电解下腔静脉静脉血栓形成的模型（EIM）

Diaz, J. A., Wrobleski, S. K., Hawley, A. E., Lucchesi, B. R., Wakefield, T. W., Myers, Jr., D. D. Electrolytic Inferior Vena Cava Model (EIM) of Venous Thrombosis. J. Vis. Exp. (53), e2737, doi:10.3791/2737 (2011).

为了研究血栓形成，血栓形成的决议，并测试潜在的治疗化合物（1）动物模型为下肢深静脉血栓（DVT）的研究中的一个至关重要的作用。目前正在开发利用新的化合物在治疗和预防深静脉血栓形成。潜在的治疗拮抗剂化合物运送到受影响的血栓静脉一直是个问题。在治疗应用中，一个模型，采用局部瘀，始终生成内主要静脉血栓已于日前成立。电解下腔静脉模型（EIM）是允许在连续血流存在血栓形成的深静脉血栓形成的小鼠模型。这个模型允许治疗药物，在接触一个时尚动感的血栓，而且是比其他车型（1）深静脉血栓形成更为敏感。此外，这种血栓模型准确模拟血栓形成的临床情况，是理想的研究静脉内皮细胞激活，白细胞迁移，静脉血栓形成，治疗应用测试（1）。 EIM的模型是技术简单，容易复制，创建一致的血栓大小和允许大样本（即血栓和静脉壁），这是分析的目的所必需的。

1。鼠标麻醉程序

1. 动物从它们的笼子中删除，并放置在手术前麻醉诱导气体感应室在2％异氟醚和100％的氧气流量在每分钟0.5升（蒸发器控制）。
2. 小鼠镇静麻醉诱导室，室拆除，剃腹腹部与电动快船，或室内保持一毛脱毛如果使用（1分）。
3. 虽然仍在镇静，他们权衡，眼睛是无菌眼药膏，然后放置在一个温暖的循环水加热装置，在背recumbancy全身麻醉下用鼻子使用异氟醚和氧气锥，润滑。此时氧率降低到每分钟0.2升。
4. 腹部洗必泰溶液喷洒（洗必泰双乙酸钠是迅速bacterialcidal和持久的），并用无菌纱布擦拭三次，直到手术部位是干净的。

2。鼠标显微手术和恢复过程

1. 一个腹正中切口（2厘米），是用虹膜剪刀通过皮肤和腹壁，露出腹部。一个无菌生理盐水纱布浸泡的2x2是用来反映动物的左侧肠。鼠标限位到位，使下腔静脉（IVC）的可视化。
2. 在这一点上，异氟醚减少到2％的维修水平，氧率保持在每分钟0.2升，其余的手术。
3. 促进使用无菌敷贴拭子和额外的细腻光圈半弧形组织钳钝性分离。在处理鼠标组织，因为他们是极其脆弱的，必须小心。
4. 所有的下腔静脉侧分支，从肾静脉至髂分叉，与7-0非活性普理灵缝线结扎。回到分支机构保持了专利。
5. 在电解腔静脉模型（EIM），一个25G的不锈钢针连接到一个镀银铜线（KY - 30 - 1 - GRN，Electrospec，多佛尔港，新泽西州），插入暴露尾鳍下腔静脉（图1）对前壁（阳极）和定位。
6. 另一条导线植入皮下完成电路（阴极）。
7. 电流超过15分钟的250μAmps应用草苏昆方波刺激和恒定电流的单位（草技术，一个天文MED公司，西华威，扶轮社）。目前形成电解侵蚀下腔静脉内皮细胞表面，促进凝血的环境和随后的血栓形成的有毒产品的直接结果。
8. 15分钟后，针被删除，棉签轻轻接触面积，以防止出血举行
9. 在深水动物，放入下腔静脉针，然后取出，没有当前的应用程序。
10. 开腹网站是封闭在两层的方式。我们的实验室使用5-0薇乔，合成缝合线，在连续模式，关闭腹壁。胶粘剂皮胶是用来关闭皮肤。有没有外部缝线拆除。
11. 小鼠，然后在一个单独的鼠笼恢复，密切观察手术后的下一个加热灯（最小距离为24英寸，远离笼子）（45分钟到2小时），然后返回到原来的公屋单位。可以使用止痛药和消炎药，如果它不干预研究的目的。科学理由隐瞒止痛药，兽医学，和ICUCA审批是必要的。我们的实验室已经发现丁丙诺啡,0.05 - 0 .1毫克/公斤SQ是一个极好的前和手术后的小鼠的镇痛。此外，利多卡因在4mg/kg（1％溶​​液0.4毫升/公斤），可在切口部位注入的全身性镇痛药时，可能会混淆实验结果。
12. 通常，我们没有经历过手术后由于深静脉血栓形成的不良影响。然而，不良的手术后效果可以包括自发死亡麻醉，手术失血，因神经损伤和局部麻痹。正在缓慢复苏的动物，可以喂海狸鼠凝胶或潮湿的议员笼的地板上，以方便动物的恢复。动物切断手术后的并发症，应人道安乐死。
13. 在指定的时间点，安乐死是人道待遇，在按照安乐死美国兽医医疗协会的准则啮齿类动物中提出的建议。

