The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.

Recommend to Librarian

Automatic Translation

This translation into Arabic was automatically generated through Google Translate.
English Version | Other Languages

 JoVE General

عد الخلايا الجذعية العصبية البشرية

,

Department of Pathology, University of California, Irvine (UCI)

You must be subscribed to JoVE to access this content.

This article is a part of   JoVE General. If you think this article would be useful for your research, please recommend JoVE to your institution's librarian.

Recommend JoVE to Your Librarian

Current Access Through Your IP Address

You do not have access to any JoVE content through your current IP address.

IP: 54.234.180.187, User IP: 54.234.180.187, User IP Hex: 921351355

Current Access Through Your Registered Email Address

You aren't signed into JoVE. If your institution subscribes to JoVE, please or create an account with your institutional email address to access this content.

 

Video Article Chapters

Cite this Article: عد الخلايا الجذعية العصبية البشرية

Marchenko, S., Flanagan, L. Counting Human Neural Stem Cells. J. Vis. Exp. (7), e262, doi:10.3791/262 (2007).

Abstract: عد الخلايا الجذعية العصبية البشرية

مطلوب معرفة العدد الدقيق للخلايا قابلة للحياة في حجم معين من الخلية لتعليق كثير من التلاعب الروتينية زراعة الأنسجة ، والخلايا مثل الطلاء لكيمياء سيتولوجية مناعية أو transfections الخلية. هذا البروتوكول يصف طريقة بسيطة وسريعة للتمييز بين الخلايا الحية والميتة وقياس تركيز الخلية ومجموع عدد الخلايا باستخدام عدادة الكريات. هذا الإجراء يتطلب أولا فصل الخلايا من النمو وإعادة التعليق السطحية لهم في وسائل الإعلام. المقبل ، وتضعف الخلايا في محلول أزرق التريبان (مثالي لتركيز من شأنها أن تعطي خلايا 20-50 في الربع) ووضعها في عدادة الكريات. أخيرا ، بلغ متوسط ​​بحساب الخلايا قابلة للتطبيق في العديد من الأرباع تم اختيارها عشوائيا ، وتقسيم متوسط ​​حجم رباعي واحدة 1 2 ملم (0.1 ميكرولتر) وضرب من قبل عامل التخفيف يعطي عدد من الخلايا لكل لتر. ضرب هذا التركيز من قبل الخلية في الحجم الكلي ميكرولتر يعطي إجمالي عدد الخلايا. يصف هذا البروتوكول العد الجذعية العصبية البشرية / السلائف الخلايا (hNSPCs) ، ولكن يمكن أن تستخدم أيضا لكثير من أنواع الخلايا الأخرى.

Protocol: عد الخلايا الجذعية العصبية البشرية

الركض الخلايا الجذعية العصبية البشرية

ملاحظة : يرجى الرجوع إلى الإنسان الركض الخلايا الجذعية العصبية المقالة على كيفية فصل وresuspend الخلايا. http://www.jove.com/index/Details.stp؟ID=263

إعداد تعليق لخلية العد

  1. 25 مكان ميكرولتر من 0.4 ٪ حل التريبان الأزرق و 20 ميكرولتر من وسائل الإعلام في خلية أنبوب إيبندورف.
  2. Resuspend الخلايا لتحسب من خلال استغلال بلطف الأنبوب الذي يحتوي على الخلايا في حجم معروف من وسائل الإعلام لخلق نظام التعليق متجانسة. مكان 5 ميكرولتر من الخلايا في الأنبوب إيبندورف من الخطوة السابقة. هذه الخطوة يخفف من تركيز الخلية من قبل عامل من 10.
  3. وضع غطاء من الزجاج على عدادة الكريات ، وتحميل حوالي 11-12 ميكرولتر من التعليق الخلية.

    262_Figure - 01

عد الخلايا في عدادة الكريات

  1. مراقبة الشبكة بأكملها من عدادة الكريات في مرحلة مجهر التباين. التركيز على واحد رباعي من الشبكة (مثل واحد باللون الأحمر).

