Hyponeophagia: माउस में चिंता का एक उपाय

Deacon, R. M. Hyponeophagia: A Measure of Anxiety in the Mouse. J. Vis. Exp. (51), e2613, doi:10.3791/2613 (2011).

वर्तमान दिन पहले, जब अल्फा chloralose जैसे तेजी से अभिनय और शक्तिशाली Rodenticides अभी तक उपयोग में नहीं थे, कीट नियंत्रकों के काम अक्सर एक "चारा शर्म" के रूप में जाना जाता घटना द्वारा बाधा उत्पन्न किया गया था. चूहों और चूहों उल्टी, पेट के हृदय दबानेवाला यंत्र की तंगी की वजह से नहीं है, तो वे पहले उपन्यास पदार्थों के बहुत ही छोटी मात्रा ingesting के एक रणनीति विकसित किया है संभावित भोजन विषाक्तता की समस्या पर काबू पाने के लिए कर सकते हैं. मात्रा तब किया जाता है धीरे - धीरे वृद्धि जब तक पशु निर्धारित किया है कि सुरक्षित और पौष्टिक पदार्थ है. तो पहले पुराने चूहे पकड़ने दलिया जैसे स्वादिष्ट पदार्थ है, जो प्रभावित क्षेत्र में, विष के लिए वाहन हो गया था डाल दिया जाएगा. केवल जब बड़ी मात्रा में आसानी से किया जा रहा खपत थे वे तो ज़हर जोड़ना होगा वाहन के स्वाद को प्रभावित नहीं करने के लिए गणना मात्रा में. जहर चारा, जो पशुओं को अब आसानी से बड़ी मात्रा में खाने के थे तो तेजी से अपने कार्य प्रदर्शन होगा.

चारा शर्म अब चिंता को मापने का एक तरीका के रूप में व्यवहार प्रयोगशाला में प्रयोग किया जाता है. मीठी मकई, पागल या मीठा गाढ़ा दूध के रूप में एक अत्यधिक स्वादिष्ट है, लेकिन उपन्यास पदार्थ, एक उपन्यास स्थिति में (या चूहों) जैसे एक नया पिंजरे चूहों के लिए पेशकश की है. नए भोजन के एक निर्धारित राशि का उपभोग करने के लिए विलंबता तब मापा जाता है.

रॉबर्ट एम.जे. Deacon पर पहुंच जा सकता है robert.deacon @ psy.ox.ac.uk

1. परिचय:

चूहों और चूहों के शुरू में एक उपन्यास भोजन की ही छोटी मात्रा में भस्म हो जाएगा. यह माना जाता है क्योंकि वे उनके उल्टी अक्षमता के कारण विषाक्तता के लिए उत्तरदायी हैं.

इसका एकमात्र अपवाद है अगर वे पहले से एक जानवर जो कि खाना खाया गया है का सामना करना पड़ा है, अगर वे इसे अपने साथियों से exhaled हवा पर ​​गंध, ^वे इसे 13 के सुरक्षित के रूप में वर्गीकृत होगा. यह है क्योंकि भोजन की गंध के साथ कार्बन Disulphide अन्य ^चूहे की सांस 12 पर बनती है. दरअसल, कार्बन Disulphide ही दोनों चूहों और चूहों के ¹⁷ में भोजन की खपत बढ़ जाती है. घटना "भोजन वरीयताओं के सामाजिक संचरण" कहा जाता है और एक सरल घ्राण सीखने ²² प्रतिमान के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है. यह ³ हिप्पोकैम्पस के घावों के प्रति संवेदनशील होना सूचित किया गया है, लेकिन ^अन्य 5 के अध्ययन के लिए इस खोज को दोहराने में असफल रहा. यह सुझाव दिया है कि neocortical cholinergic प्रणाली, विशेष रूप से orbitofrontal ¹⁹ घटक सामाजिक संचरण के लिए hippocampal cholinergic प्रणाली की तुलना में अधिक महत्वपूर्ण हो सकता है. सामाजिक संचरण भी आयु वर्ग के चूहों में स्मृति हानि ट्रैक है दिखाया गया है, शायद कमी आई CREB (शिविर प्रतिक्रिया प्रोटीन तत्व बाध्यकारी) आयु वर्ग के ⁷ हिप्पोकैम्पस में संचरण के द्वारा मध्यस्थता है.

