка вставляется в сторону порта 2-3см. Силиконовый герметик вводят в ствол примерно на 2-3см. BNC разъем с резьбой в ствол электрод нажатием герметик вперед.

Кончик электрода теперь вкручивается в передней части электрода. Термоусадочная трубка также может быть добавлен к укреплению линии всасывания со стороны порта.

Электроды крепятся на микроманипуляторами, которые прикреплены к магнитной стоит, и поместил рядом с записью блюдо. BNC коаксиальных кабелей крепятся к headstage, который подключен к усилителю. Усилитель подключен к адаптеру (PolyView), который подключен к аналоговой к цифровой карте (National Instruments) в компьютер с ПО для сбора данных (PolyView).

При записи электрофизиологических данных, необходимо устранить все вмешательства извне. Запись блюдо, усилитель, и глава этапе размещаются на стол воздуха внутри клетки Фарадея для предотвращения электрических и механических помех, соответственно.

Представитель Результаты:

Рисунок 1. Коммерчески доступных всасывания электрода может быть изменен путем добавления тяжелее проволока серебро и пластмассовым наконечником, который стороны обращено на спиртовке, или построенных с имеющимися в продаже пластиковые трубы конкретных размеров. Кроме того, парафин герметик заменена на более долговечный герметик силиконовый конопатить.

Рисунок 2. Схема всасывающего электрода по отношению к таблице воздуха (для механической изоляции), клетка Фарадея (электрически isolatiп.), усилитель и компьютер. Следует отметить, что есть основание ссылки на блюдо записи и второе основание, на которое ссылается на таблицу воздуха и клетки Фарадея.

Нервная система развития могут быть изучены с помощью изолированного спинного мозга грызунов. В присутствии медиаторов, фиктивный передвижения могут быть сгенерированы из спинного мозга в виде узорной электрической активности ^1,3. Эти ритмичные очередей производятся на 0,2 до 0,5 Гц и по образцу в лево-право и сгибателей-разгибателей чередований. На разных стадиях развития, устойчивости и модели этой деятельности варьируется ^1. Генетические мутации могут также нарушать структурирование этой деятельности ^3,5,7. Трансгенные исследования и развития этой деятельности дают представление организации центральных шаблон генерации схемы и сообщить изучение развития нервной системы, в целом.