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 JoVE Biology

Dessin de sang de rats à travers la veine saphène et par ponction cardiaque

1, 1, 1

1Department of Physiology and Biophysics, University of California, Irvine (UCI)

Article
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    Summary

    Prélèvements sanguins sont nécessaires dans un grand nombre d'études, par exemple pour étudier le profil pharmacocinétique d'un composé. Ici, nous montrons comment prélever du sang de rats en utilisant deux techniques: prélever du sang de la veine saphène ou par ponction cardiaque.

    Date Published: 8/23/2007, Issue 7; doi: 10.3791/266

    Cite this Article

    Beeton, C., Garcia, A., Chandy, K. G. Drawing Blood from Rats through the Saphenous Vein and by Cardiac Puncture. J. Vis. Exp. (7), e266, doi:10.3791/266 (2007).

    Abstract

    Dessin de sang de rongeurs est nécessaire pour un grand nombre de fois in vitro et in vivo. Sites de prélèvements sanguins sont nombreux chez les rongeurs: le cœur du sinus rétro-orbitaires, la veine jugulaire, veine maxillaire, la veine saphène,. Chaque technique a ses avantages et ses inconvénients, et certains ne sont pas approuvés plus dans certains pays (par exemple, rétro-orbitaires dessine en Hollande). Une discussion sur les différentes techniques de dessin sont disponibles sanguins 1-3. Ici, nous présentons deux techniques pour prélever du sang à partir de rats, chacun avec ses applications spécifiques.

    Prélever du sang de la veine saphène, à condition qu'il soit fait correctement, induit une détresse minimale chez les animaux et ne nécessite pas d'anesthésie. Cette technique permet des tirages répétés de petites quantités de sang, comme nécessaires pour les études pharmacocinétiques 4,5, la détermination de la chimie du plasma, ou numération globulaire 6.

    Ponction cardiaque permet la collecte de grandes quantités de sang à partir d'un seul animal (jusqu'à 10 ml de sang peuvent être tirées d'un rat de 150 g). Cette technique est donc très utile en tant que procédure de terminal lors de l'élaboration de sang de la saphène ne serait pas de fournir un échantillon suffisamment grand. Nous utilisons ponction cardiaque quand nous avons besoin des quantités suffisantes de sérum provenant d'une souche spécifique de rats à croître T lymphocytes in vitro lignes 4-9.

    Protocol

    Dessin de sang de rats à travers la veine saphène et par ponction cardiaque

    Remarque: Toutes les procédures doivent être approuvées par les soins des animaux de votre institut et au comité d'utilisation.

    1. Prélever du sang de la veine saphène

    1. Cette procédure est effectuée sans anesthésie et nécessite deux personnes, celui qui gère le rat, et celui qui effectue le tirage au sort.
    2. Faire un cône sur une serviette ou de détenir le rat avec des gants de manipulation de rongeurs, en laissant une patte arrière exposés.
    3. Rasage à l'arrière de la jambe avec une tondeuse électrique jusqu'à ce que la veine saphène est visible. Rasage une superficie assez grande, de sorte qu'aucun poil entrera en contact avec le site de ponction. Utilisez une petite quantité de lotion pour les mains non parfumée pour garder les cheveux non rasés loin du site de ponction.
    4. Faire un point de compression à la base de la jambe pour faire sortir l'saphène renflement (similaire à l'aide d'un garrot lors de l'élaboration du sang d'un humain ou un animal de grande taille). Piquer la veine avec une aiguille de 20G et une pelle le sang comme elle vient à l'aide d'une microvette. Pompage avec la jambe aidera à attirer plus de sang. Lorsque vous avez collecté suffisamment de sang, tenir une compresse propre sur le site de ponction pour arrêter le saignement.

