使用超临界流体色谱分离纯化的基本原则 - 广告

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虽然超临界流体色谱（SFC）是不是一种新技术，制备证监会正在成为越来越流行与仪器，软件和化学的进步。隔离证监会化合物的基本原则是类似的大规模制备液相色谱的基本规则。在这项研究中，我们说明了流速，样品溶解的溶剂和列从混合物的化合物隔离的选择性的影响。优化床密度（OBD）的技术¹和相匹配的化学的填充柱，确保简单和可预见的的可扩展性的小规模较大的制备分离。

1。样品制备

• 化合物的混合物1：香豆素，布洛芬，和卡马西平; 20毫克/毫升的甲醇溶液
• 化合物的混合物2：布洛芬和卡马西平; 20 mg / ml的甲醇每个
• 化合物的混合物3：布洛芬和卡马西平; 20毫克/毫升，在DMSO（二甲基亚砜）
• 化合物的混合物4：10毫克/毫升15毫克/毫升酮基布洛芬，20毫克/毫升黄酮，20毫克/毫升布洛芬，20毫克/毫升甲醇香豆素非诺洛芬，

2。实验条件

1. 色谱分析在Waters方法站证监会系统。
   专栏：贻贝证监会2 Ethylpyridine列，5微米，4.6 × 150毫米，零件编号186004937。
2. 制备色谱是一个水域准备100证监会紫外线导演系统。列：
   • 贻贝证监会2 Ethylpyridine OBD的列，5微米，19 × 150毫米，零件编号186004945
   • 贻贝证监会二氧化硅的OBD列，5微米，19 × 150毫米，零件编号186004918
   • 贻贝证监会2 Ethylpyridine OBD的列，5微米，19 × 100毫米，零件编号186004944
3. 其他方法的参数：
   • 柱温：40℃
   • 共溶剂：甲醇
   • 报告中的数字的喷油量，流量和渐变：

3。代表性的成果

流量

制备液相色谱分离中使用的流量是有限的一些因素，包括列的长度和直径，粒径，和系统背压。低粘度的二氧化碳，在证监会的流动相的主要成分，可以使用较高的流速比一般用液相色谱的。与列的长度相关的背压也较低，可以使用更长的列，以提高分辨率。较高的流速增加吞吐量，减少的时间来完成分离。如图1所示，色谱配置文件是在不同的流动提供率相同，每柱体积的百分比变化表示梯度斜率保持不变..这是通过减少运行时间在相同的比例，增加流速。

样品溶出度和载入溶剂

从混合物中分离化合物，要求该样本是完全溶于注射前。甲醇，最常见的在证监会共溶剂，不溶解于通常所需的高浓度的所有样品为典型的制备分离。大量的溶剂，如甲醇，可以限制之列，由于强溶剂作用，可以扭曲色谱质量的能力。修改流注入，所有水域预习证监会系统的专利标准配置，设计，以减少这种溶剂的效果。二甲基亚砜（DMSO）是用于净化实验室定期溶解许多不同类型的化合物。图2和图3说明了如何在证监会的二甲基亚砜注射可以导致更高的非手性的应用程序加载和更好的分辨率相比，在甲醇注入样品。

请注意：手性应用，应谨慎视为二甲基亚砜可能会严重损坏传统的涂手性固定相。如果DMSO应所需样品的溶解度，一个固定的手性柱应该被选中。

选择性

在证监会，多列常规测试，以确定提供混合物中的最佳分辨率和组件的峰形。高纯度的化合物之间的良好的决议导致对目标化合物的隔离。 2 ethylpyridine列在下面的例子，显示了优异的分离样品的混合物中的所有5个化合物。上硅胶柱分析同一样品的混合物只有三个组分峰，因为它有一个不同的选择性。香豆素和布洛芬coelute在约0.8分钟和黄酮类和非诺洛芬coelute稍晚。黄酮和布洛芬也改变硅胶柱洗脱顺序。酮基布洛芬是从两列的所有其他峰分离良好。

缩放

原油样品的混合物通常分析与筛选梯度，从比例较低的有机溶剂，在有机溶剂的比例更高，在一个相对短的的时间内结束。如果感兴趣的化合物是很好的解决，可能会直接扩展梯度进行净化处理。当所有的化合物洗脱前届发送完成的梯度和完全解决，在渐变的长度的简单的减少是可以接受的的。快流率在证监会与改良梯度相结合，大大缩短纯化目标化合物所需的总时间。

缩放分离需要匹配列化学和颗粒大小以及适当比例的注入量和梯度。水域制备证监会列都挤满了OBD的技术，确保优良的床的稳定性和相当的性能水域分析证监会列。包装OBD制备柱床密度，密切配合等效分析柱。这种创新的过程生成具有优良的稳定性，重复性和效率，制备柱。

装载的研究是在小规模，以确定有多少样品的质量可以列上加载。我们的目标是最大限度地不影响该决议的前提下，负载。改进的峰值分辨率导致更高的负载和更好的纯度分离化合物。较高的柱的含量降低了随后的实验中获得足够的材料所需的运行。从装载研究的色谱图5所示。保守的35μL进样量之间的所有混合物中的化合物，其后是规模大柱的制备运行良好的分辨率。一个总体积为600μL注入的19 × 150毫米制备证监会列。图6比较色谱法，使用在最大负载的大规模色谱用于隔离的小规模修改梯度。选择性是相同的，当使用一个隔离的侦察工具，可以归结为因素，包括系统的体积和注射模式之间的分析和制备色谱的保留时间和分辨率的purification.The差异分析色谱的关键因素。专利修饰符流注入模式*特别是雇用所有水域制备证监会系统，最大限度地减少溶剂的效果，因此，提高生产能力和效率。
*美国专利＃6576125

• 高效液相色谱法的基本原则，可应用于超临界流体色谱（SFC）。
• 超临界流体色谱法，可以运行在增加流速隔离更快和增加吞吐量。
• 溶解度有限的样品，可溶于二甲基亚砜和纯化使用SFC。使用二甲基亚砜样品溶解使得纯化过程中更容易减少样品的溶解度相关的不确定性。
• 可以提高分辨率和装载样品溶解在DMSO相比，用甲醇溶解同一样品。更好的采样分辨率高纯度的产品。高等教育负载提高效率的净化过程。
• 列的选择性影响的混合成分的分离。快速梯度筛选不同的列，导致决定的制备柱分离样品中的化合物使用。
• 分析和制备OBD的列之间的扩展能力，导致相同的分离，在小和大尺度的，提供的注射量，坡度，梯度时间正确缩放的化学成分和颗粒大小保持不变。列的可扩展性删除峰识别的不确定性，从而有利于净化过程的效率较高。

没有利益冲突的声明。

1. Optimum Bed Density (OBD) Columns: Enabling Technology for Laboratory-Scale Isolation and Purification. Waters White Paper 720001939EN 2006 Nov.

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