Princípios de Cirurgia de roedores para o Cirurgião Nova

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Pritchett-Corning, K. R., Mulder, G. B., Luo, Y., White, W. J. Principles of Rodent Surgery for the New Surgeon. J. Vis. Exp. (47), e2586, doi:10.3791/2586 (2011).

Por razões de bem-estar tanto científico e animal, a formação em conceitos básicos e técnicas cirúrgicos devem ser realizados antes mesmo de tentar realizar a cirurgia em um roedor. Estudantes, pós-doutorado acadêmicos e outros interessados ​​em realizar a cirurgia em roedores como parte de um protocolo de pesquisa pode não ter tido treinamento cirúrgico formal como parte de seu curso exigido. Cirurgia em si é uma habilidade técnica, e que irá melhorar com a prática. Os princípios da técnica asséptica, no entanto, muitas vezes permanecem inexplicados ou ignorantes. Para a maioria dos novos cirurgiões, esta informação vital é apresentado em forma fragmentada ou aprendido no trabalho, nenhum dos quais é o ideal. Pode também tornar o aprendizado como realizar uma cirurgia em particular difícil, como o cirurgião está aprendendo novas tanto uma técnica cirúrgica e os princípios de assepsia, ao mesmo tempo. Este artigo resume e faz recomendações para habilidades básicas e técnicas cirúrgicos necessários para a cirurgia de roedores bem sucedida. Este artigo é projetado para complementar treinamento hands-on por instituição do usuário.

1. Antes de realizar a cirurgia, saiba que existem requisitos legais e éticas em todo o Uso de Animais em Pesquisa e Ensino

1. Todos os procedimentos cirúrgicos devem ser aprovados pela autoridade local ético ou legal (IACUC ou Comitê de Ética ou Home Office, etc.)
2. Certifique-se que esta aprovação está no lugar antes de começar.
3. Se houver qualquer dúvida de aprovação para a cirurgia ou a aprovação para o uso de animais, não prossiga.

2. Compreensão de uma técnica asséptica

1. Esterilidade como um conceito
   1. O objetivo da técnica asséptica é reduzir ou eliminar sempre que possível a carga bacteriana normal presente no animal e no ambiente antes de iniciar a cirurgia. Isto significa que os instrumentos são esterilizados, a superfície de trabalho cirúrgico é desinfetada, eo animal e as mãos do cirurgião são desinfectados.
   2. Cirurgia, realizada corretamente, não precisa de antibióticos profiláticos ou quaisquer outros tratamentos, que não seja o alívio da dor.
   3. Mesmo com uma excelente técnica asséptica, bactérias provenientes do assunto cirúrgico pode ainda ser introduzido em uma ferida, criado cirurgicamente. Técnica asséptica apropriada limita o risco de introdução de agentes infecciosos, principalmente bactérias, em locais cirúrgicos.
2. Campo estéril
   1. O campo estéril abrange a área cirúrgica, a área preparada para o animal, e à frente do cirurgião.
3. Quebras de esterilidade
   1. Quebras de esterilidade ocorrer quando o cirurgião toca em algo fora do campo estéril. Este pode ser o rosto dela, uma luminária, uma área despreparados do animal, ou um instrumento não esterilizado.
   2. Esta é a razão antibióticos profiláticos podem ser usados.
   3. Lembre-se, uma atividade especial está acontecendo. Fique calmo, atencioso e preciso.