    2. Prélever du sang par ponction cardiaque

    1. Cette procédure nécessite l'anesthésie et est en phase terminale. Les animaux doivent être immédiatement euthanasié à l'issue d'une ponction cardiaque.
    2. Préparer une seringue de 5 ml avec une aiguille 23G1.
    3. Profondément anesthesize le rat et le chèque pour l'anesthésie par le manque de mouvement spontané, le taux de respiration lente, et l'absence de réponse à des stimuli (tels que le pincement d'un orteil). Pour assurer une anesthésie prolongée, placez une seringue contenant une serviette trempée dans du papier anesthésiques volatils sur le nez du rat pendant la procédure.
    4. Placez le rat sur son dos, face à vous.
    5. Si vous êtes droitier, placez votre index gauche au niveau des plus bas des côtes, sans appliquer aucune pression. Le coeur sera situé ~ 1 cm au-dessus ce point, légèrement vers la droite.
    6. Retenir votre seringue à un angle de 45 degrés, insérer l'aiguille entre deux côtes et regarder pour une goutte de sang à venir dans l'aiguille. Ceci est une indication que vous êtes dans le cœur. Sans bouger de votre seringue, tirez sur le piston pour remplir la seringue. Lorsque la seringue est pleine, soigneusement le déconnecter de l'aiguille et le vider dans un tube. La seringue peut alors être ré-attaché à l'aiguille pour le dessin plus de sang. Il devrait être possible de tirer des 5-10 ml de sang d'un rat 120-180 g.
    7. Immédiatement euthanasier le rat.

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    Discussion

    Dessin de sang de la veine saphène est une façon pratique d'obtenir de petites quantités de sang, sans anesthésie. Si l'échantillonnage répété est nécessaire, consulter les règlements pour vous assurer de ne pas tirer trop de sang d'un rat.

    Dessin de sang par ponction cardiaque est une façon pratique d'obtenir de grandes quantités de sang, mais c'est une procédure terminale. L'animal doit être euthanasié à l'issue du tirage au sort du sang.

    Ces techniques (comme toutes les techniques sur des animaux vivants) doit d'abord être fait en présence d'un vétérinaire ou un technicien vétérinaire qui sera en mesure d'évaluer ce que les animaux sont manipulés correctement et ne sont pas soumis à une douleur inutile et / ou de détresse.

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    Disclosures

    Materials

    Name Type Company Catalog Number Comments
    Needle 20G 1/2 Tool BD Biosciences 305176 For puncturing the saphenous vein
    Microvette 300 Tool Sarstedt Ltd 20.1308.100 To collect blood from the saphenous vein
    Electric trimmer Tool Braintree Scientific, Inc. CLP-32130
    Needle 23 G 1 Tool BD Biosciences 305145 For cardiac puncture
    5 ml plastic syringe, slip tip Tool Fisher Scientific 14-826-12 For cardiac puncture

    References

    1. Van Herck, H., Baumans, V., Brandt, C.J.W.M., Boere, H.A.G., Hesp, A.P.M., Van Lith, H.A., Schurink, M., Beynen, A.C. Blood sampling from the retro-orbital plexus, the saphenous vein and the tail vein in rats: comparative effects on selected behavioural and blood variables. Laboratory Animals. 35, 131-139 (2001).

    2. Luzzi, M., Skoumbourdis, E., Baumans, V., Conte, A., Sherwin, C., Kerwin, A., Lang, T., Morton, D., Barley, J., Moreau, E., Weilenmann, R.F., Reinhardt, V. Collecting blood from rodents: a discussion by the laboratory animal refinement and enrichment forum. Animal Technology and Welfare. 4, 99-102 (2005).

    3. Angelow, O., Schroer, R.A., Heft, S., James, V.C., Noble, J. A comparison of two methods of bleeding rats: the venous plexus of the eye versus the vena sublingualis. Jounal of Applied Toxicology. 4: 258-260 (2006).

    4. Beeton C., Wulff H., Barbaria J., Clot-Faybesse O., Pennington M., Bernard D., Cahalan M.D., Chandy K.G., Beraud E. Selective blockade of T lymphocyte K+ channels ameliorates experimental autoimmune encephalomyelitis, a model for multiple sclerosis. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 98:13942-13947 (2001).

