The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.
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The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.
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Pharmaceutical Business Operations, Waters Corporation
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워터스 AutoPurification 시스템을 사용하여 분리 방법은 분석 규모 개발 및 동일한 시스템에 예비 규모 전송, 실험실의 전반적인 자본 투자를 줄이는 수 있습니다. 여기에 10을 통해 4.6 mm ID를 분석 칼럼 분리에서 이동 쿠드즈의 분리 (Pueraria lobata) 루트 추출물, 19, 그리고 30mm의 ID 예비 열 분리를 이용하여 최대 규모 체계적인 접근 방법을 설명합니다.
1. 샘플 준비
쿠드즈 루트 조각 (20g)는 물 / 메탄올 9시 1분 100 ML에 추가하고 1 시간 부러 뜨 리고, 하룻밤 서서 허용하고, 추가 시간 동안 충격을했다. 이 추출물은 20 분 동안 3,000 rpm으로 centrifuged 추가적인 치료없이 사용되었다.
2. 실험 조건
모든 스케일에서 색층 분리는 다음과 같은 워터스 구성 요소로 구성되어 워터스 AutoPurifcation 시스템을 사용하여 수행되었습니다
| 펌프 : | 2545 바이너리 그라디언트 모듈 |
| 감지기 : | 2998 Photodiode 배열 3100 질량 검출기 |
| 주입기 / 콜렉터 : | 2767 샘플 관리자 |
| 열 관리 : | 시스템 Fluidics의 주최자 |
초기 분석 규모의 분리는 아래에서 설명하는 조건을 사용하여 워터스 SunFire C 18, 4.6 X 50mm, 5 μm의 칼럼에서 개발되었습니다.
| 칼럼 온도 : | 포위한 |
| 유량 : | 1.5 ML / 분 |
| 모바일 단계 : | 물 + 0.1 %의 개미의 소산 |
| 모바일 단계 B : | 메탄올 |
| 그라데이션 : | 7분 이상 5% 70 % B |
| 사출 볼륨 : | 20 μL |
| 검색 : | UV (200-400 nm의)과 MS 전체 검색 1백50~7백미터 / Z |
결과 크로마토 그램 (그림 1) 해결 화합물의 번호를 보여주 규모 - 최대 허용 후보로 간주되었다.
그림 1. 쿠드즈 뿌리 추출물의 분리 분석 (4.6 mm의 ID).
결과 및 토론
스케일 업 방법
그들의 화합물에 맞는 방법을 사용하여, 화학자는 조사 과정을 속도를 가능한 최단 시간에 자신의 혼합물에서 높은 품질의 분수를 얻을 수 있습니다. 이 스케일 - 업 과정을 접근 때 고려해야 할 중요한 요인이 있습니다.
열 화학
분리의 핵심은 열 수 있습니다. 이상적으로 당신은 동일 열 화학을 선택해야합니다. 분석 및 예비 열이 서로 다른 화학있다면, 그것은 분석 결과에 따라 예비 분리를 예측하는 것은 매우 어려워진다. 워터스 분석 및 예비 규모의 크기에서 사용할 수있는 열 화학 선택의 다양한 범위를 제공합니다. 화학 자체뿐만 아니라, 입자의 크기도 고려되어야합니다. 같은 입자 크기의 열 분리 저울 모두에서 중요한 쌍 유사한 해상도를 제공합니다. 열 길이도 분리 효율에 영향을 미치는, 동일한 길이의 컬럼은 환산하면 유사한 분리 능력을 제공합니다. 짧게 이상 열 규모지만 분리가 변경됩니다 것을 명심하는 것이 가능합니다.
사출 볼륨
사출 볼륨이 적절한 다음과 같은 방정식을 사용하여 크기를 조정해야 피크 모양과 로딩 용량을 유지하려면 다음 단계를 따르십시오 
권은 사출 볼륨 (μL)입니다 어디, D는 열 (㎜)의 내부 직경이고, L은 컬럼 길이 (mm)입니다. 예를 들어, 4.6 X 50mm 칼럼에 20 μL 주사는 19 X 50mm 예비 칼럼에 341 μL 주사에 해당합니다.
유량
분리 품질을 유지하기 위해 유량은 열을 크기에 따라 크기를 조정해야합니다. 동일한 입자 크기의 컬럼을 통해 다음과 같은 방정식을 기하학적으로 유량을 확장하는 데 사용됩니다 : 
F는 유량 (ML / 분)이며 D는 열 (mm)의 내경입니다. 예를 들어, 4.6 mm ID가 칼럼에서 1.5 ML / 분 유량은 19mm의 ID 열 (Column)에 25.6 ML / 분 유량에 equates.
그라데이션 스케일링
열이 동일한 길이의 경우, 그라디언트 프로필에 아무런 변경이 필요하지 않습니다. 길거나 짧게 열을 확장은, 그라디언트 세그먼트 볼륨이 분리 프로필을 보존하기 위해 유지되어야하는 경우.