3. Preparação para Cirurgia

1. Cirurgia de roedores não requer um conjunto dedicado cirúrgico. Idealmente, as cirurgias devem ser realizadas em uma área separada dentro de um laboratório, como um capuz ou câmara de fluxo laminar. Independentemente disso, a área escolhida deve ser arrumado, bem iluminado, e fora do fluxo de tráfego. Cirurgias de roedores são muitas vezes realizados em uma bancada de laboratório. Antes de organizar a área cirúrgica, limpar a bancada bem com um desinfectante.
2. É útil para o cirurgião de ter um assistente. Este assistente pode ajudar com a anestesia, preparando os animais, e recuperação de monitoramento. Isso permite que o cirurgião para preparar-se enquanto os animais são preparados, encurtando assim o tempo do animal sob anestesia, e, talvez, permitindo cirurgias mais para ser realizada.
3. Organizar a área cirúrgica, para que existem três zonas distintas: preparação, cirurgia e recuperação.
4. Para a área de preparação, montar os suprimentos necessários:
   1. Pomada oftálmica lubrificante
   2. Clippers ou navalha
   3. Gaze
   4. Cirúrgicos soluções matagal
      1. Soluções matagal cirúrgicos comumente utilizados são iodóforos ou clorexidina /
      2. 70% de álcool isopropílico também é usado como parte do matagal cirúrgico.
5. Para a área cirúrgica, montar e organizar os materiais necessários.
   1. Fonte de calor para manter o roedor quentes
      1. A fonte de calor ideal é uma almofada de aquecimento de recirculação de água. Almofadas de aquecimento eléctrico não são aceitáveis ​​para a cirurgia. Luvas cirúrgicas cheia de água quente, ou aquecedores de mão química também podem ser usados. Se qualquer um dos dois últimos são usados, a temperatura do objeto devem ser cuidadosamente monitorizados durante a cirurgia.
   2. Plataforma cirúrgica
      1. Esta pode ser uma almofada estéril impermeável colocada sobre a fonte de calor.
   3. Material descartável
      1. Estas podem incluir: campos cirúrgicos estéreis, gaze, algodão aplicadores, fluidos para a administração para o roedor solução de irrigação, o tecido.
   4. Instrumentos esterilizados
      1. O complemento de instrumentos pode variar dependendo da cirurgia, mas geralmente incluem bisturis, afastadores de tecidos, fórceps, hemostats e tesoura.
      2. Esterilizador de instrumento ou de esterilização solução se os mesmos instrumentos devem ser usados ​​em mais de um assunto cirúrgico
         1. O uso de um esterilizador quente talão para esterilizar instrumentos entre animais é comum.
   5. Material para fechar a incisão cirúrgica.
      1. Os materiais utilizados dependerá do sítio cirúrgico e aplicação, mas podem incluir: sutura e agulhas, grampos e um aplicador de grampo, ou cola de tecido
   6. Qualquer outro equipamento especial necessário (aparelho estereotáxico, implantes, microscópio cirúrgico)

4. Preparar os instrumentos de cirurgia

1. Instrumentos devem estar limpos eestéril no início da cirurgia. Isso é muitas vezes feito através da criação de pacotes completos cirúrgicos que são autoclavados.
2. Instrumentos podem ser usados ​​para mais de uma cirurgia de roedores sem autoclave e reembalagem, mas devem ser limpos e esterilizados entre roedores.
   1. Se um esterilizador talão quente é usado, certifique-se de dar tempo para que os instrumentos para esfriar após a esterilização. Instrumentos podem ser arrefecidas por imersão em água estéril.
   2. Esterilizantes químicos também podem ser usadas, mas requerem um maior tempo de contato (~ 10 minutos, poderia ser de 30-60 minutos, requerem limpeza). O álcool não é um esterilizante.
3. Organizar instrumentos em drape impermeável estéril na ordem em que eles serão usados.

