The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.
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Department of Medicine, University of Toledo Health Science Campus
Prakash, A., Bechtel, J., Fedorov, A. Genomic MRI - a Public Resource for Studying Sequence Patterns within Genomic DNA. J. Vis. Exp. (51), e2663, doi:10.3791/2663 (2011).
गैर कोडन intergenic क्षेत्रों, introns, और exons के untranslated क्षेत्रों सहित जटिल eukaryotes, जीनोमिक क्षेत्रों में गहराई से उनके nucleotide संरचना में गैर यादृच्छिक हैं और अनुक्रम पैटर्न के एक जटिल मोज़ेक से मिलकर बनता है. दृश्यों और लंबाई में 30-10000 nucleotides कि एक विशेष या अड्डों के आधार संयोजन से समृद्ध कर रहे हैं (जैसे (जी + T) अमीर, प्यूरीन युक्त, आदि - इन नमूनों तथाकथित मध्य रेंज inhomogeneity क्षेत्रों (एमआरआई) शामिल हैं ). एमआरआई क्षेत्रों (गैर - बी फार्म) असामान्य डीएनए संरचना है कि अक्सर जीन की अभिव्यक्ति, पुनर्संयोजन, और अन्य आनुवंशिक प्रक्रियाओं (Fedorova Fedorov 2010) के नियमन में शामिल हैं के साथ जुड़े रहे हैं. म्यूटेशनों कि को कम करने के लिए करते हैं उनके अनुक्रम inhomogeneity अतिरिक्त कार्यक्षमता और इन जीनोमिक दृश्यों के महत्व (प्रकाश एट अल 2009) का समर्थन करता है के खिलाफ एक एमआरआई क्षेत्रों के भीतर एक मजबूत निर्धारण पूर्वाग्रह के अस्तित्व.
यहाँ हम एक स्वतंत्र रूप से उपलब्ध इंटरनेट संसाधन का प्रदर्शन - जीनोमिक एमआरआई कार्यक्रम पैकेज क्रम में जीनोमिक दृश्यों के कम्प्यूटेशनल विश्लेषण के लिए डिजाइन खोजने के लिए और उन्हें भीतर विभिन्न एमआरआई पैटर्न विशेषताएँ (. बेकटेल एट अल 2008) . इस पैकेज भी विभिन्न गुणों प्राकृतिक इनपुट डीएनए दृश्यों के लिए और पत्राचार के स्तर के साथ यादृच्छिक अनुक्रम की पीढ़ी की अनुमति देता है. इस संसाधन के मुख्य लक्ष्य के लिए गैर कोडन डीएनए कि अभी भी शायद ही जांच कर रहे हैं और पूरी तरह से अन्वेषण और मान्यता का इंतजार के विशाल क्षेत्रों की परीक्षा की सुविधा है.
सभी अखबार में इस्तेमाल किया कार्यक्रमों perl का उपयोग कर लिखा गया है, और सभी वेब पृष्ठों PHP का उपयोग कर बनाया गया है.
1. प्रारंभ बिंदु:
Http://mco321125.meduohio.edu/ ~ jbechtel / gmri / पर ऑनलाइन जीनोमिक एमआरआई पैकेज के मुख पृष्ठ खोलें. वेब संसाधन भी "(How-to/README) सहायता" लिंक, जबकि जीनोमिक एमआरआई और इसी तरह एल्गोरिदम पर प्रकाशित सभी सामग्री "प्रासंगिक संसाधनों के लिए लिंक" लिंक में सूचीबद्ध हैं में निर्देशों / कार्यक्रमों पर स्पष्टीकरण प्रदान करता है.
2. तैयारी और इनपुट अनुक्रम (ओं) के अपलोड.
GMRI विश्लेषण सत्र शुरू FASTA स्वरूपित अनुक्रम (ओं) के साथ एक फ़ाइल बनाएँ. इस प्रारूप में प्रत्येक nucleotide अनुक्रम एक एकल ">" चरित्र है कि एक पहचानकर्ता का प्रतिनिधित्व करता है, इस क्रम का एक छोटा वर्णन के द्वारा एक ही पंक्ति पर पीछा के साथ शुरू की रेखा के साथ पहले किया जाना चाहिए. GMRI विश्लेषण के लिए nucleotide दृश्यों को भी आर, वाई, एन, एक्स, आदि Hwever, गैर एक, टी, सी की तरह पात्रों के परमिट, जी अक्षर प्रोग्राम द्वारा संसाधित नहीं होगा और को छोड़ दिया जाएगा. अनुक्रम किया गया है जिसमें दोहराए तत्वों "नकाबपोश" ("एन" द्वारा प्रतिस्थापित) इनपुट के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है. ध्यान दें कि अनुक्रम अक्षर मामले असंवेदनशील हैं.