워터스 OBD 준비 계산기, 무료 다운로드 (그림 2) 도구를 사용하기 쉽게 제공하는 이러한 분석 - 투 - 예비 크기 조정 계산 (에이즈 www.waters.com / prepcalculator ). 이 계산기는이 appl에서 설명한 예비 분리 방법에 대한 분석 분리 방법을 변환하는 데 사용되었다주시죠 노트.
그림 2. 워터스 OBD 준비 계산기.
워터스 OBD 준비 계산기를 사용하여
분사 볼륨과 흐름 속도를 계산하려면 시작 화면에서 대량로드 크기 조정 계산 (그림 3)을 선택합니다. 입력하여 분석 및 예비 열 크기, 분석 유량 및 사출 볼륨, 계산기 올바른 예비 값을 반환합니다.
그림 3. 워터스 OBD 준비 계산기 질량 부하 조절 계산.
열 길이가 동일한 경우에는 귀하의 분석 방법과 동일 그라디언트 세그먼트 시간을 사용하여 그라디언트 테이블에 입력 예비 흐름 속도를 간단하게하실 수 있습니다. 또는 기울기 방법에 대한, 시작 화면에서 기본 그라데이션 스칼라 계산 (그림 4)를 선택하여 분석 및 예비 열 크기를 입력하여 분석 그라디언트 테이블을 선택하고 계산 버튼을 클릭합니다. 예비 기울기 테이블이 자동으로 계산하여 페이지의 절반 아랫부분에 표시됩니다. 워터스 OBD 준비 계산기 사용자 가이드는 계산기 기능의 사용에 대한 자세한 지침을 제공합니다.
그림 4. 워터스 OBD 준비 계산기 기본 기울기 스칼라 계산.
검색 결과
이전에 설명한 기법을 보여주기 위해, 실험 섹션에서 설명한 분석 분리 방법은 3 가지 다른 예비 치수 열 (10.0, 19.0 및 30.0 mm의 ID)로 환산했다. 축소 흐름 속도와 사출 볼륨 (모든 워터스 OBD 준비 계산기를 사용하여 계산) 표 1에 표시됩니다.
| 내경 (㎜) | 유량 (ML / 분) | 사출 볼륨 (μL) |
| 4.6 | 1.5 | 20 |
| 10.0 | 7.1 | 95 |
| 19.0 | 25.6 | 341 |
| 30.0 | 63.8 | 851 |
표 1. 워터스 OBD 준비 계산기 환산 흐름 속도와 사출 볼륨.
예비 컬럼의 모든 SunFire 예비 C 18, 5 μm의, OBD 기술과 길이 50mm, 그리고 분리의 모든 분석 규모 크로마 토그래피와 같은 시스템에서 수행되었습니다 있습니다. 에 관계없이 규모, 그림 5에서 볼 수 있듯이되고, 크로마 토그래피 (UV TIC)는 매우 유사합니다.
그림 5. 줄인다 준비 분판, 10mm의 ID (상단), 19mm의 ID (중간) 30의 ID mm (아래)
원래 4.6 mm의 ID 규모 (그림 1)에 비해, 그것은 해상도 및 유지 시간의 관점에서 크로마 토그래피가 다시 매우 비슷하다고 볼 수 있습니다. 이 간단한 실험은 규모 - 최대 체계적인 접근이 주요 구성 요소 사이의 색층 해상도를 유지하는 목표를 충족하고 더 나은 분석 및 예비 크로마 토그래피 사이 색층 성능을 예측하는 사용자 수는 것을 설명합니다. 이 운동은 또한 사용자가없이 성능 타협과 같은 시스템에서 분석 및 준비 크로마 토그래피를 모두 수행할 수 있습니다 워터스 AutoPurification 시스템의 고유한 기능을 보여줍니다.
결론
관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| AutoPurification System | Waters | More information available at www.waters.com | Preparative HPLC System |
| Prep OBD Calculator | Waters | More information available at www.waters.com | Software Tool |
| SunFire C18 Column, 5 m, 4.6 x 50 mm | Waters | 186002557 | Analytical HPLC Chromatography Column |
| SunFire Prep C18 Column, 5 m, 10 x 50 mm | Waters | 186002561 | Preparative HPLC Chromatography Column |
| SunFire Prep C18 OBD Column, 5 m, 19 x 50 mm | Waters | 186002566 | Preparative HPLC Chromatography Column |
| SunFire Prep C18 OBD Column, 5 m, 30 x 50 mm | Waters | 186002570 | Preparative HPLC Chromatography Column |
and Cancer Risk Estimation in the Atmosphere
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ReplyPosted by: NarangerelFebruary 1, 2012, 5:30 AM