5. Preparar o animal para a cirurgia

1. As três coisas que são administrados antes da cirurgia são a anestesia, analgesia, e antibióticos.
   1. A anestesia é necessário para a cirurgia. Anestésicos podem ser administrados por inalação ou injeção.
      1. Anestésicos inalantes mais comuns em uso atualmente isoflurano.
      2. Mais comum injetável anestésico utilizado é uma combinação de ketamina e xilazina, possivelmente com outro acrescentou sedativo.
      3. Consulte seu veterinário para a equipe do local doses adequadas.
   2. Preventiva analgésicos são recomendados e devem ser administradas antes da cirurgia começa.
      1. Comumente usados ​​não-esteróides anti-inflamatórios incluem flunixin e carprofeno.
      2. Opióides disponíveis podem incluir buprenorfina, morfina ou fentanil.
      3. Consulte seu veterinário para a equipe do local doses adequadas e vias de administração.
   3. Com a cirurgia realizada adequadamente, os antibióticos não são geralmente necessários, com exceção de algumas cirurgias de alto risco gastrointestinal.
      1. Se os antibióticos são usados, fornecer peri-operatório (antes da primeira incisão).
      2. Consulte seu veterinário para a equipe do local antibióticos apropriados, dosagens e vias de administração.
2. Preparação cirúrgica do local da incisão
   1. Raspar o local da incisão. Geralmente raspar uma área de aproximadamente 3 vezes o tamanho da incisão proposta. O tamanho da área raspada e preparada pode ser limitado pelo tamanho do animal ou na área animal.
   2. A área depilada é desinfectados com múltiplas aplicações de solução matagal cirúrgicas e álcool isopropílico. Aplicação é tipicamente matagal cirúrgica primeiro, depois o álcool. Terminar com uma aplicação final de solução matagal.
   3. Esfregando cirúrgico é realizado em um padrão circular, começando no centro e em espiral para fora, ou em animais de pequeno porte, de forma unidirecional.
      1. Se esfregar unidirecionalmente, coloque gaze esterilizada na margem crainial da área raspada, cobrindo o cabelo do animal. Segure e estabilizar o animal delicadamente através da gaze estéril. Aplicar solução de álcool e esfregue unidirecionalmente longe da gaze estéril.
3. Mover o animal para a área cirúrgica
   1. Mover o animal com o local preparado cirúrgica para cima, e sem contato com o local preparado.
   2. A posição do animal na área cirúrgica para o local da cirurgia é para cima, de frente para o cirurgião.
4. Draping o animal
   1. Se o animal é coberto pelo assistente, o assistente deve se lembrar que a superfície exterior da cortina é considerado parte do campo estéril e não deve ser tratado pelo assistente. Draping é muitas vezes deixada para o cirurgião, e armar é incluído no pacote cirúrgico.
   2. A cortina de papel padrão à prova de água disponível é geralmente recomendado.

6. Preparar o cirurgião para a cirurgia

1. Preparação do cirurgião deve enfatizar que uma atividade especial terá lugar, no qual o cirurgião deve estar ciente de todos os seus movimentos dentro e fora do campo estéril.
2. O cabelo eo rosto são geralmente cobertos por um gorro e máscara, respectivamente. Estes devem ser novo no início da sessão cirúrgica, mas não precisam ser alteradas entre os animais.
3. Cirurgiões devem usar um vestido cirúrgica descartável, jaleco descartável e limpa ou, pelo menos um jaleco limpo. Este não precisa ser alterada entre animais, mas deve ser alterado entre as sessões de cirurgia.
4. As mãos devem ser bem limpos antes da cirurgia. Luvas cirúrgicas e luvas de exame deve ser usado. Se as luvas de exame são utilizados, eles devem ser lavadas com desinfetante cirúrgico antes de ser usado. As luvas devem ser mudadas entre os animais.