3。代表性的成果

EIM解决方案是一个模型，在连续血流存在形成血栓。下面的数字显示在这种新颖的模式调查的参数。

图1 definesthe解剖区域在一个25G的不锈钢插入针，连接到一个镀银铜线（KY - 30 - 1 - GRN，Electrospec，多佛尔港，新泽西州）。请注意，一个淋巴结是几乎目前，作为一个具有里程碑意义，有助于找到尾鳍下腔静脉。

图2：在不同菌株的EIM后第2天的血栓重量。正如预期的那样，血栓重量降低PAI - 1的KO小鼠和高凝三角洲CT的小鼠（^ CT）的较大。

图3：可溶性P -选择，深静脉血栓形成的制造商，测量在不同的菌株。被发现在PAI - 1的KO小鼠的最低水平，而最高级别的高凝三角洲CT小鼠。

图4血栓重量和可溶性P -选择在不同菌株之间的相关。值得注意的是，在本集团产生较短的血栓的大小，可溶性P -选择素检测是最低的（PAI - 1的KO小鼠）。在本集团产生最大的血栓大小，可溶性P -选择素检测是最高的（高凝三角洲CT）。

图5：为了证明存在的血流量，超声小鼠进行的EIM执行。图5显示了在鼠标后第2天的EIM进行超声。然后该标本的收获。注意血栓的形状表明，在流动存在血栓形成

鼠标是一个优良的研究工具，在体内实验。因此，发展紧密地模仿疾病或病理状态下的小鼠模型，是必要的。几个静脉血栓形成的小鼠模型已被用来研究深静脉血栓形成，包括：光化学（2），瘀（3-4）和机械创伤（5-6）。然而，这些模型都使用内部的内皮细胞的刺激，在连续血流存在产​​生的血栓。 EIM解决方案，下腔静脉内使用电解刺激，促进血液流动的存在的内皮激活（1）静脉血栓形成。这在技术上是简单，容易复制和成活率高（99％）。尽管事实上，用于创建电解电流，不会产生热量（1）。 EIM的模型准确模拟临床深静脉血栓形成，因此，作为一个有价值的工具，用于研究血栓的形成和解决的内在机制服务。 EIM的模型也可用于防止血栓形成疾病的新治疗方法的进步。

没有利益冲突的声明。

支持由美国国立卫生研究院1P01HL089407 - 01A1（劳伦斯，PI），动物一个核心，美国国立卫生研究院1 K01 HL080962 - 01A2（迈尔斯，PI）。

1. Diaz, J.A., Hawley, A.E., Alvarado, C.M.,et al. Thrombogenesis with continuous blood flow in the inferior vena cava. A novel mouse model. Thromb Haemost. 104 (2), 366-75 (2010).
2. Eitzman, D.T., Westrick, R.J., Nabel, E.G.,et al. Plasminogen activator inhibitor-1 and vitronectin promote vascular thrombosis in mice. Blood. 95 (2), 577-80 (2000).
3. Myers, D., Jr., Farris, D., Hawley, A.,et al. Selectins influence thrombosis in a mouse model of experimental deep venous thrombosis. J Surg Res. 108 (2), 212-21 (2002).
4. Myers, D.D., Hawley, A.E., Farris, DM.,et al. P-selectin and leukocyte microparticles are associated with venous thrombogenesis. J Vasc Surg. 38 (5), 1075-89 (2003).
5. Pierangeli, S.S., Barker, J.H., Stikovac, D.,et al. Effect of human IgG antiphospholipid antibodies on an in vivo thrombosis model in mice. Thromb Haemost. 71 (5), 670-4 (1994).
6. Pierangeli, S.S., Liu, X.W., Barker, J.H.,et al. Induction of thrombosis in a mouse model by IgG, IgM and IgA immunoglobulins from patients with the antiphospholipid syndrome. Thromb Haemost. 74 (5), 1361-7 (1995).

1 Comment

You must be signed in to post a comment. Please sign in or create an account.