The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.
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Pharmaceutical Business Operations, Waters Corporation
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वाटर्स AutoPurification सिस्टम का प्रयोग, जुदाई तरीकों एक विश्लेषणात्मक पैमाने पर विकसित किया जा सकता है और एक ही सिस्टम पर तैयारी पैमाने पर करने के लिए हस्तांतरित, एक प्रयोगशाला के समग्र पूंजी निवेश को कम करने. यहाँ हम एक व्यवस्थित दृष्टिकोण पैमाने पर जुदाई kudzu के (Pueraria lobata) जड़ निकालने से 10 के माध्यम से एक 4.6 मिमी आईडी विश्लेषणात्मक स्तंभ जुदाई से स्थानांतरित करने के लिए, 19, और 30 मिमी आईडी तैयारी कॉलम separations का उपयोग वर्णन.
1. नमूना तैयार
Kudzu रूट टुकड़े (20 ग्राम) पानी / मेथनॉल 09:01 100 एमएल जोड़ा गया था और 1 घंटे के लिए हिल, रातोंरात खड़े करने की अनुमति है, और एक अतिरिक्त घंटे के लिए हिल. इस निकालने के 20 मिनट के लिए 3000 RPM में centrifuged किया गया था और आगे के इलाज के के बिना इस्तेमाल किया.
2. प्रायोगिक स्थितियां
सभी तराजू पर chromatographic separations, वाटर्स AutoPurifcation प्रणाली है, जो निम्नलिखित वाटर्स घटकों के शामिल का उपयोग कर किए गए थे:
| पंप: | 2545 द्विआधारी ढाल मॉड्यूल |
| डिटेक्टरों: | 2998 photodiode ऐरे 3100 मास वेक्षक |
| इंजेक्टर / कलेक्टर: | 2767 नमूना प्रबंधक |
| स्तंभ प्रबंधन: | सिस्टम Fluidics ऑर्गनाइज़र |
एक प्रारंभिक विश्लेषणात्मक पैमाने पर जुदाई वाटर्स SunFire 18 सी, 4.6 x 50 मिमी, 5 सुक्ष्ममापी स्तंभ पर विकसित किया गया था, नीचे वर्णित शर्तों का उपयोग कर.
| स्तंभ अस्थायी: | व्यापक |
| प्रवाह दर: | 1.5 एमएल / मिनट |
| मोबाइल एक चरण: | जल + 0.1% चींटी एसिड |
| मोबाइल चरण बी: | मेथनॉल |
| ढाल: | 7 मिनट से अधिक 5% से 70% बी |
| इंजेक्शन वॉल्यूम: | 20 μL |
| जांच: | यूवी (200 से 400 एनएम) और एमएस पूरा 150 से 700 मी / z स्कैन |
परिणामस्वरूप chromatogram (चित्रा 1) हल यौगिकों की एक संख्या से पता चला था और पैमाने के लिए एक स्वीकार्य उम्मीदवार माना.
चित्रा 1 kudzu जड़ निकालने के विश्लेषणात्मक पृथक्करण (4.6 मिमी आईडी).
परिणाम और चर्चा
स्केल - अप मेथड
उनके यौगिकों के अनुरूप तरीकों का उपयोग कर करके, दवा की दुकानों के लिए जांच प्रक्रिया में तेजी कम से कम संभव समय में अपने मिश्रण से और उच्च गुणवत्ता भिन्न प्राप्त करने में सक्षम हैं. वहाँ महत्वपूर्ण कारकों में से एक नंबर पर विचार जब इस प्रक्रिया पैमाने अप आ रहे हैं.
स्तम्भ रसायन विज्ञान
जुदाई की दिल स्तंभ है. आदर्श रूप में आप स्तंभ chemistries कि समान हैं चुनना चाहिए. यदि विश्लेषणात्मक और प्रारंभिक स्तंभों अलग रसायन विज्ञान के हैं, यह बहुत मुश्किल हो जाता है के लिए विश्लेषणात्मक परिणामों पर आधारित प्रारंभिक जुदाई की भविष्यवाणी. वाटर्स स्तंभ रसायन विज्ञान विश्लेषणात्मक और प्रारंभिक पैमाने आयामों में उपलब्ध विकल्पों की एक विस्तृत श्रृंखला उपलब्ध कराता है. ही रसायन शास्त्र के अलावा, कण आकार भी विचार किया जाना चाहिए. एक ही कण आकार के स्तंभ दोनों जुदाई पैमाने पर महत्वपूर्ण जोड़े के समान संकल्प प्रदान करेगा. कॉलम लंबाई भी जुदाई दक्षता को प्रभावित करती है, समान लंबाई के स्तंभ, जब पहुंचा, इसी तरह की जुदाई की शक्ति दे. यह संभव है कम या लंबी स्तंभ पैमाने लेकिन ध्यान में रखना है कि जुदाई बदल जाएगा.