    262_Figure - 02

  2. والخلايا الميتة أو التي تحتضر ويظهر اللون الأزرق لأنه قد تعرض للتلف الغشاء ، وغير قادرين على استبعاد الصبغة الزرقاء التريبان. وخلايا قابلة للحياة لا تظهر زرقاء وستكون محاطة "هالة" من الضوء على النقيض من المرحلة (ستكون "مرحلة مشرق").
  3. حساب عدد الخلايا قادرة على البقاء في واحد رباعي (منطقة 1 ملم 2). يمكنك أيضا تحديد قابلية الخلية عن طريق قسمة عدد من الخلايا قادرة على البقاء على العدد الكلي للخلايا. عدد الخلايا في الأرباع 04/03 العشوائية وتحديد متوسط ​​عدد الخلايا في رباعي. ومن المعروف منذ حجم رباعي ب 10 مل -4 أو 0.1 ميكرولتر ، يمكن تحديد تركيز الخلايا


    262_Figure - 03


  4. يمكنك استخدام الاختصار التالية لتحديد الخلايا # / ميكرولتر :

    262_Figure - 04

    مجموع عدد الخلايا في الخلايا = # أنبوب / X ميكرولتر ميكرولتر في أنبوب

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion: عد الخلايا الجذعية العصبية البشرية

يصف هذا البروتوكول بطريقة مباشرة وسريعة لتحديد تركيز خلية لمجموعة متنوعة من التجارب التي تنطوي على الخلايا. باستخدام الاختصار الموصوفة في 3D ، ويمكن للمرء بسرعة وبدقة تحديد تركيز الخلية ومجموع عدد الخلايا في حجم معين.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures: عد الخلايا الجذعية العصبية البشرية

Acknowledgements: عد الخلايا الجذعية العصبية البشرية

فإن الكتاب أن نعترف الدكتور فيليب H. شوارتز من العصبية الوطنية الجذعية البشرية الموارد خلية في مستشفى الأطفال في ليالي ، أورانج كاونتي معهد البحوث لتوفير hNSPC الثقافات.

Materials: عد الخلايا الجذعية العصبية البشرية

Name Type Company Catalog Number Comments
Phase Contrast Hemacytometer Tool Hausser Scientific 02-671-54 Distributed by Fisher under the indicated catalog #
Trypan Blue Stain 0.4% Reagent GIBCO, by Life Technologies 15250-061 Distributed by Invitrogen under the indicated catalog #

References: عد الخلايا الجذعية العصبية البشرية

1. Marchenko, S., Flanagan, L.A. Passaging Human Neural Stem Cells. Journal of Visualized Experiments, (7). http://www.jove.com/index/Details.stp?ID=263 (22 August 2007).

2. David R. Caprette. "Using a Hemacytometer." BioEd Online. No Date. Accessed 08 Jan. 2008. http://www.bioedonline.org/slides/slide01.cfm?q=%22hemacytometer%22&dpg=3.

3. David R. Caprette. "Counting Chamber (Hemacytometer)." BioEd Online. No Date. Accessed 08 Jan. 2008, http://www.bioedonline.org/slides/slide01.cfm?q=%22hemacytometer%22&dpg=2.

Ask the Author: عد الخلايا الجذعية العصبية البشرية

2 Comments

Respected sir, i am student of A.B.College of pharmacy, Sangli maharashtra, India. i am working on cancer cell line. so i want to study detail about trypan blue method. your video clip can not be open. can i get its cd version on my mail address. if yes so please send on the following address.

Mr.Sandeep B.Patil Department of pharmacology, Appasaheb birnale college of pharmacy, South Shivaji nagar, Sangli 416416 (M.S.) India.

1

Reply

Posted by: Sandeep B.PatilJune 23, 2008, 6:55 AM

Dear Mr. Patil, could you please contact me directly at support@jove.com please?  Do you have Flash 9 installed on your computer?

1.1

Reply

Posted by: AnonymousJune 23, 2008, 10:43 AM

Hello.Respected sir,I am student of developmental biology, mohageg,Iran. I am working on mesenchymal sten cells. I want to be know : Should i count all of the 4 quadrant of the grid? and then get the avearage?
I want to get population doubling time. thanks

2

Reply

Posted by: mahsaDecember 21, 2011, 1:20 PM

Dear Mahsa,
Thank you for your question. Yes, we usually count 4 quadrants and then average. By "quadrant" we mean one square circled in red and blue, as seen above. Please note the hemacytometer grid is a 3x3 matrix and contains a total of 9 "quadrants". If you wanted to be very thorough, you could count all 9 quadrants and then average.

Hope this helps. Let us know if you have any further questions.

Steve

2.1

Reply

Posted by: Steve MarchenkoDecember 29, 2011, 11:54 AM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Waiting
simple hit counter