The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.
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The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.
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Site Discovery Group and PhosphoScan Services Group, Cell Signaling Technology, Inc.
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PTMScan ® प्रौद्योगिकी सेल संकेतन प्रौद्योगिकी (सीएसटी) से तरल क्रोमैटोग्राफी अग्रानुक्रम मास स्पेक्ट्रोमेट्री (LC-MS/MS) के साथ एंटीबॉडी आधारित पेप्टाइड संवर्धन के लिए स्वामित्व के तरीके को जोड़ती है मात्रात्मक phosphorylation जैसे बाद translational संशोधनों (PTMs) (PhosphoScan ®) प्रोफ़ाइल (UbiScan ®) ubiquitination और एसिटिलीकरण (AcetylScan ®).
PTMScan ® प्रौद्योगिकी सीएसटी रोजगार ™ आकृति एंटीबॉडी के बाद translationally संशोधित पेप्टाइड्स के पूर्वनिर्धारित समूहों पचा सेल के अर्क में असंशोधित पेप्टाइड्स से अलग है. संशोधित पेप्टाइड बहुतायत में परिवर्तन की पहचान करने और यों यह immunoaffinity शुद्धि तकनीक LC-MS/MS के साथ संयुक्त है. आकृति एंटीबॉडी के लिए विशेष रूप से (Tyr, सर्विसेज, Thr) phospho पेप्टाइड्स, acetylated पेप्टाइड्स, या ubiquitin टैग पेप्टाइड्स बाइंड उपलब्ध हैं, सेल की phosphorylation एसिटिलीकरण, या ubiquitination की स्थिति के मात्रात्मक रूपरेखा सक्षम करने से.
MAPK mTOR, और PI3K/Akt रास्ते हैं कुंजी संकेतन oncogenic रिसेप्टर tyrosine kinases (RTKs) के बहाव सक्रिय रास्ते. इन रास्ते के सभी AGC AKT, RSK, और p70 S6 kinases, जिसका प्रोटीन substrates RxRxxS / टी आकृति पर phosphorylated kinase सहित परिवार के सदस्यों, सक्रिय करें.
हाल ही में एक phosphoproteomic वैज्ञानिकों सीएसटी पर (Sci. सिग्नल (2010) 24, 3 (136): ra64) द्वारा लेखक अध्ययन में, इन AGC परिवार kinases के लिए 300 से अधिक ख्यात substrates तीन सेल लाइनों, या तो EGFR द्वारा संचालित प्रत्येक में पहचान की गई, ग - मौसम, या PDGFR. प्रयोगात्मक दृष्टिकोण PhosphoScan ® प्रौद्योगिकी एक समानता अभिकर्मक के रूप में RxRxxS / टी आकृति एंटीबॉडी का उपयोग करने के लिए चुनिंदा AKT, RSK, और p70 S6 kinases के phosphorylated substrates immunoprecipitate कार्यरत हैं. PI3K, mTOR, और MEK के लिए विशिष्ट inhibitors इन RTKs के नेटवर्क संकेतन बहाव के मानचित्रण के लिए अनुमति के साथ लक्षित कैंसर दवाओं का प्रयोग. Substrates मचान, प्रोटीन स्थिरता, चयापचय, तस्करी, और गतिशीलता सहित कई सेलुलर कार्यों में शामिल प्रोटीन, शामिल हैं.
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