The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.
Authors
The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.
This translation into Dutch was automatically generated through Google Translate.
English Version | Other Languages
Department of Pathology, University of California, Irvine (UCI)
This article is a part of JoVE General. If you think this article would be useful for your research, please recommend JoVE to your institution's librarian.
Recommend JoVE to Your LibrarianCurrent Access Through Your IP Address
You do not have access to any JoVE content through your current IP address.
IP: 50.17.109.248, User IP: 50.17.109.248, User IP Hex: 840003064
Current Access Through Your Registered Email Address
You aren't signed into JoVE. If your institution subscribes to JoVE, please sign in or create an account with your institutional email address to access this content.
Marchenko, S., Flanagan, L. Counting Human Neural Stem Cells. J. Vis. Exp. (7), e262, doi:10.3791/262 (2007).
Kennis van het precieze aantal levensvatbare cellen in een bepaald volume van een celsuspensie is vereist voor veel routine weefselkweek manipulaties, zoals plating cellen voor immunocytochemie of voor de cel transfecties. Dit protocol beschrijft een eenvoudige en snelle methode om onderscheid te maken tussen levende en dode cellen en kwantificeren van de cel concentratie en het totale aantal cellen met behulp van een hemacytometer. Deze procedure vereist in de eerste losmaken cellen van een groei oppervlak en resuspenderen ze in de media. Vervolgens worden de cellen verdund in een oplossing van trypan blauw (ideaal om een concentratie die geeft 20 tot 50 cellen per kwadrant) en geplaatst in de hemacytometer. Ten slotte is het gemiddelde van de tellingen van levensvatbare cellen in een aantal willekeurig geselecteerde kwadranten, de verdeling van de gemiddelde door het volume van een 1 mm 2 kwadrant (0,1 pi) en te vermenigvuldigen met de verdunningsfactor geeft het aantal cellen per liter Vermenigvuldigen deze cel de concentratie van het totale volume in ui geeft het totaal aantal cellen. Dit protocol beschrijft het tellen van menselijke neurale stamcellen / precursor cellen (hNSPCs), maar kan ook gebruikt worden voor vele andere celtypes.
Passage menselijke neurale stamcellen
Let op: Raadpleeg de passage menselijke neurale stamcellen artikel over hoe je los te maken en resuspendeer de cellen. http://www.jove.com/index/Details.stp?ID=263
De voorbereiding van de celsuspensie voor tellen
Het tellen van cellen in de hemacytometer
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Dit protocol beschrijft een eenvoudige en snelle manier is om de cel concentratie te bepalen voor een verscheidenheid van experimenten met cellen. Met behulp van de snelkoppeling beschreven in 3d, kan men snel en nauwkeurig bepalen van de cel concentratie en het totale aantal cellen in een bepaald volume.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
De auteurs willen dr. Philip H. Schwartz van de National Human Resource Neural Stamcel erkennen bij de Children's Hospital, Orange County Instituut voor het verstrekken van hNSPC culturen.
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| Phase Contrast Hemacytometer | Tool | Hausser Scientific | 02-671-54 | Distributed by Fisher under the indicated catalog # |
| Trypan Blue Stain 0.4% | Reagent | GIBCO, by Life Technologies | 15250-061 | Distributed by Invitrogen under the indicated catalog # |
1. Marchenko, S., Flanagan, L.A. Passaging Human Neural Stem Cells. Journal of Visualized Experiments, (7). http://www.jove.com/index/Details.stp?ID=263 (22 August 2007).
2. David R. Caprette. "Using a Hemacytometer." BioEd Online. No Date. Accessed 08 Jan. 2008. http://www.bioedonline.org/slides/slide01.cfm?q=%22hemacytometer%22&dpg=3.
3. David R. Caprette. "Counting Chamber (Hemacytometer)." BioEd Online. No Date. Accessed 08 Jan. 2008, http://www.bioedonline.org/slides/slide01.cfm?q=%22hemacytometer%22&dpg=2.
Respected sir, i am student of A.B.College of pharmacy, Sangli maharashtra, India. i am working on cancer cell line. so i want to study detail about trypan blue method. your video clip can not be open. can i get its cd version on my mail address. if yes so please send on the following address.
Mr.Sandeep B.Patil Department of pharmacology, Appasaheb birnale college of pharmacy, South Shivaji nagar, Sangli 416416 (M.S.) India.
1
ReplyPosted by: Sandeep B.PatilJune 23, 2008, 6:55 AM