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Application Notes

PTMScan - 포스트 translational 개조 Proteomics

Jeffrey C. Silva1, Charles L. Farnsworth1, Xiaoying Jia1, Matthew P. Stokes1, Albrecht Moritz1, Ailan Guo1, Roberto D. Polakiewicz1, Michael J. Comb1
1Site Discovery Group and PhosphoScan Services Group, Cell Signaling Technology, Inc.

Abstract

세포 신호 기술 (CST)에서 PTMScan ® 기술은 양적 같은 인산화 같은 사후 translational 수정 (PTMS) (PhosphoScan ®)를 프로필에 액체 크로마 토그래피 - 탠덤 질량 분석법 (LC-MS/MS)과 항체 기반 펩타이드의 농축에 대한 독자적인 방법론을 결합 , ubiquitination (UbiScan ®) 및 아세틸화 (AcetylScan ®).

PTMScan ® 기술은 중부 표준시를 고용 ™ 모티프 항체를 소화 세포 추출물에서 수정되지 않은 펩티드의 포스트 translationally 수정 펩티드의 미리 정의된 그룹을 분리합니다. 이 면역 친 화성 정화 기술이 수정 펩타이드의 풍부한 변화를 파악하고 수치 LC-MS/MS과 함께합니다. 모티브 항체는 세포의 인산화, 아세틸화, 또는 ubiquitination 상태의 양적 프로파일을 지원, 특히 phospho (티르, 빼앗아, Thr) 펩티드, 펩티드 acetylated, 또는 ubiquitin - 태그 펩티드를 바인딩하기 위해 사용할 수 있습니다.

MAPK, mTOR과 PI3K/Akt 경로는 주요 신호가 하류 종양 수용체 티로신 kinases (RTKs)의 활성화 경로입니다. 이러한 경로의 모든 단백질 기판 RxR​​xxS / T 모티브에서 phosphorylated 아르 Akt, RSK, 그리고 p70 S6 kinases 포함 AGC의 키나제 가족을 활성화합니다.

중부 표준시에서 과학자 (. Sci. 신호 (2010) 24, 3 (136) : ra64)에 의해 작성 최근 phosphoproteomic 연구에서는 이러한 AGC 가족 kinases에 대한 300여 putative 기판, 3 셀 라인, 중 EGFR에 의해 주도 각각 확인되었다 C - 메트, 또는 PDGFR. 실험 방법은 선택 Akt, RSK, 그리고 p70 S6 kinases의 phosphorylated 기판을 immunoprecipitate에 친화 시약으로 RxRxxS / T 모티프의 항체를 사용하여 PhosphoScan ® 기술을 채용. 이러한 RTKs의 신호 네트워크 하류의 매핑에 사용할 특정 PI3K, mTOR과 MEK에 대한 억제제와 함께 타겟 암 약물을 사용하지 않습니다. 기판은 비계, 단백질 안정성, 신진 대사, 인신 매매 및 운동성 등 많은 세포 기능에 관여 단백질을 포함.

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