Abstract
PTMScan ®-teknik från Cell Signaling Technology (CST) kombinerar egna metoder för antikroppsbaserade peptid berikning med vätskekromatografi-tandem masspektrometri (LC-MS/MS) för att kvantitativt profil post-translationella modifieringar (PTMs) såsom fosforylering (PhosphoScan ®) , ubiquitination (UbiScan ®) och acetylering (AcetylScan ®).
PTMScan ®-teknik använder CST ™ Motif Antikroppar mot olika fördefinierade grupper av post-translationally modifierade peptider från oförändrade peptider i smält cell extrakt. Detta immunoaffinity reningsteknik kombineras med LC-MS/MS att identifiera och kvantifiera förändringar i modifierad peptid överflöd. Motiv antikroppar är tillgängliga för att specifikt binda fosfor (Tyr, Ser, Thr)-peptider, acetylerade peptider eller ubiquitin-taggade peptider, vilket gör den kvantitativa profilering av fosforylering, acetylering eller ubiquitination status cellen.
MAPK, mTOR och PI3K/Akt vägar är viktiga signalvägar aktiveras nedströms onkogena tyrosinkinasreceptorer (RTKs). Alla dessa vägar aktivera AGC medlemmar kinas familjen, inklusive Akt, RSK och p70 S6-kinaser, vars protein substrat fosforyleras på RxRxxS / T motiv.
I en nyligen phosphoproteomic studie författad av forskare vid CST (Sci. Signal (2010) 24, 3 (136). Ra64), var över 300 förmenta substrat för dessa AGC familjen kinaser identifierats i tre cellinjer, var och drivs av antingen EGFR, c-Met, eller PDGFR. Den experimentella metoden som används PhosphoScan ®-teknik med RxRxxS / T Motiv antikropp som en affinitet reagens för att selektivt immunoprecipitate fosforyleras substrat Akt, RSK och p70 S6-kinaser. Användning av målinriktade cancerläkemedel med hämmare specifika för PI3K, mTOR och MEK tillåtet för kartläggning av signalnätet nedströms dessa RTKs. Substrat ingår proteiner involverade i många cellulära funktioner, inklusive byggnadsställningar, protein stabilitet, metabolism, trafficking och rörlighet.
