缺血性心力衰竭在临床前模型的转基因

1。心肌梗死的创作

1. 女约克夏猪，动物生物技术产业（多伊尔斯敦，PA）（20KG）使用Telazol（tiletamine / zolazepam）（8.0毫克/公斤）和丁丙诺啡（0.6毫克）的前药。
2. 动物插管和100％的氧气，然后通风。整个过程中，全身麻醉维持异丙酚（5-8mg/kg/hr）。
3. 股的网站是准备用70％异丙醇，碘伏酒精。一个经皮穿刺提供访问动脉鞘的位置。鞘插入后，3000-5000 IU的肝素是管理四，维持活化凝血时间250-300秒。
4. 一个胺碘酮静脉推注（75毫克）的剂量肌肉注射。开始静脉注射胺碘酮（75毫克），阿托品（2毫克），醋酸钾（20毫克当量）1000毫升生理盐水袋和维护的整个过程中使用150毫升/小时的速度。
5. 7神父曲棍球棒导管（Cordis公司;迈阿密，佛罗里达州）是先进的左冠状动脉和冠状动脉造影执行。一个0.014英寸的导丝（雅培，公园，IL）是先进到左冠状动脉前降支（LAD）。 8毫米长，4.0毫米旅行者过线的气球（雅培，公园，IL）是先进的，定位于近端的小伙子，和冠状动脉气球膨胀到3个大气压。法援署闭塞血管造影证实。
6. 随着连续的心电图和血流动力学监测，闭塞是保持了90分钟。恶性室性心律失常，偶尔会出现在第40分钟，在这种情况下，，直接从200 J 300焦耳的电流冲击即时交付管理。通常有两种心律失常的高峰时间帧，2至10分钟，球囊扩张后的25至35分钟。勤奋的监测和立即除颤心肌梗死成功创造的关键，因为有帧显示的时间内进入心室颤动的发生率在95％以上。如果执行的即时及适当的除颤，存活率非常高。如果在80毫米汞柱的血压下降，容积负荷是通过快速的静脉注射生理盐水输液。
7. 是瘪的气球和所有设备都将被删除。
8. 从股动脉鞘中删除，麻醉是功不可没的，恢复过程中的监控和动物。与胺碘酮，阿托品和醋酸钾输液静脉注射生理盐水50毫升/小时下降，是在一夜之间。 Nitroglycerline和Furoscemide肌肉注射给药。然后，动物被允许恢复和小心心电监护，持续至少3个小时。
9. 阿司匹林（200毫克）PO，将给予5天。

心肌梗死的创建过程，期间和之后的常见的并发症是冠状动脉解剖，穿刺部位血肿，心律失常，心力衰竭。一个完善的技术和全面监测，预防和管理这些并发症。

2。病毒注射

1. 动物准备，如心肌梗死创造steps1 - 3如上所述。应给予相同剂量的肝素，以防止血栓形成在病毒注射。
2. 一个5Fr曲棍球棒导管（Cordis公司;迈阿密，佛罗里达州）是先进的左冠状动脉。血管造影后，0.014英寸的导丝是先进的，到法援署到左回旋冠状动脉（LCX），以确定导管的位置。
3. 动脉血（-20毫升）是来自导管。为了防止缺血输液过程中，一半是用来稀释血液的解决方案。该病毒是用10毫升血混合，并用生理盐水稀释至20 ml。剩下的10毫升稀释至20 ml，并使用提供的导管管腔内残留的病毒。
4. 经耳缘静脉静脉硝酸甘油（20微克/分）开始。
5. 导管尖端放置在近端的左主道。通过导管的压力进行监控，以确保导管楔入。
6. 该病毒混合血（15毫升）是通过导管注入超过15分钟到左冠状动脉使用输液泵。 15分钟后，注射器交换刷新，和输液是持续10分钟。
7. 电线和导管固定在右冠状动脉，左冠状动脉的相同的方式。
8. 余下的5毫升血液病毒混合注射入右冠状动脉5分钟，冲洗10分钟。

3。具有代表性的案例

图1显示了在1个月后，心肌梗死创作的左心室。左室壁运动明显受损的射血分数（EF）31％。图2显示了在1个月的左心室的横截面。看到一个大的疤痕，从基地到前壁的心尖。在这个模型的心肌梗死后1个月的平均EF为36％和平均舒张末容积为83毫升，而在同一大小的动物无心肌梗死者的平均分别为68％和42毫升。图3显示了在左心室边境地带面积的表达β-半乳糖苷酶的腺相关病毒^（2 × 10 12 DNA酶CMV LAC - Z的rAAV1 resitant颗粒）注射后1个月。增强的表达被发现的病毒注入面积。

图1。射血分数从左边心室心肌梗死创造后1个月。左心室扩张到92.5毫升和前壁的议案明显受损。

图2。氯化三苯四氮唑染色，在心肌梗死创造后1个月的左心室截面划定瘢痕区。看到一个大的疤痕，从基地到前壁的心尖。

图3β-半乳糖苷酶表达的腺相关病毒^（2 × 10 12 DNA酶rAAV1 CMV LAC - Z的耐药颗粒）诱导。在边境地带面积梗死和冠状动脉内的病毒注射后的正常组织，1个月之间找到一个表达增强。右下图为阴性对照，只有生理盐水注入冠状动脉，使用相同的协议。

在各种原因引起的心力衰竭，缺血是由远在最常见的病因。为了克服这一严重的疾病，各种治疗方法正在制定中。需要仔细评估的疗法之前，这些有前途的疗法是可以应用到诊所。因此，建立的缺血性心力衰竭模型表示患者的临床情况，心力衰竭治疗的发展是至关重要的。我们的猪心肌梗死模型满足这些翻译的要求。

要通过创建一个心肌梗死诱发心力衰竭，心肌梗死面积的需求要大。我们的模型与以往的研究，也可用于血管内^心肌梗死模型1相比，以较大的疤痕。我们发现，管理胺碘酮和超过80毫米汞柱的血压保持在冠状动脉闭塞是必不可少的，以提高成活率和梗死面积。虽然异氟醚是一种有效的麻醉剂，此过程^1-2中，我们发现，异丙酚，可保持较高的血压。此外，异氟醚报道有更多的心脏保护效果相比， ^异丙酚 3，这可能导致一个减少梗死大小。

心脏基因治疗是目前心脏失败的最有前途的方法之一，并有各种不同的战略转移的基因。首先，内注射携带基因的病毒载体，是一种简单，创伤小的技术。各种尝试，以提高基因表达。我们的实验室已经发现，在注射病毒注入硝酸甘油增加的基因表达（一Karakikes，未发表）。

导致使用腺相关病毒载体的基因转移SERCA2a的积极成果， ^在人类4。心脏基因治疗的进一步改善，预计与其他载体的基因，以及载体的改进。我们的交付方法提供了增强的基因表达的简单而有效的基因转移，并且可以很容易地翻译诊所。