नोट: इसके बाद इनपुट अनुक्रम "userfile" के रूप में संदर्भित कर रहे हैं.
3. इनपुट अनुक्रम (वैकल्पिक) Oligonucleotide आवृत्ति वितरण.
"एसआरआई विश्लेषक" टैब (शीर्ष पंक्ति) पर क्लिक करें क्रम में इनपुट दृश्यों के पूरे सेट के लिए oligonucleotide आवृत्तियों की एक वितरण प्राप्त है . परिचित करा एसआरआई कम दूरी inhomogeneity के लिए खड़ा है. इस मोड़ पर, उपयोगकर्ता oligonucleotides के उच्चतम लंबाई (2 से 9 nucleotides तक, डिफ़ॉल्ट रूप से 6 एनटीएस से) जिसके लिए आवृत्तियों की गणना की जाएगी निर्दिष्ट कर सकता है. यह चयन "अधिकतम oligomer आकार" सूची बॉक्स के भीतर वांछित विकल्प पर क्लिक करके किया जाता है . फिर "फ़ाइल का विश्लेषण" बटन दबाएँ करने के लिए अभिकलन आरंभ. इनपुट अनुक्रम संरचना का एक मोटा प्रतिनिधित्व तुरंत इस वेब पृष्ठ के मध्य में एक छोटी मेज के रूप में दिखाई देगा और "userfile.comp.tbl" के रूप में डाउनलोड. इस तालिका में केवल इनपुट अनुक्रम के भीतर सबसे अधिक है और कम से कम प्रचुर मात्रा में oligonucleotides का प्रतिनिधित्व करता है.
सभी संभव oligonucleotides के लिए पूरे आवृत्ति तालिका एक "userfile.comp" नाम फ़ाइल, जो "डाउनलोड संरचना फ़ाइल" लिंक के माध्यम से प्राप्त किया जा सकता है के रूप में उत्पन्न होता है.
नोट: एसआरआई विश्लेषक सभी अतिव्यापी oligonucleotides के पूरे सेट मायने रखता है.
4. इनपुट अनुक्रम (वैकल्पिक) के रूप में समान Oligonucleotide संरचना के साथ यादृच्छिक अनुक्रम उत्पन्न करता है.
(प्रोटोकॉल के चरण 3 के समापन के इस कार्य के लिए आवश्यक है).
5. इनपुट और यादृच्छिक अनुक्रम के inhomogeneity मध्य रेंज (एमआरआई) का विश्लेषण.
6. अतिरिक्त जीनोमिक एमआरआई पैकेज (वैकल्पिक) के अंतर्गत प्रोग्राम्स .
जीनोमिक एमआरआई संसाधन भी बहुत विशिष्ट यादृच्छिक अनुक्रम की पीढ़ी के लिए दो उन्नत विकल्प है. वे "एमआरआई जेनरेटर" और "शीर्ष पंक्ति में सीडीएस जेनरेटर" टैब के माध्यम से उपलब्ध हैं.
7. प्रतिनिधि परिणाम
इस प्रोटोकॉल के एक nucleotide दृश्यों के compositional inhomogeneity अध्ययन करने के लिए उपयोगकर्ता की अनुमति देता है. महत्वपूर्ण बात, यह भी एक oligonucleotide इनपुट अनुक्रम की approximating संरचना के साथ यादृच्छिक दृश्यों की एक किस्म की पीढ़ी का समर्थन करता है. आमतौर पर, जटिल eukaryotes के जीनोमिक दृश्यों संरचना में सजातीय नहीं हैं, बल्कि अनुक्रम विशेष nucleotides द्वारा समृद्ध क्षेत्रों का एक जटिल मोज़ेक (उदाहरण के लिए, प्यूरीन, अमीर (जी टी +) समृद्ध, (ए + T) अमीर का प्रतिनिधित्व करते हैं, आदि). (30-1000 बीपी) मध्य दूरी पैमाने पर इन पैटर्न एमआरआई विश्लेषक की चित्रमय उत्पादन है कि ऊपरी नीला spikes और कम लाल spikes के रूप में सामग्री गरीब क्षेत्रों (आंकड़े 1 और 2 देखें) के रूप में सामग्री से भरपूर क्षेत्रों का चयन दिखाता है द्वारा कल्पना कर रहे हैं. आमतौर पर, एक प्राकृतिक (चित्रा 1) अनुक्रम में किसी भी सामग्री अमीर और गरीब सामग्री के क्षेत्रों की संख्या ही oligonucleotide होने क्षेत्रों इसी यादृच्छिक दृश्यों में (चित्रा 2) के एक ही प्रकार की संख्या की तुलना में अधिक बार के आदेश पर है रचना. Nucleotide संरचना में मध्य दूरी inhomogeneity के साथ ये अनुक्रम खंडों उपयोगकर्ता के लिए ब्याज की हो सकता है. वे आगे की जांच पड़ताल के लिए जीनोमिक एमआरआई आउटपुट फाइल से उपलब्ध हैं .

