Abstract
PTMScan ® التكنولوجيا من تكنولوجيا الخلية إشارات (CST) يجمع بين المنهجيات الملكية لتخصيب الببتيد القائم على الضد مع مطياف الكتلة السائلة اللوني جنبا إلى جنب (LC-MS/MS) لملف كميا بعد متعدية التعديلات (PTMs) مثل الفسفرة (PhosphoScan ®) ، ubiquitination (UbiScan ®) وأستلة (AcetylScan ®).
PTMScan توظف تكنولوجيا ® ™ CST أجسام الحافز لفصل مجموعات محددة مسبقا من الببتيدات المتعلقة بالوظائف translationally معدلة من الببتيدات غير معدلة في مقتطفات الخلية هضمها. يتم الجمع بين هذه التقنية لتنقية immunoaffinity مع LC-MS/MS لتحديد وقياس التغيرات في وفرة الببتيد تعديلها. الأضداد عزر تتوفر لربط تحديدا الفوسفات (صور ، سر ، الثريونين) - الببتيد ، الببتيد الأسيتيل ، أو الببتيدات اليوبيكويتين الموسومة ، وتمكين التنميط الكمي للحالة الفسفرة ، أستلة ، أو ubiquitination للخلية.
MAPK ، mTOR والممرات والمسالك PI3K/Akt يشير مفتاح تنشيط المصب من كاينيسات التيروزين المستقبلة أنكجنيك (RTKs). كل هذه المسارات تنشيط أعضاء الأسرة AGC كيناز ، بما في ذلك AKT ، جمهورية كرايينا الصربية ، وP70 كاينيسات S6 ، التي هي ركائز البروتين فسفرته في RxRxxS / T عزر.
في دراسة حديثة phosphoproteomic تأليف العلماء في CST (Sci. الإشارات (2010) (24) ؛ 3 (136) : ra64) ، تم تحديد أكثر من 300 ركائز المفترضة لهذه الأسرة كاينيسات AGC في خطوط الخلايا الثلاث ، كل مدفوعا إما EGFR ، ج التقى أو PDGFR. المنهج التجريبي يعمل PhosphoScan ® باستخدام التكنولوجيا RxRxxS / T جسم باعتباره الحافز لتقارب كاشف immunoprecipitate انتقائي من ركائز فسفرته AKT ، جمهورية كرايينا الصربية ، وتحركات S6 P70. استخدام عقاقير مضادة للسرطان المستهدفة مع مثبطات محددة لPI3K ، mTOR ، وسمحت لمنظمة مجاهدي خلق رسم خرائط لشبكة التسويق والتوزيع لهذه الإشارات RTKs. وشملت ركائز البروتينات الخلوية العاملة في وظائف عديدة ، بما فيها السقالات ، والاستقرار ، البروتين ، والتمثيل الغذائي ، والاتجار ، والحركة.
