Les micropuces Silicon pour la manipulation d'interaction cellule-cellule

Préparation des cultures cellulaires:

1. Commencez avec des pièces en silicium recouvert par du plasma traité polystyrène.
2. Manteau avec les parties appropriées des protéines de la matrice extracellulaire au support de fixation du type de cellule désiré. Pour les hépatocytes, incuber dans 50 g / ml de collagène une solution à 37 ° C pendant 45 min. Pour les fibroblastes 3T3, aucune matrice est nécessaire.
3. Verrouillage des pièces avec des rôles complémentaires dans la configuration de contact.
4. Faire tremper dans de l'éthanol à 70% pour un minimum de 10 minutes pour stériliser. Rincez 2x dans le trou DDH ₂ O, et 1x dans les milieux de culture cellulaire.
5. Cellules semences à une concentration de 500 000 cellules / ml dans le milieu de culture approprié. Utiliser 1 ml dans chaque puits d'une plaque de culture à 12 puits.
6. Incuber pendant 1 heure, en agitant toutes les 15 min pour remettre en suspension les cellules uniformément.
7. Si une monocouche confluente n'a pas été atteint après 1 h, aspirer la suspension cellulaire et l'ensemencement répéter avec une suspension fraîche. Répétez jusqu'à ce que la densité cellulaire désiré a été atteint.
8. Retirer les pièces complémentaires. Transfert des pièces aux puits frais et incuber une nuit pour permettre aux cellules de se conformer totalement et la propagation.
9. Formulaire de co-cultures par des pièces de verrouillage appropriés soit dans le fossé ou la configuration de contact. La configuration peut être modifiée à tout point désiré pendant la culture.
10. Lors du changement de support, prenez soin de laisser les piles sèches pour le temps aussi peu que possible, de préférence juste une seconde ou deux. Dessinez fluide avec une main et de remplacer immédiatement les médias utilisant l'autre main.

Pièces de silicium de traitement pour la réutilisation:

1. Bande de cellules en les trempant dans l'eau de Javel et de rinçage à l'eau.
2. Laisser les pièces à sécher complètement. Faire tremper dans du toluène pendant 2 h à bande de polystyrène.
3. Nettoyez en solution piranha (1:2 H ₂ O _2: H ₂ SO ₄₎ chauffé à 120 ° C.
4. Rincer pendant 15 min sous un flux continu de DDH ₂ O. Si vous n'allez pas déposer polystyrène immédiatement, stocker les pièces dans l'eau.
5. Dissoudre le polystyrène dans le toluène à 100 mg / ml. Vortex en polypropylène coniques pendant environ 1 heure ou jusqu'à dissolution complète. Un peu plus de 1 ml de solution est nécessaire pour chaque 10 parties.
6. Solution de polystyrène Spin manteau sur les pièces de silicium individuels à 2400 rpm pendant 30 sec.
7. Cuire au four pendant au moins 5 h à 120 ° C.
8. Traiter avec un plasma d'oxygène (200 mTorr, 200 W) pendant 1 min.

Ce système est unique en ce qu'elle permet à l'organisation spatiale du tissu à manipuler dynamiquement au niveau cellulaire. Par conséquent, ce dispositif a permis à un certain nombre de nouvelles expériences biologiques, couvrant des sujets tels que la dynamique de signalisation intracellulaire, contactez-médiée par rapport signalant solubles, les décisions du destin cellulaire, la toxicologie, et la diaphonie cellulaire. Ce dispositif devrait être largement généralisables puisque le substrat de culture est en plastique standard de culture de tissus, et le système est compatible avec les méthodes standard de culture et d'essais. Par conséquent, nous pensons que cette plateforme sera d'intérêt général comme un outil pour l'étude de la cellule-cellule interaction entre plusieurs cellules et des tissus.