Submit
Browse  

The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.

Recommend to Librarian

Automatic Translation

This translation into Turkish was automatically generated through Google Translate.
English Version | Other Languages

 JoVE Neuroscience

Bozulmamış Duyu Organ Öncü Hücreler Canlı hücre Görüntüleme Drosophila Pupa

,

Epigenetics and Progenitor Cells Keystone, Fox Chase Cancer Center

 

Video Article Chapters

Cite this Article: Bozulmamış Duyu Organ Öncü Hücreler Canlı hücre Görüntüleme Drosophila Pupa

Zitserman, D., Roegiers, F. Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae. J. Vis. Exp. (51), e2706, doi:10.3791/2706 (2011).

Abstract: Bozulmamış Duyu Organ Öncü Hücreler Canlı hücre Görüntüleme Drosophila Pupa

Yeşil Floresan Protein (GFP) keşfi bu yana, temel biyolojik mekanizmaları anlamak için bir araç olarak canlı hücre görüntüleme devrimci bir değişiklik olmamıştır. Çarpıcı bir ilerleme olan geniş araç mutantlar ve transgenik hatları evrimsel olarak korunmuş gelişimsel ve hücre biyolojik mekanizmaları incelemek için uygun bir model sunar Drosophila, özellikle belirgin olmuştur. Drosophila yetişkin periferik sinir sistemi (PNS) kontrol hücre kaderinin özellikleri kapak kafa, toraks, karın, bacak ve yetişkin sineğin kanat bireysel mechanosensory organlar olduğunu kıllar ve çalışılmıştır mekanizmalarının anlaşılması ile ilgilenen Notch bağımlı hücre kaderinin kararları mekanizmaları anlamak için bir model sistem olarak. Microchaetes (veya küçük kıllar) duyu organı habercisi (SOP), pupa toraks epitel hücreleri boyunca dağıtılır ve pupariation başlamasından sonra ilk 12 saat içinde belirtilmiştir. Şartname sonra, mitoz sırasında bir yavru hücre Numb hücre kaderini belirleyici ayırma, SOP hücreler bölünmeye başlar. Notch sinyalizasyon yolağı hücre özerk bir inhibitörü olarak Numb fonksiyonları.

Burada, bir arada kullanarak, sağlam pupa toraks içinde SOP hücre ve onun nesillerinde protein dinamikleri takip etmek bir yöntem doku-spesifik Gal4 sürücüleri ve GFP etiketli füzyon proteini 1,2. Bu teknik, sabit bir doku veya kültür üzerinden avantaja sahiptir eksplantlar bu şartname nöral prekürsör büyüme ve organ terminal farklılaşma bir organ bize tüm gelişmeleri takip sağlar çünkü. Bu nedenle doğrudan terminal farklılaşma değişiklikler hücre davranış değişiklikleri ilişkilendirmek. Ayrıca, mutant ve wild tip koşullar altında mitotik SOP etiketli proteinlerin dinamikleri değerlendirmek için bir repressible hücre işaretleyici (MARCM) sistemi ile canlı görüntüleme tekniği mozaik analizi ile birleştirebilirsiniz. Bu tekniği kullanarak, biz ve diğerleri, düzenlenmesi ve asimetrik hücre bölünmesi SOP hücreleri (örnekler referans 1-6,7, 8) Notch sinyal aktivasyon kontrol yeni bakış açıları ortaya çıkmıştır .

Protocol: Bozulmamış Duyu Organ Öncü Hücreler Canlı hücre Görüntüleme Drosophila Pupa

Discussion: Bozulmamış Duyu Organ Öncü Hücreler Canlı hücre Görüntüleme Drosophila Pupa

Disclosures: Bozulmamış Duyu Organ Öncü Hücreler Canlı hücre Görüntüleme Drosophila Pupa

Çıkar çatışması ilan etti.

Acknowledgements: Bozulmamış Duyu Organ Öncü Hücreler Canlı hücre Görüntüleme Drosophila Pupa

Materials: Bozulmamış Duyu Organ Öncü Hücreler Canlı hücre Görüntüleme Drosophila Pupa

Name Company Catalog Number Comments
Scotch double stick tape
Glass slide
18mmX18mm coverslip
Forceps
Whatman paper
Silicone vacuum grease Dow Corning
5 ml syringe
Pipetter
Confocal or epifluorescence microscope

References: Bozulmamış Duyu Organ Öncü Hücreler Canlı hücre Görüntüleme Drosophila Pupa

  1. Gho, M., Bellaiche, Y. & Schweisguth, F. Revisiting the Drosophila microchaete lineage: a novel intrinsically asymmetric cell division generates a glial cell. Development 126, 3573-3584 (1999).
  2. Roegiers, F., Younger-Shepherd, S., Jan, L. Y. & Jan, Y. N. Two types of asymmetric divisions in the Drosophila sensory organ precursor cell lineage. Nat Cell Biol 3, 58-67 (2001).
  3. Bellaiche, Y., Gho, M., Kaltschmidt, J. A., Brand, A. H. & Schweisguth, F. Frizzled regulates localization of cell-fate determinants and mitotic spindle rotation during asymmetric cell division. Nat Cell Biol 3, 50-57 (2001).
  4. Emery, G. & Knoblich, J. A. Endosome dynamics during development. Curr Opin Cell Biol 18, 407-415 (2006).
  5. Roegiers, F., Younger-Shepherd, S., Jan, L. Y. & Jan, Y. N. Bazooka is required for localization of determinants and controlling proliferation in the sensory organ precursor cell lineage in Drosophila. Proc Natl Acad Sci U S A 98, 14469-14474 (2001).
  6. Roegiers, F.et al. Frequent unanticipated alleles of lethal giant larvae in Drosophila second chromosome stocks. Genetics 182, 407-410, doi:genetics.109.101808 [pii] 10.1534/genetics.109.101808 (2009).
  7. Tong, X.et al. Numb independently antagonizes Sanpodo membrane targeting and Notch signaling in Drosophila sensory organ precursor cells. Mol Biol Cell 21, 802-810, doi:E09-09-0831 [pii] 10.1091/mbc.E09-09-0831 (2010).
  8. Jafar-Nejad, H.et al. Sec15, a Component of the Exocyst, Promotes Notch Signaling during the Asymmetric Division of Drosophila Sensory Organ Precursors. Dev Cell (2005).
  9. Karbowniczek, M.et al. The evolutionarily conserved TSC/Rheb pathway activates Notch in tuberous sclerosis complex and Drosophila external sensory organ development. J Clin Invest 120, 93-102, doi:40221 [pii] 10.1172/JCI40221 (2010).
  10. Coumailleau, F., Furthauer, M., Knoblich, J. A. & Gonzalez-Gaitan, M. Directional Delta and Notch trafficking in Sara endosomes during asymmetric cell division. Nature 458, 1051-1055, doi:nature07854 [pii] 10.1038/nature07854 (2009).
  11. Emery, G.et al. Asymmetric rab11 endosomes regulate delta recycling and specify cell fate in the Drosophila nervous system. Cell 122, 763-773 (2005).
  12. Justice, N., Roegiers, F., Jan, L. Y. & Jan, Y. N. Lethal giant larvae acts together with numb in notch inhibition and cell fate specification in the Drosophila adult sensory organ precursor lineage. Curr Biol 13, 778-783 (2003).

Ask the Author: Bozulmamış Duyu Organ Öncü Hücreler Canlı hücre Görüntüleme Drosophila Pupa

0 Comments

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Waiting
simple hit counter