The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.
Authors
The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.
This translation into Hindi was automatically generated through Google Translate.
English Version | Other Languages
1Department of Integrative Oncology, BC Cancer Research Centre, 2Interdisciplinary Oncology Program, University of British Columbia - UBC, 3Photography/Video Production, Multi-Media Services, BC Cancer Agency, 4Department of Pathology and Laboratory Medicine, University of British Columbia - UBC
Pikor, L. A., Enfield, K. S. S., Cameron, H., Lam, W. L. DNA Extraction from Paraffin Embedded Material for Genetic and Epigenetic Analyses. J. Vis. Exp. (49), e2763, doi:10.3791/2763 (2011).
Histopathologic विश्लेषण और निदान के लिए biopsied या शल्य चिकित्सा excised ऊतकों अक्सर लंबी अवधि के भंडारण के लिए formalin निश्चित और आयल एम्बेडेड (FFPE) कर रहे हैं. रोग के आनुवंशिक आधार को समझने में बढ़ती रुचि के साथ, इन नमूनों से डीएनए निकालने की क्षमता नैदानिक सामग्री है कि जीनोमिक विश्लेषण और translational अध्ययन के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है की एक अमूल्य स्रोत का प्रतिनिधित्व करता है. ऐतिहासिक रूप FFPE नमूने आणविक विश्लेषण के लिए एक व्यवहार्य स्रोत नहीं माना गया न्यूक्लिक एसिड के रूप में भारी प्रोटीन nucleic एसिड और प्रोटीन, प्रोटीन के पार 6 जोड़ने के द्वारा संशोधित किया जा सकता है. हालांकि, इन मूल्यवान नमूनों की खोज की है कि protease पाचन खंडित न्यूक्लिक एसिड होता है जो पीसीआर, सरणी CGH, अनुक्रमण और मेथिलिकरण रूपरेखा सहित बहाव के विश्लेषण के लिए उपयुक्त हैं विज्ञप्ति, आनुवंशिक 6 विश्लेषण के लिए उपयोग सक्षम बनाता है.
आयल - एम्बेडेड ऊतकों से डीएनए निष्कर्षण एक मजबूत प्रक्रिया है कि अंतर करने के लिए डीएनए शुद्ध विलेयता पर निर्भर करता है है. निकाले डीएनए गुणवत्ता और मात्रा और बाद में डीएनए प्रवर्धन की सफलता के दौरान और बाद निष्कर्षण पहले मानकों की एक संख्या पर निर्भर है. ये शामिल हैं, लेकिन तक सीमित नहीं हैं: प्रकार और ऊतकों की राशि, ऊतक संरक्षण के लिए इस्तेमाल किया लगानेवाला के प्रकार निर्धारण की अवधि, आयल ब्लॉक और भंडारण की स्थिति की उम्र, के रूप में के रूप में अच्छी तरह से वांछित डीएनए खंड की लंबाई 1,7 प्रवर्धित. ऊतक से आयल का हटाया सफल निकासी के लिए सबसे महत्वपूर्ण कदम है undissolved आयल के रूप में गरीब नमूना गुणवत्ता और पीसीआर प्रवर्धन के निषेध की ओर जाता है है.
ब्याज की कोई संघर्ष की घोषणा की.
हम अपने मूल्यांकन और इस वीडियो और लेख के critiques के लिए लैम प्रयोगशाला के सदस्यों को धन्यवाद देना चाहूंगा. इस काम के स्वास्थ्य अनुसंधान संस्थान कनाडा के लिए से धन के द्वारा समर्थित किया गया था.
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Xylene | VWR international | CABDH6216- 4 | - |
| 1.7 ml SafeSeal Microcentrifuge Tubes | Sorenson BioScience | 11510 | - |
| Spectrafuge 16M Microcentrifuge | Labnet International | C0160-B | - |
| Lysis Buffer | 10 mM Tris-HCl pH8, 100 mM EDTA pH 8, 50 mM NaCl, 0.5% SDS, 200 μg/ml Proteinase K |
||
| Proteinase K Stock Solution | Invitrogen | AM2548 | 20 mg/ml |
| Proteinase K Stock Solution | |||
| Buffer Saturated Phenol pH 6.6/7.9 | Fisher Scientific | BP1750I-400 | - |
| Phenol: chloroform: Isoamylalcohol (25:24:1, pH 6.7/8.0) | Fisher Scientific | BP1752I-400 | - |
| RNase A | Roche Group | 10109169001 | 100mg |
| 3M sodium Acetate pH 5.2 | 40.81g NaOAc in 80ml Adjust to pH 5.2 with glacial acetic acid Add dH2O to 100ml Autoclave |
||
| ND 3300 Spectrophotometer | NanoDrop | - | - |
Thanks.
1
ReplyPosted by: Jorge R. FriasApril 15, 2011, 9:27 AM