कितनी आसानी के साथ जो कृन्तकों सामाजिक संचरण द्वारा एक भोजन वरीयता प्राप्त hyponeophagia परीक्षण के लिए मजबूत प्रभाव पड़ता है. जब लेखक hippocampal lesioned और नियंत्रण चूहों के साथ एक hyponeophagia परीक्षण प्रदर्शन कर रहा था, वह ^गलती से अगले नियंत्रण 8 परीक्षण करने के लिए कारण चूहे के पिंजरे में एक परीक्षण hippocampal चूहा (जो मीठी मकई खाया था) डाल. यह 14 एस के भीतर खाया है, केवल नियंत्रण नहीं 300 एस के एक विलंबता इसलिए महान देखभाल करने के लिए hyponeophagia परीक्षण के दौरान जैसे खाना odors को सामाजिक संचरण को रोकने के लिए लिया जाना चाहिए.

यदि पहली hyponeophagia परीक्षण एक स्पष्ट, स्पष्ट परिणाम में परिणाम नहीं करता है, एकाधिक आगे परीक्षण किया जा सकता है. 1-4 आंकड़े अलग तंत्र के उदाहरण वर्णन. परीक्षण स्थितियों है कि तैयार हो सकता है की संख्या केवल experimenter की कल्पना द्वारा सीमित है. परिणाम दो तरह दोहराया उपायों एनोवा से विश्लेषण कर रहे हैं. Hyponophagia डेटा के बाद से आम तौर पर बहुत चर अनुरूप, एक गाऊसी वितरण के लिए नहीं है और अक्सर विषम कुछ बहुत लंबे समय latencies दे जानवरों के साथ, यह पहली बार तब्दील किया जाना चाहिए, वर्गमूल या लॉग परिवर्तन चरम लंबी सुप्तावस्था को छोटा करने के लिए विशेष रूप से उपयोगी है.

2. उपकरण:

1-4 आंकड़े hyponeophagia परीक्षण सेट अप के उदाहरण के रूप में प्रस्तुत कर रहे हैं. उपन्यास खाद्य और पर्यावरण के विशिष्ट संयोजन महत्वपूर्ण नहीं हैं, हालांकि खाना अच्छी तरह से चित्रा 1 में दिखाया गया है जाहिर है सबसे अच्छा तरल पदार्थ युक्त करने के लिए अनुकूल है, हालांकि मीठी मकई की niblet यह भी रखा जा सकता है है.

सामान्य में, यह एक भोजन के साथ कवर तंत्र के फर्श का सबसे अच्छा विचार है. न केवल पशुओं के लिए इस असामान्य सतह aversive मिल दिखाई देते हैं, इस तकनीक को भी खाना खोजने से पहले अन्वेषण करने के लिए कारण घालमेल कर दिया है समाप्त. इस प्रकार एक शामक दवा anxiogenic दिखाई देती हैं क्योंकि यह पाते हैं और खाना खाने विलंबता वृद्धि हुई है क्योंकि यह हरकत उदास, नहीं, क्योंकि यह anxiogenic था हो सकता है. उदाहरण के लिए, एक प्रकाशन एक खुले मैदान ² के बीच में खाना डालने की सलाह दी. न केवल इस परिणाम खिला खोजपूर्ण समय से चकित विलंबता में करता है, यह भी चिंता, यानी खुले मैदान केंद्रीय क्षेत्र से बचने का एक अतिरिक्त पहलू, खुले क्षेत्र की मध्यस्थता चिंता है, जो में किया गया है शिकार जोखिम से बचने के लिए संबंधित के एक क्लासिक उपाय परिचय प्राकृतिक निवास ^14. हालांकि, कुछ स्थितियों में यह वास्तव में प्रयोग के एक वांछित सुविधा हो सकती है. ² में वर्णित प्रयोग का एक और नुकसान था कि चारा खुले मैदान के केंद्र में मानक प्रयोगशाला चाउ था. इस दोहरे नुकसान है कि यह उपन्यास, नहीं है और भी बहुत स्वादिष्ट है, मीठी मकई या मीठा गाढ़ा दूध जैसे खाद्य पदार्थों के विपरीत नहीं है. हम हमेशा पाया है कि चरम स्वादिष्ट के फँसाना चाहे का उपयोग कर न केवल कि खाने के लिए या उपन्यास भोजन से बचने पर संघर्ष बढ़ जाती है, लेकिन यह भी पशुओं के लिए खाना जरूरत से ज्यादा परीक्षण से पहले वंचित होने की जरूरत नहीं है, इस पहलू केवल हल्के अभाव आवश्यक है, तो यहाँ प्रस्तुत प्रोटोकॉल का रसेल और ²⁰ Burch के 3Rs "शोधन" पहलू को दर्शाता ^है.

