慢病毒介导的击倒在体外红细胞

许多方法已被用于以前红系细胞分化在文化与不同程度的成功。例如，没有共同培养在MS - 5某些协议允许扩大红系细胞，但不是在完全成熟的去^核红细胞12-17高效。而其他方法允许高效率的眼球摘除，这是在^牺牲扩散18,19。我们在这里使用，最初由Douay实验室⁶开发的方法，结合初始液体培养步骤，在红细胞分化的早期阶段，从而延长细胞扩增，从而为我们提供了大量早期祖细胞（基因组学和蛋白质组学研究的必要）和合作，文化上的MS - 5间质细胞，这一点很重要，以最大限度地提高血红蛋白的合成，并获得完整的红血细胞眼球摘除第二步。我们的方法的局限性：1）放大的程度仍然不足，在分化的早期阶段，迄今已阻止我们充分体现在非常早期的红系祖细胞的蛋白水平和2）执行本议定书的成本高，特别是在大规模。

体内红细胞分化的细胞培养试剂和细胞因子的质量至关重要。值得注意的是，使用的位（见表2）作为血清替代，是至关重要的。事实上，在我们的经验，使用的比特消除批次批次的变化，我们以前经历（可能是由于试剂纯度的差异），当使用单独的牛血清白蛋白，胰岛素和转来源。另一个关键的一点是红系细胞的共培养使用的MS - 5层的质量。事实上，MS - 5细胞70％融合时，红系细胞的增加和必须改变每隔3-4天。如果MS - 5细胞过于融合，红系细胞生长和分化正确。此外，不健康的MS - 5细胞的分离，使红系细胞的收获困难。

逆转录病毒基因在造血干/祖细胞培养交付使用以前的方法。然而，逆转录病毒只感染分裂细胞，因此感染主要是静态的CD34 ⁺细胞从脐带血，骨髓或leukapheresis ²⁰的效率不高。慢病毒基因传递方法的主要优点是，它允许其增殖^状态 7,21独立的细胞高效感染。我们的慢病毒介导的基因传递，可以有效地击倒或过度表达特定的转录因子，可以修改细胞的命运。感染后揭示特定的表型可以设计适当的表型分析（细胞和分子）。此外，经济增长状况可能会改变，有利于感染后特定的细胞类型。沿着这些思路，在这个协议中，我们选择了不使用任何方法选择慢病毒感染的细胞主要有两个原因：1）我们的感染效率非常高（图6C）和2）我们关注，使用的方法选择慢病毒感染的细胞（如细胞分选或抗生素）偏重生存/增殖的细胞，能够表达的抗生素抗性基因或在高水平，从而隐瞒一个潜在的细胞凋亡表型荧光标记。