Abstract
PTMScan ® Technology de technologie signalisation cellulaire (CST) allie des méthodologies exclusives pour l'enrichissement de peptide à base d'anticorps avec le liquide de spectrométrie de masse en tandem chromatographie (LC-MS/MS) pour quantitativement le profil modifications post-traductionnelles (PTM) telles que la phosphorylation (PhosphoScan ®) , l'ubiquitination (UbiScan ®) et l'acétylation (AcetylScan ®).
PTMScan ® Technology emploie CST ™ Anticorps Motif de séparer des groupes prédéfinis de post-traductionnelles des peptides modifiés à partir de peptides non modifiés dans les extraits cellulaires digéré. Cette technique de purification d'immunoaffinité est combiné avec LC-MS/MS pour identifier et quantifier les changements dans l'abondance peptide modifié. Motif anticorps sont disponibles pour se lier spécifiquement phospho (Tyr, Ser, Thr)-peptides, les peptides acétylés, ou des peptides ubiquitine-étiquetés, permettant le profilage quantitative de l'état de phosphorylation, acétylation, ou l'ubiquitination de la cellule.
MAPK, mTOR et les voies PI3K/Akt sont de signalisation clés voies activées en aval de la tyrosine kinases récepteurs oncogènes (RTK). Toutes ces voies d'activer les membres AGC famille des kinases, dont l'Akt, RSK, et p70 S6 kinases, dont les protéines sont phosphorylées substrats au RxRxxS / T motif.
Dans une étude récente phosphoproteomic écrites par des scientifiques de CST (Sei. Signal (2010) 24, 3 (136):. Ra64), plus de 300 substrats putatifs pour ces kinases de la famille AGC ont été identifiés dans trois lignées cellulaires, chacune entraînée soit par l'EGFR, c-Met, ou PDGFR. L'approche expérimentale employée PhosphoScan ® Technology utilisant le RxRxxS / anticorps Motif T comme un réactif d'affinité sélective pour immunoprécipiter substrats phosphorylés de Akt, RSK, et p70 S6 kinases. L'utilisation de médicaments anticancéreux ciblés avec des inhibiteurs spécifiques de la PI3K, mTOR, et MEK a permis pour la cartographie de l'aval du réseau de signalisation de ces RTK. Substrats incluse protéines impliquées dans de nombreuses fonctions cellulaires, y compris les échafaudages, la stabilité des protéines, le métabolisme, le trafic et la motilité.