2.1 प्रक्रिया:

राशन रातोंरात चूहों के भोजन. पिंजरे हॉपर से सभी खाना शाम को फिर परीक्षण से पहले साधारण आहार के 1 / छ माउस, जो लगभग एक तिहाई क्या वे सामान्य रूप से खा जाएगा दे. निकालें अगर वे कर रहे हैं रखे समूह यकीन है कि टुकड़े छोटे ताकि सभी चूहों के बराबर शेयर खा सकते हैं हैं. उन्हें टेस्टअगली सुबह और उनके भोजन की जगह के रूप में जल्द ही परीक्षण के रूप में समाप्त हो गया है.

चुना hyponeophagia परीक्षण तंत्र, भी छोटे पिंजरों समूह घर पिंजरे से चूहों में जो व्यक्तिगत रूप से पहले और परीक्षण के दौरान रखा जाता है की एक पंक्ति सेट. (यह शेष समूह पिंजरे में छोड़ दिया चूहों में चिंता में वृद्धि हुई है, जो हो सकता है यदि आप उत्तरोत्तर एक समूह भी भोजन वरीयताओं के सामाजिक संचरण से चूहों को हटाने से बचा जाता है यह भी मानकीकरण परीक्षण में सहायता (अकेले रखे समूह और जानवरों के बीच.) और यह सुनिश्चित करता है कि पशुओं को बेहतर सतर्क हैं.

परीक्षण उपकरण में एक माउस रखें. विलंबता खाने के उपाय. यह खाने / 2-3 के लिए लगातार पीने के रूप में परिभाषित किया गया है एस अक्सर चूहों सूंघ या भोजन संक्षेप में पहली चाटना होगा, लेकिन बाद ही निषेध के बिना लगातार खाने के लिए शुरू.

अन्य उपायों को भी लिया जा सकता है. समय एक निर्धारित अवधि के दौरान खाने के खर्च, पहले शुरू होता है खिलाने के बाद जैसे 2 मिनट, और संभवतः भी इस अवधि के दौरान खपत भोजन की राशि भी मापा जा सकता है. ब्रेन घावों कभी कभी प्रभावित ^इन 4 विभिन्न उपाय .

चित्र 1 में दिखाया तंत्र के साथ एक hyponeophagia परीक्षण चलाने का 2.2 विशिष्ट विवरण:

एक पारदर्शी प्लास्टिक सुराही (अनुमानित मात्रा 1.5, मैं एक टोंटी एक और 2 सेमी उभड़नेवाला के साथ 15 सेमी व्यास) परीक्षा तंत्र है. फुल क्रीम का प्रयोग करें (नेस्ले पिंक ब्रांड उत्कृष्ट है) उपन्यास भोजन के रूप में पानी (इसे से निपटने की सुविधा) के साथ पतला 50:50 संघनित दूध मीठा. के आधार पर माउस होते हैं और दूध की जांच की सुविधा के लिए, टोंटी भोजन पर एक छोटे alcove में अच्छी तरह से बनाने के साथ सुराही उल्टा जगह. यह अच्छी तरह से और दूध के लिए पर माउस का ध्यान केंद्रित है, तो उपचार के प्रभाव है कि धारणा प्रभावित हो सकता है की, या अभिविन्यास, खाद्य स्रोत को कम.