चित्रा 1 5.7 कदम से एमआरआई विश्लेषक चित्रमय उत्पादन का एक उदाहरण है. परिणाम 44 मानव introns के एक नमूना पर प्राप्त किया गया है. ब्लू सलाखों इन introns के साथ जीसी अमीर क्षेत्रों की स्थिति का प्रतिनिधित्व करते हैं. लाल सलाखों जीसी गरीब (या एटी अमीर) एमआरआई क्षेत्रों का प्रतिनिधित्व करते हैं. y-अक्ष में दी गई सामग्री प्रकार के लिए ऊपरी और निचले थ्रेसहोल्ड में शामिल है.

चित्रा यादृच्छिक अनुक्रम "userfile.rand1_4" के लिए 2. एमआरआई विश्लेषक उत्पादन .
ग्राफिक्सएमआरआई की एक बेतरतीब ढंग से उत्पन्न एसआरआई जनरेटर प्रोग्राम का उपयोग कर अनुक्रम के भीतर कैलोरी प्रतिनिधित्व.

चित्रा 3. एमआरआई विश्लेषक से एक शाब्दिक आउटपुट फाइल की शुरुआत का एक उदाहरण है.
सभी सामग्री अमीर और गरीब सामग्री प्रोग्राम के द्वारा पाया दृश्यों अंतिम स्तंभ (चौथा) में प्रस्तुत कर रहे हैं. उनके रिश्तेदार पदों खिड़कियों की संख्या में मापा जाता है, प्रथम स्तंभ में दिखाया जाता है. दूसरे और तीसरे स्तंभ सामग्री अमीर और गरीब सामग्री क्षेत्रों, क्रमशः के लिए संकेतक हैं.
मध्य दूरी की तराजू पर inhomogeneous nucleotide संरचना (3-10 nucleotides) के साथ क्षेत्र जटिल eukaryotes के जीनोम में overabundant हैं और कहीं भी पाया जा सकता है है (intergenic क्षेत्रों, introns, exons के untranslated क्षेत्रों, दोहराए तत्वों). इन क्षेत्रों में अक्सर असामान्य डीएनए रचना के साथ जुड़े रहे हैं. उदाहरण के लिए, purine-/pyrimidine-rich दृश्यों डीएनए triplexes (एच डीएनए) के रूप में करते हैं; प्यूरीन / pyrimidine अड्डों बारी के साथ दृश्यों Z-डीएनए रचना के साथ जुड़े रहे हैं, (जी + C) अमीर क्षेत्रों में संरचनात्मक असामान्यताएं एक्ज़िबिट बी - आदि (Fedorov और Fedorova 2010 द्वारा समीक्षा);, डीएनए और रीढ़ दरार का खतरा हो सकता है एक तत्व unwinding के डीएनए (ए + T) अमीर क्षेत्रों एक असामान्य संरचना के रूप में हो सकता है. इन मध्य दूरी के पैटर्न के कुछ (जैसे (जी टी + क्षेत्रों) अमीर) शायद ही जांच कर रहे हैं और अभी भी पूरी तरह से अन्वेषण और मान्यता का इंतजार है. हमारे जीनोमिक एमआरआई वेब संसाधन के मुख्य उद्देश्य के लिए उपयोगकर्ताओं को उनके आगे प्रयोगात्मक विश्लेषण के लिए और उनके संभव कार्यों के अन्वेषण के लिए इन एमआरआई क्षेत्रों की पहचान में मदद करने के लिए है. एमआरआई क्षेत्रों के ज्ञान में शामिल किया जा सकता है और जीन भविष्यवक्ता कार्यक्रमों की नई पीढ़ी (2010 शेपर्ड) में सुधार लाने और जीनोम कार्यों और गुणों के बारे में हमारी समझ अग्रिम.
ब्याज की कोई संघर्ष की घोषणा की.
हम शमूएल शेपर्ड, पीटर Bazeley, और जीनोमिक एमआरआई वेब पृष्ठों के प्रशासन के लिए जॉन डेविड बेल करने के लिए आभारी हैं . यह काम राष्ट्रीय विज्ञान फाउंडेशन कैरियर पुरस्कार "intron सेलुलर भूमिकाओं की जांच" द्वारा समर्थित किया गया [अनुदान संख्या MCB 0643542]
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