इंजेक्शन वॉल्यूम
पीक आकार और लदान क्षमता है इंजेक्शन की मात्रा जरूरतों के लिए उपयुक्त निम्न समीकरण का उपयोग बढ़ाया जा बनाए रखने के लिए: 
कहां खंड इंजेक्शन की मात्रा (μL), डी स्तंभ के भीतरी व्यास (मिमी), और एल स्तंभ लंबाई (मिमी) है. उदाहरण के लिए, एक 4.6 x 50 मिमी स्तंभ पर एक 20 μL इंजेक्शन 341 एक 19 x 50 मिमी प्रारंभिक स्तंभ पर μL इंजेक्शन से मेल खाती है.
प्रवाह दर
जुदाई गुणवत्ता बनाए रखने के प्रवाह की दर स्तंभ आयामों पर आधारित छोटा होना चाहिए. समान कण आकार के स्तंभों के साथ, निम्न समीकरण ज्यामितीय प्रवाह दर पैमाने पर प्रयोग किया जाता है: 
कहाँ एफ प्रवाह की दर (एमएल / मिनट) और डी स्तंभ के भीतरी व्यास (मिमी) है. उदाहरण के लिए, एक 1.5 एमएल / मिनट एक 4.6 मिमी ID स्तंभ पर प्रवाह की दर 25.6 एमएल / मिनट एक 19 मिमी ID स्तंभ पर प्रवाह की दर के लिए equates.
ढाल स्केलिंग
जब स्तंभों समान लंबाई के हैं, ढाल प्रोफ़ाइल में कोई परिवर्तन नहीं की आवश्यकता हैं. अगर अब या छोटे स्तंभों स्केलिंग, ढाल खंड मात्रा जुदाई प्रोफ़ाइल को संरक्षित करने के लिए बनाए रखा होना चाहिए.
वाटर्स OBD तैयारी कैलकुलेटर, एक मुफ्त डाउनलोड, (चित्रा 2) एक उपकरण का उपयोग करने के लिए आसान प्रदान करता है कि इन विश्लेषणात्मक करने के लिए प्रारंभिक स्केलिंग गणना (में एड्स / www.waters.com prepcalculator). इस कैलकुलेटर के लिए तैयारी जुदाई इस Appl में वर्णित विधि विश्लेषणात्मक जुदाई विधि कन्वर्ट करने के लिए प्रयोग किया जाता थाication ध्यान दें.
चित्रा 2 वाटर्स OBD तैयारी कैलकुलेटर.
वाटर्स OBD तैयारी कैलकुलेटर का उपयोग
इंजेक्शन की मात्रा और प्रवाह की दर की गणना करने के लिए, प्रारंभिक स्क्रीन से बड़े पैमाने पर लोड स्केलिंग गणना (चित्रा 3) का चयन करें. अपनी विश्लेषणात्मक और प्रारंभिक स्तंभ आयाम, विश्लेषणात्मक प्रवाह की दर, और इंजेक्शन की मात्रा इनपुट, कैलकुलेटर सही प्रारंभिक मान देता है.
चित्रा 3 वाटर्स OBD तैयारी कैलक्यूलेटर जन लोड स्केलिंग गणना.
यदि आपके स्तंभ लंबाई समान हैं तो आप बस अपने ढाल अपनी विश्लेषणात्मक पद्धति के रूप में एक ही ढाल खंड बार का उपयोग कर कोई तालिका में प्रारंभिक प्रवाह दरों इनपुट कर सकते हैं. वैकल्पिक रूप से, ढाल विधियों के लिए, प्रारंभिक स्क्रीन से बुनियादी ढाल अदिश गणना (चित्रा 4) चुनते हैं, तो अपने विश्लेषणात्मक और प्रारंभिक स्तंभ आयाम, इनपुट अपने विश्लेषणात्मक ढाल तालिका का चयन करें, और गणना बटन पर क्लिक करें. प्रारंभिक ढाल तालिका स्वचालित रूप से परिकलित किया जाता है और पेज के नीचे आधे पर दिखाया. वाटर्स OBD तैयारी कैलक्यूलेटर उपयोगकर्ता गाइड सभी कैलकुलेटर कार्यों के उपयोग पर विस्तृत निर्देश देता है.
