The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.
This translation into Hebrew was automatically generated through Google Translate.
English Version | Other Languages
Epigenetics and Progenitor Cells Keystone, Fox Chase Cancer Center
Zitserman, D., Roegiers, F. Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae. J. Vis. Exp. (51), e2706, doi:10.3791/2706 (2011).
מאז גילויו של חלבון פלואורסצנטי ירוק (GFP), חל שינוי מהפכני השימוש הדמיה לחיות תאים ככלי להבנת המנגנונים הביולוגיים הבסיסיים. התקדמות מרשימה כבר בולט במיוחד תסיסנית, אשר נרחב ערכת כלים של מוטנטים קווי מהונדס מספק מודל נוח ללמוד מבחינה אבולוציונית, שימור מנגנונים ביולוגיים התפתחותיים התא. אנחנו מעוניינים להבין את מנגנוני התא לשלוט בגורל מפרט במערכת למבוגרים העצבים ההיקפית (PNS) ב תסיסנית. זיפים כי כיסוי ראש, חזה, בטן, רגליים וכנפיים של הזבוב הבוגר הם איברים mechanosensory הפרט, נחקרו כמערכת מודל להבנת המנגנונים של Notch תלויי החלטות גורל התא. חושי מבשר איבר (SOP) תאים של microchaetes (או זיפים קטנים), מופצים ברחבי האפיתל של בית החזה גלמי, והם שצוין במהלך 12 השעות הראשונות לאחר תחילת pupariation. לאחר מפרט, התאים מתחילים להתחלק SOP, מבודד את גורל התא הקובע Numb לתא בת אחת במהלך מיטוזה. פונקציות כמו Numb מעכב תאים אוטונומיים של מסלול איתות Notch.
כאן, אנו מציגים שיטה לעקוב אחר הדינמיקה חלבון בתא SOP והצאצאים שלה בתוך בית החזה גלמי שלמים באמצעות שילוב של רקמות ספציפיות Gal4 נהגים GFP-tagged חלבונים 1,2 היתוך. טכניקה זו יש יתרון על פני רקמת קבוע או תרבותי explants משום שהיא מאפשרת לנו לעקוב אחר התפתחות שלם של איבר מן המפרט של מבשר העצבית לצמיחה בידול הטרמינל של האיבר. מכאן ניתן לתאם ישירות לשינויים בהתנהגות התאים לשינויים בידול סופנית. יתר על כן, אנו יכולים לשלב את טכניקת דימות לחיות עם ניתוח פסיפס עם סמן תא מערכת repressible (MARCM) כדי להעריך את הדינמיקה של החלבונים המתויגים ב SOPs mitotic בתנאים מוטציה או wildtype. באמצעות טכניקה זו, אנו ואחרים חשפו תובנות הרומן לתוך ויסות חלוקת התא אסימטרי הבקרה של הפעלת Notch איתות בתאי SOP (דוגמאות כוללות הפניות 1-6,7, 8).
אין ניגודי אינטרסים הכריז.
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Scotch double stick tape | |||
| Glass slide | |||
| 18mmX18mm coverslip | |||
| Forceps | |||
| Whatman paper | |||
| Silicone vacuum grease | Dow Corning | ||
| 5 ml syringe | |||
| Pipetter | |||
| Confocal or epifluorescence microscope |