Abstract
PTMScan Technology ® de Tecnologia Sinalização Celular (CST) combina metodologias proprietárias para anticorpos de enriquecimento peptídeo com cromatografia líquida-espectrometria de massa (LC-MS/MS) para quantitativamente perfil de modificações pós-translacionais (PTMs), tais como fosforilação (PhosphoScan ®) , ubiquitinação (UbiScan ®) e acetilação (AcetylScan ®).
PTMScan ® Technology emprega CST ™ Anticorpos Motif para separar grupos predefinidos de pós-traducionalmente peptídeos modificados a partir de peptídeos não modificado em extratos de células digeridas. Esta técnica de purificação de imunoafinidade é combinado com LC-MS/MS para identificar e quantificar alterações na abundância peptídeo modificado. Anticorpos Motif disponíveis para se ligam especificamente fosfo (Tyr, Ser, Thr)-peptídeos, peptídeos acetilada, ou peptídeos ubiquitina-marcados, permitindo a caracterização quantitativa do estado de fosforilação, acetilação, ou ubiquitinação da célula.
MAPK, mTOR e as vias de sinalização são PI3K/AKT chave vias ativada a jusante de quinases receptor tirosina oncogênico (RTKs). Todas estas vias ativar membros quinase AGC família, incluindo Akt, RSK, e p70 S6 quinase, cuja proteína substratos são fosforiladas na RxRxxS / T motivo.
Em um estudo recente phosphoproteomic autoria de cientistas da CST (Sci. Signal (2010) 24, 3 (136):. Ra64), mais de 300 supostos substratos para estas cinases da família AGC foram identificados em três linhas de células, cada uma movida por qualquer EGFR, c-Met, ou PDGFR. A abordagem experimental empregada PhosphoScan Technology ® usando o RxRxxS / Antibody Motif T como um reagente de afinidade para seletivamente immunoprecipitate substratos fosforilados de Akt, RSK, e p70 S6 quinase. Uso de drogas contra o câncer alvo de inibidores específicos para PI3K, mTOR e MEK permitido para o mapeamento da rede de sinalização a jusante destas RTKs. Substratos incluídas proteínas envolvidas em muitas funções celulares, incluindo andaimes, a estabilidade da proteína, o metabolismo, o tráfico ea motilidade.