    5. Beeton C., Pennington M.W., Wulff, H., Singh S., Nugent D., Crossley G., Khaytin I., Chen C.Y., Calabresi P.A., Chandy K.G. Targeting effector memory T cells with a selective peptide inhibitor of Kv1.3 channels for therapy of autoimmune diseases. Mol. Pharmacol. 67:1369-1381 (2005)

    6. Beeton C.,Wulff H., Standifer N.E., Azam P., Mullen K.M., Pennington M.W., Kolski-Andreaco A., Wei E., Grino A., Counts D.R., Wang P.H., LeeHealey C.J., Andrews B.S., Sankaranarayanan A., Homerick D., Roeck W.W., Tehranzadeh J., Stanhope K.L., Zimin P., Havel P.J., Griffey S., Knaus H.G., Nepom G.T., Gutman G.A., Calabresi P.A., Chandy K.G. Kv1.3 channels are a therapeutic target for T cell mediated autoimmune diseases. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 103:17414-17419 (2006).

    7. Beeton C., Barbaria J., Devaux J., Benoliel A.-M., Gola M., Sabatier J.-M., Bernard D., Crest M., Beraud E. Selective blocking of voltage-gated K+ channels treats experimental autoimmune encephalomyelitis and inhibits T-cell activation. J. Immunol. 166:936-944 (2001).

    8. Devaux J., Forni C., Beeton C., Barbaria J., Beraud E., Gola M., Crest M. Myelin basic protein-reactive T cells induce conduction failure in vivo but not in vitro. Neuroreport 14:317-320 (2003).

    9. Beeton C., Chandy K.G. Induction and monitoring of adoptive delayed type hypersensitivity in rats, Journal of Visualized Experiments, 8, http://www.jove.com/index/Details.stp?ID=325 (2007).

    Comments

    13 Comments

    DŒs the cardiac puncture procedure also work with mice? If not, how can I do a cardiac puncture with mice?
    Reply

    Posted by: AnonymousOctober 1, 2008, 6:35 PM

    Yes, this cardiac puncture also works with mice. It is just a little more difficult as a ²0g mouse is about 10 times smaller than the rat shown on this video but, with a little practice, the mouse cardiac puncture can be done with consistent results.
    Reply

    Posted by: Christine B.October 1, 2008, 6:42 PM

    Is it possible to draw 1 mL of whole blood from the Saphenous vein of a 150 g rat?
    Reply

    Posted by: AnonymousOctober 26, 2008, 10:00 PM

    1 ml is a lot of blood and I doubt you can get that much reliably from the saphenous vein. I usually draw 50-100 ul, sometimes up to 300 ml.
    Reply

    Posted by: Christine B.October 27, 2008, 11:13 AM

    is there is any need to change the needle size for doing experiments in mice
    Reply

    Posted by: AnonymousNovember 10, 2008, 11:08 PM

    I would try with a ²3G, like for rats. You can use ²5G but then you will start seeing more hemolysis.
    Reply

    Posted by: Christine B.November 11, 2008, 4:47 PM

    Why isn't hemolysis acceptable?
    Reply

    Posted by: sumali k.January 4, 2010, 2:24 PM

    Why isn't hemolysis acceptable?
    Reply

    Posted by: sumali k.January 4, 2010, 2:25 PM

    Whether of not hemolysis during blood draw is acceptable depends on the use you will have for the blood.
    We often use blood drawn through terminal cardiac puncture for the preparation of serum for tissue culture. In this case we try to avoid hemolysis as this affects cell survival in culture. For other applications, hemolysis may not represent a problem.
    Reply

    Posted by: AnonymousJanuary 4, 2010, 2:34 PM

    How much heparin to you add to your tubes before collecting the blood?
    Reply

    Posted by: Alexis L.February 3, 2010, 1:09 PM

    If you want to collect plasma, prepare a solution of 5% heparin in PBS and add 0.1 ml of it to each 3-5 ml syringe.
    Reply

    Posted by: AnonymousFebruary 3, 2010, 1:12 PM

    For vena saphena: If you puncture the vein lower (next to the ankle), it's easier, because the vein in this area is more on the surface.
    Reply

    Posted by: AnonymousAugust 17, 2011, 3:45 AM

    I'm a graduate student from P.R.China.In our lab, we draw blood from mice from the retro-orbital sinus, which technique I find really disconcerting. I'm fascinated by your technique demonstrated here, and I would be grateful if Ms Beeton can send me the written protocol via e-mail.
    Reply

    Posted by: AnonymousJanuary 31, 2012, 7:32 PM

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