The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.
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Department of Pathology, University of California, Irvine (UCI)
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Marchenko, S., Flanagan, L. Counting Human Neural Stem Cells. J. Vis. Exp. (7), e262, doi:10.3791/262 (2007).
Die Kenntnis der genauen Anzahl der lebensfähigen Zellen in einem bestimmten Volumen einer Zellsuspension ist für viele Routine Gewebekultur Manipulationen, wie Plattieren Zellen für Immunzytochemie oder für Zell-Transfektionen erforderlich. Dieses Protokoll beschreibt eine einfache und schnelle Methode zur Unterscheidung zwischen lebenden und toten Zellen und die Quantifizierung der Zellkonzentration und insgesamt Zellzahl unter Verwendung eines Hämozytometers. Dieses Verfahren erfordert zunächst Ablösung von Zellen aus einem Wachstum Oberfläche und Resuspendieren sie in den Medien. Anschließend werden die Zellen in eine Lösung von Trypanblau (im Idealfall bis zu einer Konzentration, die 20-50 Zellen pro Quadrant geben wird) verdünnt und in die Hämazytometer. Schließlich, im Durchschnitt der Grafen von lebensfähigen Zellen in mehreren zufällig ausgewählten Quadranten, indem die durchschnittlich um das Volumen eines 1 mm 2-Quadranten (0,1 ul) und Multiplikation mit dem Verdünnungsfaktor ergibt die Anzahl der Zellen pro l. Multipliziert man diese Zellkonzentration durch das Gesamtvolumen in ul gibt die Gesamtzahl der Zellzahl. Dieses Protokoll beschreibt das Zählen menschliche neurale Stammzellen / Vorläuferzellen (hNSPCs), kann aber auch für viele andere Zelltypen verwendet werden.
Passagierung humaner neuraler Stammzellen
Hinweis: Bitte beachten Sie die Passagierung Nervenstammzellen Artikel auf, wie zu lösen, und Zellen. http://www.jove.com/index/Details.stp?ID=263
Vorbereitung der Zellsuspension für Counting
Zählen von Zellen in der Hämazytometer
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Dieses Protokoll beschreibt eine einfache und schnelle Weg, um die Zellkonzentration für eine Vielzahl von Experimenten mit Zellen zu bestimmen. Mit der Verknüpfung in 3d beschrieben, kann man schnell und genau zu bestimmen, die Zellkonzentration und insgesamt Zellzahl in einem bestimmten Volumen.
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Die Autoren bedanken sich bei Dr. Philip H. Schwartz des National Human Neural Stem Cell Ressourcen auf die Kinder s Hospital, Orange County Forschungsinstitut für die Bereitstellung hNSPC Kulturen anzuerkennen.
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| Phase Contrast Hemacytometer | Tool | Hausser Scientific | 02-671-54 | Distributed by Fisher under the indicated catalog # |
| Trypan Blue Stain 0.4% | Reagent | GIBCO, by Life Technologies | 15250-061 | Distributed by Invitrogen under the indicated catalog # |
1. Marchenko, S., Flanagan, L.A. Passaging Human Neural Stem Cells. Journal of Visualized Experiments, (7). http://www.jove.com/index/Details.stp?ID=263 (22 August 2007).
2. David R. Caprette. "Using a Hemacytometer." BioEd Online. No Date. Accessed 08 Jan. 2008. http://www.bioedonline.org/slides/slide01.cfm?q=%22hemacytometer%22&dpg=3.
3. David R. Caprette. "Counting Chamber (Hemacytometer)." BioEd Online. No Date. Accessed 08 Jan. 2008, http://www.bioedonline.org/slides/slide01.cfm?q=%22hemacytometer%22&dpg=2.
Respected sir, i am student of A.B.College of pharmacy, Sangli maharashtra, India. i am working on cancer cell line. so i want to study detail about trypan blue method. your video clip can not be open. can i get its cd version on my mail address. if yes so please send on the following address.
Mr.Sandeep B.Patil Department of pharmacology, Appasaheb birnale college of pharmacy, South Shivaji nagar, Sangli 416416 (M.S.) India.
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ReplyPosted by: Sandeep B.PatilJune 23, 2008, 6:55 AM