Abstract
PTMScan Technology ® Signaling da Cell Technology (CST) combina metodologie proprietarie a base di anticorpi per l'arricchimento peptide con cromatografia liquida-spettrometria di massa tandem (LC-MS/MS) per analizzare quantitativamente modificazioni post-traduzionali (PTM), come la fosforilazione (PhosphoScan ®) , ubiquitinazione (UbiScan ®) e acetilazione (AcetylScan ®).
PTMScan ® Technology impiega CST ™ Anticorpi Motif per separare gruppi predefiniti di post-traduzionali peptidi modificati dal peptidi non modificati in estratti cellulari digerito. Questa tecnica di purificazione immunoaffinità è combinato con LC-MS/MS per identificare e quantificare i cambiamenti in abbondanza peptidi modificati. Anticorpi motivo sono a disposizione legano specificamente fosfo (Tyr, Ser, Thr)-peptidi, peptidi acetilati, o peptidi ubiquitina-tag, che permette il profiling quantitativa dello stato di fosforilazione, acetilazione, o ubiquitinazione della cellula.
MAPK, mTOR e le vie PI3K/AKT principali vie di segnalazione sono attivate a valle della tirosin-chinasi del recettore oncogenici (RTK). Tutte queste vie attivare AGC familiari chinasi, tra cui Akt, RSK, e p70 S6 chinasi, le cui proteine substrati sono fosforilati al RxRxxS / T motivo.
In un recente studio phosphoproteomic scritto da scienziati della CST (Sci. Signal (2010) 24, 3 (136):. Ra64), oltre 300 substrati putativi di queste chinasi della famiglia AGC sono stati identificati in tre linee di cellule, ciascuna guidata da due EGFR, c-Met, o PDGFR. L'approccio sperimentale utilizzato PhosphoScan Technology ® utilizzando il RxRxxS / anticorpo Motif T come un reagente selettivo immunoprecipitato affinità per substrati fosforilata di Akt, RSK, e p70 S6 chinasi. L'uso di farmaci antitumorali mirate con gli inibitori specifici per PI3K, mTOR e MEK ha permesso per la mappatura della rete di segnalazione a valle di questi RTK. Substrati incluso proteine coinvolte in molte funzioni cellulari, tra cui ponteggi, stabilità proteica, il metabolismo, il traffico, e la motilità.