माउस को अच्छी तरह से दूर रखा सामना करना पड़ रहा है और सुराही धीरे स्थिति में उतारा है, ध्यान लेने के लिए माउस के पूंछ नहीं जाल. तंत्र में रखा जा रहा है ठीक से पीने के शुरू से विलंबता लिया जाता है. दूध में sniffs गिनती नहीं है, पीने के कम से कम दो सेकंड हो जाना चाहिए. किसी भी मल बोलि गणना और किसी भी पेशाब नोट (लेकिन ध्यान दें कि इन उपायों तंत्र में समय से प्रभावित हो जाएगा). कट ऑफ समय 2 मिनट है. यदि एक माउस तब तक नशे में नहीं है, यह तंत्र से हटाने और एक और एक या दो चूहों का परीक्षण, तो है कि एक 3 मिनट के बारे में बाद में पीने करने में विफल रहा है retest. इस बार शायद चिंता का स्तर के लिए इष्टतम है है जबकि अभी भी तंत्र के लिए habituation के एक राज्य के संरक्षण में कमी. यह परीक्षण आराम retest - आराम retest चक्र जब तक माउस खाता या परीक्षण का एक सेट संख्या में प्रदर्शन किया गया है जारी किया जा सकता है. 3 परीक्षण के एक अधिकतम प्रयोग भी लंबे समय बनाने के बिना पीने के चूहों में परिणाम चाहिए. परीक्षण पैरामीटर (संचयी) विलंबता पीने के है.

अन्य परीक्षणों जहां गंध एक महत्वपूर्ण भूमिका निभा सकता है के रूप में, गैर प्रयोगात्मक चूहों तंत्र में परीक्षण शुरू होने से पहले रखा जाना चाहिए. सभी चूहों के बीच एक मानकीकृत सफाई प्रोटोकॉल का पालन करें. मूत्र मल / निकालें, भोजन अच्छी तरह से मिटा और नम के साथ प्लास्टिक आधार सूखी कपड़ा / ऊतक के द्वारा पीछा किया. फिर से भरना दूध के साथ अच्छी तरह से खाना (0.2 मिलीलीटर के बारे में अच्छी तरह से रिम).

चित्रा 1. एक प्लास्टिक घरेलू सुराही एक hyponeophagia परीक्षण इकाई के रूप में उपयोग के लिए परिवर्तित कर दिया गया. मीठा गाढ़ा दूध अच्छी तरह से टोंटी के अंदर स्थित छोटे भोजन, जो आसानी से इसे करने के लिए सीधे निर्देश माउस का ध्यान में रखा जा सकता है. नेतृत्व सुराही के उल्टे आधार करने के लिए सरेस से जोड़ा हुआ वजन दीवारों के खिलाफ माउस के किसी भी आंदोलन के खिलाफ स्थिर करने में मदद करता है.

चित्रा 2. एक दो सफेद (चिंता उत्तेजक) hyponeophagia परीक्षण के लिए सफेद आवेषण अवलोकन युक्त चैम्बर. मीठा मकई उपन्यास भोजन के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है.

चित्रा 3 एक और hyponeophagia परीक्षण इकाई . उपन्यास भोजन बंदर का इलाज मिश्रण है.

चित्रा 4 एक और hyponeophagia परीक्षण इकाई . प्रस्तुत भोजन मिश्रित कटा पागल है.

3. एकाधिक hyponophagia प्रयोगों रनिंग:

पहली hyponeophagia परीक्षण एक स्पष्ट परिणाम नहीं प्रदान कर सकता है. यह अक्सर होता है और अक्सर आधारभूत (नियंत्रण) उच्च या कम भी किया जा रहा मूल्यों की वजह से, छत या फर्श प्रभाव में जिसके परिणामस्वरूप. तल प्रभाव जब hippocampal lesioned ¹⁰ चूहों का परीक्षण का सामना करना पड़ा थे, यह प्रकट है कि नियंत्रण मूल्य के लिए पर्याप्त observ करने के लिए उच्च किया जा सकता थाई hyponeophagia कम.

यह मुश्किल हो करने के लिए परीक्षण की स्थिति के लिए आवश्यक aversiveness जज कर सकते हैं. यदि चूहों कई बार किया गया है पहले ही परीक्षण (जरूरी नहीं कि चिंता से संबंधित कार्यों पर) उनके भावावेश स्तर से अगर वे ना व्यवहार परीक्षण और अधिक anxiogenic परीक्षण की आवश्यकता होगी करने के लिए ve हैं कम हो जाएगा. यह अक्सर एक ऊंचा परीक्षण वातावरण (के रूप में चित्रा 4 में) द्वारा उपलब्ध कराया जा सकता है. Aversive शोर परीक्षण स्थिति के लिए, जैसे एक ज़ोर की मात्रा या एक सफेद शोर जनरेटर पर खेल रेडियो के लिए जोड़ा जा सकता है है. उज्जवल प्रकाश भी परीक्षण वातावरण aversiveness में वृद्धि होगी.