चित्रा 4 वाटर्स OBD तैयारी कैलकुलेटर बुनियादी ढाल अदिश गणना.
परिणाम
पहले से वर्णित तकनीकों को प्रदर्शित करने के लिए, विश्लेषणात्मक जुदाई प्रायोगिक खंड में वर्णित विधि के तीन अलग अलग प्रारंभिक आयाम स्तंभों (10.0, 19.0 और 30.0 मिमी आईडी) करने के लिए बढ़ाया था. स्केल प्रवाह दरों और इंजेक्शन संस्करणों (सभी वाटर्स OBD तैयारी कैलकुलेटर का उपयोग कर की गणना) तालिका 1 में दिखाया गया है.
| आंतरिक व्यास (मिमी) | फ्लो दर (एमएल / मिनट) | इंजेक्शन वॉल्यूम (μL) |
| 4.6 | 1.5 | 20 |
| 10.0 | 7.1 | 95 |
| 19.0 | 25.6 | 341 |
| 30.0 | 63.8 | 851 |
तालिका 1. वाटर्स OBD तैयारी कैलक्यूलेटर पहुंचा प्रवाह दरों और इंजेक्शन संस्करणों.
प्रारंभिक स्तंभों के सभी SunFire प्रारंभिक 18 सी, 5 सुक्ष्ममापी, OBD तकनीक के साथ लंबाई में 50 मिमी, और separations के सभी विश्लेषणात्मक पैमाने क्रोमैटोग्राफी के रूप में एक ही सिस्टम पर प्रदर्शन किया गया . के रूप में चित्रा 5 से देखा गया है सकते हैं, पैमाने की परवाह किए बिना, क्रोमैटोग्राफी (यूवी घरेलू) बहुत समान है.
चित्रा 5 स्केल्ड तैयारी Separations, 10 मिमी आईडी (ऊपर), 19 मिमी आईडी (मध्य), 30 आईडी मिमी (नीचे).
जब मूल 4.6 मिमी आईडी पैमाने (चित्रा 1) की तुलना में, यह देखा जा सकता है कि संकल्प और अवधारण समय के संदर्भ में क्रोमैटोग्राफी फिर बहुत समान कर सकते हैं. इस सरल प्रयोग दर्शाता है कि बड़े पैमाने अप एक व्यवस्थित दृष्टिकोण के प्रमुख घटकों के बीच chromatographic संकल्प को बनाए रखने के लक्ष्य से मिलता है और उपयोगकर्ताओं को सक्षम करने के लिए बेहतर विश्लेषणात्मक और प्रारंभिक क्रोमैटोग्राफी के बीच chromatographic प्रदर्शन की भविष्यवाणी है. यह व्यायाम भी वाटर्स AutoPurification सिस्टम है, जो उपयोगकर्ताओं को प्रदर्शन समझौता नहीं के साथ एक ही सिस्टम पर दोनों विश्लेषणात्मक और प्रारंभिक क्रोमैटोग्राफी प्रदर्शन करने के लिए अनुमति देता है की अद्वितीय क्षमता को दर्शाता है.
निष्कर्ष
ब्याज की कोई संघर्ष की घोषणा की.
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| AutoPurification System | Waters | More information available at www.waters.com | Preparative HPLC System |
| Prep OBD Calculator | Waters | More information available at www.waters.com | Software Tool |
| SunFire C18 Column, 5 m, 4.6 x 50 mm | Waters | 186002557 | Analytical HPLC Chromatography Column |
| SunFire Prep C18 Column, 5 m, 10 x 50 mm | Waters | 186002561 | Preparative HPLC Chromatography Column |
| SunFire Prep C18 OBD Column, 5 m, 19 x 50 mm | Waters | 186002566 | Preparative HPLC Chromatography Column |
| SunFire Prep C18 OBD Column, 5 m, 30 x 50 mm | Waters | 186002570 | Preparative HPLC Chromatography Column |
and Cancer Risk Estimation in the Atmosphere
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ReplyPosted by: NarangerelFebruary 1, 2012, 5:30 AM