7. Durante a cirurgia

1. Manutenção do campo estéril.
   1. Uma vez que suas mãos são estéreis eo campo operacional é estéril, você terá que se mover com cuidado e lembre-se para não quebrar a esterilidade. Esta inclusãodes ter um campo estéril na qual você pode estabelecidos instrumentos, lembrando para não arranhar seu nariz, e só entregando o paciente cirúrgico através da cortina estéril.
2. Manipulação de tecidos
   1. Lidar com tecidos delicadamente. Mantenha tecidos úmidos, especialmente se a cirurgia for prolongada. Minimizar a criação de bolsas de tecido e dissecção desnecessária.
   2. Manuseio adequado dos tecidos reduz oportunidade e risco de infecções pós-operatório, a cura velocidades, e reduz a dor pós-operatória.
3. Repor os líquidos perdidos
   1. As rotas usuais de administração de fluidos em roedores são subcutânea ou intraperitoneal. Use pequenas quantidades de animais por via intraperitoneal-1-2 ml para pequenos ratos, por exemplo.
   2. Líquidos aquecidos podem ajudar a evitar uma queda na temperatura do corpo. Mouse e temperatura corporal de ratos é maior do que os seres humanos, de modo fluidos devem ser mais quentes.
4. Manter o calor
   1. Colocação de uma almofada de aquecimento abaixo do animal durante a cirurgia e da gaiola durante a recuperação é uma maneira padrão para manter a temperatura corporal de um animal.
      1. Cuidado com almofadas de aquecimento de usar apenas aqueles que estão marcados para a cirurgia. Outros podem induzir lesão térmica.
   2. Líquidos aquecidos, por via intraperitoneal dado, também pode ajudar os animais quente.
5. Operacional microscópio pode facilitar alguns procedimentos (cirurgia microvascular, os cirurgiões mais velhos, etc, podem também ser alcançados através do uso de lentes de aumento, como lupas, etc)

8. Pós-operatório Considerações sobre recuperação

1. Animais deve se recuperar em uma cama de papel plana (toalhas de papel estéreis, etc) ao invés de cama criação padrão animal.
2. Manter o animal aquecido. Calor vai ajudar na recuperação rápida. Isso é muitas vezes acompanhada da colocação da gaiola de recuperação metade em uma almofada de aquecimento, para que os animais podem escolher a sua temperatura preferida como recuperar.
3. Não retornam animais ou gaiolas para a área de animais exploração até que todos os animais aparecem normal. Qualquer animal que teve a cirurgia deve ter recuperado a capacidade de direito próprio na gaiola e ser capaz de mover-se normalmente antes de ser devolvido para a área de exploração.
4. Monitorar os animais no pós-operatório para os sinais inesperados de doença ou infecção. Animais geralmente perdem uma pequena quantidade de peso após a cirurgia, mas com analgesia adequada e fornecimento de alimentos, eles devem recuperar o peso rapidamente.

9. Pós-operatório de monitoramento é a parte final da cirurgia bem sucedida

1. Por cinco a sete dias após a cirurgia, monitorar a condição geral do animal.
   1. Pós-operatório, os animais devem ser brilhante, alerta e ativo. Eles devem estar interagindo normalmente com cagemates, comendo e bebendo, e capaz de atingir normais espécie-específicos posturas.
   2. Animais que estão deprimidas, anorexígenos, ou lento deve ser examinado quanto à causa dessa mudança. Considere a possibilidade de dor não tratada ou infecção.
2. Alimentos / hídrica também é importante para a recuperação.
   1. Haverá alguma queda no consumo após a cirurgia. Isto pode ser mitigado fazendo comida e água mais fácil acesso.
      1. Tubos mais sipper pode ser útil.
      2. Fornecimento diário de comida molhada no fundo da gaiola também pode atrair animais para comer.
   2. Alguns analgésicos em ratos resultar em pica, então estar ciente de que os animais podem comer itens inadequados (como cama) a lesões.
3. Monitor de animais para sinais de infecção na incisão. O período de perigo é os primeiros 7 dias e os animais devem ser verificadas diariamente.
   1. Sinais de infecção incluem vermelhidão, inchaço, secreção (purulenta ou serosa), dor, ou a abertura da incisão (deiscência).

10. Após sua cirurgia for concluída, o passo final é avaliar o sucesso de sua cirurgia

1. Foi o modelo induzido parte / removido / funcionalidade restaurado?
2. Estava lá como pequena dor possível?
3. Não houve infecção?
4. Sucesso!