तो, अगर पहले hyponeophagia परिणाम महत्वपूर्ण नहीं है, कई और अधिक परीक्षण स्थितियों की कोशिश और एक दोहराया उपायों एनोवा प्रदर्शन. यह एक बहुत शक्तिशाली प्रयोगात्मक डिजाइन है.

4. परिणाम की उम्मीद:

Hippocampal घावों ¹⁰ चूहों में एक hyponeophagia में मजबूत कमी का उत्पादन और हाल ही में अप्रकाशित काम दिखाया गया ^है कि यह एक चूहे के रूप में है, हिप्पोकैम्पस के उदर क्षेत्र कारण. KATP चैनल सबयूनिट Kir6.2 कमी चूहे एक परीक्षण लेकिन कम में hyponeophagia वृद्धि हुई दिखाया में एक और ^9, एक भ्रामक परिणाम है, लेकिन एक है जो जोर दिया है कि परीक्षण वातावरण में मतभेद परिणाम पर एक चिह्नित प्रभाव हो सकता है के लिए कार्य करता है, और भी उपयोगिता बताते हैं कई परीक्षणों प्रदर्शन के. 129S2/SvHsd चूहों ⁶ C57BL/6JolaHsd की तुलना में अधिक hyponeophagic थे. दरअसल, कई जन्मजात माउस उपभेदों के एक तुलना के रूप में चिह्नित अंतर तनाव ²¹ मतभेद दिखाया.

hyponeophagia परीक्षण में विलंबता आंकड़े आमतौर पर अत्यधिक परिवर्तनशील है. तकनीक यहाँ वर्णित है, खाने के पशु के लिए एक निर्धारित समय अवधि भव्य, तो बाद में retesting अगर इसे खाने के लिए विफल रहता है, अल्ट्रा लंबे समय latencies के जोखिम को कम करने और समय बचाता है experimenter कार्य करता है.

प्लस भूलभुलैया जैसे चिंता परीक्षण पर एक hyponeophagia का लाभ यह है कि अगर पहला परीक्षण के परिणामों के सांख्यिकीय महत्व हासिल करने में विफल, एक और परीक्षण एक अलग उपन्यास परीक्षण वातावरण और भोजन का उपयोग कर चला जा सकते हैं और चिंता मापा जा रहा है के प्रकार के रूप में, प्लस भूलभुलैया ¹⁶ के विपरीत एक ही है और पहले से चलाने के परीक्षण के द्वारा बदल गुणात्मक नहीं, प्रकट होता है . दोहराया एनोवा उपायों तब टेस्ट श्रृंखला का आकलन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.

अब यह ज्ञात है कि भावावेश के कई विभिन्न पहलुओं छाता शब्द "चिंता" ^11,15,18 द्वारा कवर कर रहे हैं. Hyponeophagia में परिवर्तन दिखा चूहे जरूरी खुले क्षेत्र में परिवर्तन, प्लस भूलभुलैया ऊंचा या प्रकाश अंधेरे बॉक्स परीक्षण नहीं दिखाया जाएगा. तो मस्तिष्क के इन परीक्षणों पर प्रदर्शन अंतर्निहित प्रणाली में कम से कम कुछ अलग होना चाहिए. उदाहरण के लिए, hypothalamus और amygdale hyponeophagia में अच्छी तरह से भाग लेने के रूप में वे (अन्य बातों के अलावा) भोजन का सेवन के विनियमन के साथ संबंध रहे हैं हो सकता है.

ब्याज की कोई संघर्ष की घोषणा की.

ऑक्सफोर्ड विश्वविद्यालय के लिए ओपन एक्सेस धन उपलब्ध कराने के लिए वेलकम ट्रस्ट. रॉबर्ट Deacon ऑक्सफोर्ड OXION समूह, वेलकम ट्रस्ट अनुदान WT084655MA द्वारा वित्त पोषित के एक सदस्य है.

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