Cirurgia experimental em roedores raramente é realizada por veterinários ou médicos. Em vez disso, é freqüentemente realizada por pesquisadores da área biomédica com pouco ou nenhum treinamento formal nos princípios da cirurgia e técnica asséptica. Em um ambiente de pesquisa, a cirurgia é normalmente aprendemos com os colegas, se geralmente não formalmente treinados também. Cirurgia realizada no laboratório de pesquisa também pode ser visto principalmente como um método de preparação de um modelo animal com o objetivo de gerar um conjunto de animais para um estudo. Enquanto toda a cirurgia particular, é geralmente uma questão de coordenação olho-mão e habilidade técnica, sendo que ambos podem ser adquiridos através da prática, princípios e habilidades associadas com o conceito de técnica asséptica (e, portanto, a cirurgia sem infecção) não pode ser adquirido exclusivamente através da prática e muitas vezes não são plenamente transmitidas para os pesquisadores.

A ausência de treinamento formal em princípios cirúrgicos podem levar a uma falta de compreensão do significado igual de ambos cirurgia tecnicamente correcta e cuidados pré e pós-operatória dos animais. Consideração de ambos a cirurgia em si e no cuidado peri-operatório de animais resultará em um aumento no bem-estar animal ea qualidade dos dados obtidos a partir do modelo cirúrgico. Por exemplo, a infecção pós-cirúrgica subclínicas podem confundir os resultados, como podem as mudanças no comportamento e fisiologia visto com dor. Como espécies de presas, a maioria dos roedores são surpreendentemente estóica e, embora sofrendo de dor pós-operatória ou infecção podem mostrar poucos sinais clínicos. Os sinais sutis de dor ou angústia em roedores são ainda mais obscurecido por uma falta geral de formação de pesquisadores biomédicos em reconhecimento desses sinais em roedores. Além disso, os roedores são mais ativos durante o ciclo escuro, quando o pessoal geralmente não estão disponíveis para ver os sinais clínicos e comportamentais de dor após a cirurgia. Este vídeo não substitui a formação cirúrgica adequada, que seria idealmente ambos os hands-on e é fornecido por sua instituição, mas é projetado para dar aos pesquisadores uma visão geral das preocupações comuns e demonstração visual da aceitas assepsia e técnicas necessárias para desenvolver uma competência mínima no desempenho da cirurgia de sobrevivência em roedores.

Todos os autores trabalham para Charles River, um grande fornecedor de animais cirurgicamente alterado para a pesquisa.

1. American College of Laboratory Animal Medicine Position on Rodent Surgery. [http://www.aclam.org/pub_rodent_surgery.html]
2. Animal Welfare, 9 CFR, Parts 1, 2, and 3.
3. Bradfield, J. F., Schachtman, T. R., McLaughlin, R. M. & Steffen, E. K. Behavioral and physiologic effects of inapparent wound infection in rats. Lab Anim Sci 42, 572-578 (1992).
4. Brown, M. J., Pearson, P. T. & Tomson, F. N. Guidelines for animal surgery in research and teaching. AVMA Panel on Animal Surgery in Research and Teaching, and the ASLAP (American Society of Laboratory Animal Practitioners). Am J Vet Res 54, 1544-1559 (1993).
5. Brown, P.A., & Hoogstraten-Miller, S. Principles of Aseptic Rodent Survival Surgery: Parts I & 2 In: Reuter J.D. and Suckow M.A. (Eds.), Laboratory Animal Medicine and Management. Ithaca: International Veterinary Information Service (www.ivis.org), Document No. B2514.0604. [http://www.ivis.org/advances/Reuter/brown1/chapter_frm.asp?LA=1] and [http://www.ivis.org/advances/Reuter/brown2/chapter_frm.asp?LA=1] (2004).
6. Institute of Laboratory Animal Resources, National Research Council. Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. Washington, DC: National Academy Press 556-70 (1996). [http://www.nap.edu/readingroom/books/labrats/]
7. Popp, M. B., & Brennan, M. F. Long-term vascular access in the rat: importance of asepsis. Am J Physiol 241, H606-612 (1981).
8. Rutala, W.A. APIC guideline for selection and use of disinfectants. Am J Infect Control. 24:313-42. (1996).

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