The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.
Authors
The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.
This translation into Hebrew was automatically generated through Google Translate.
English Version | Other Languages
Pharmaceutical Business Operations, Waters Corporation
Sign in to register to receive emails with product information.
באמצעות מערכת AutoPurification ווטרס, שיטות ההפרדה ניתן לפתח בקנה מידה אנליטית והועברו בקנה מידה הכנה באותה מערכת, תוך הפחתת השקעות הון הכוללת של המעבדה. כאן אנו להדגים גישה שיטתית בהיקף-up באמצעות הפרדת kudzu (Pueraria lobata) תמצית שורש לעבור ממצב 4.6 מזהה ההפרדה מ"מ טור אנליטית באמצעות 10, 19, ו 30 מ"מ מזהה הפרדות הכנה העמודה.
1. לדוגמא הכנה
שורש kudzu חתיכות (20 גרם) נוספו 100 מ"ל מים / מתנול 09:01 ומזועזע שעה 1, מותר לעמוד לילה, ומזועזע שעה נוספת. תמצית זו היתה centrifuged ב 3000 סל"ד במשך 20 דקות שימוש ללא טיפול נוסף.
2. ניסיוני תנאי
הפרדות chromatographic, בקני מידה כל, בוצעו באמצעות מערכת AutoPurifcation ווטרס, אשר כללה את המרכיבים ווטרס הבאים:
| משאבה: | 2545 צבע בינארי מודול |
| גלאים: | 2998 photodiode Array 3100 המוניים גלאי |
| Injector / נציב: | 2767 לדוגמא מנהל |
| טור ניהול: | מערכת ארגונית fluidics |
ההפרדה הראשונית בהיקף אנליטית פותחה על SunFire ווטרס C 18, 4.6 X 50 מ"מ, 5 טור מיקרומטר, תוך שימוש בתנאים המתוארים להלן.
| טור Temp: | אמביינט |
| קצב הזרימה: | 1.5 mL / min |
| שלב נייד: | מים + חומצה פורמית 0.1% |
| Mobile שלב ב ': | מתנול |
| צבע: | 5% עד 70% ב מעל 7 דקות |
| הזרקה נפח: | 20 μL |
| זיהוי: | UV (200-400 ננומטר) ו-MS שליטת סריקה 150-700 מ '/ z |
Chromatogram וכתוצאה מכך (איור 1) הראו מספר תרכובות נפתרה נחשב מועמד מקובל עבור מדרוג כלפי מעלה.
באיור 1. ההפרדה אנליטי (4.6 מזהה מ"מ) של תמצית שורש kudzu.
תוצאות ודיון
Scale-Up שיטה
באמצעות שיטות המותאמות תרכובות שלהם, כימאים יכולים לקבל שברים באיכות גבוהה יותר מתערובות שלהם בזמן הקצר ביותר האפשרי להאיץ את תהליך החקירה. ישנם מספר גורמים מרכזיים שיש להביא בחשבון בעת תהליך זה מתקרב הסולם למעלה.
טור לכימיה
ליבו של ההפרדה היא העמודה. באופן אידיאלי, אתה צריך לבחור chemistries טור זהים. אם העמודות אנליטיים preparative הם הכימיה שונה, זה הופך להיות קשה מאוד לחזות את ההפרדה preparative בהתבסס על תוצאות הניתוח. ווטרס מציעה מגוון רחב של כימיה בחירות טור זמין אנליטיים ממדים preparative סולם. בנוסף כימיה עצמו, גודל החלקיקים צריך להיות גם נחשב. עמודות של גודל החלקיקים אותו תספק פתרון דומה של זוגות קריטית בשני סולמות ההפרדה. אורך טור גם משפיע על יעילות ההפרדה; עמודות באורך זהה, כאשר scaled, לתת כוח הפרדה דומה. אפשר בהיקף טור קצר או ארוך יותר אך יש לזכור כי ההפרדה ישתנה.
הזרקת נפח
כדי לשמור על הצורה שיא ויכולת טעינת נפח הזרקה צריך להיות בקנה מידה מתאים באמצעות המשוואה הבאה: 
איפה הוא כרך את עוצמת הזריקה (μL), D הוא הקוטר הפנימי של הטור (מ"מ), ו-L הוא אורך הטור (מ"מ). לדוגמה, הזרקת 20 μL על עמודת 4.6 מ"מ x 50 מקביל הזרקת 341 μL על 19 x 50 טור preparative מ"מ.
קצב הזרימה
כדי לשמור על איכות ההפרדה קצב הזרימה צריך להיות מדורגים על בסיס ממדים העמודה. עם עמודות של גודל החלקיקים זהים, המשוואה הבאה משמש גאומטרית בהיקף קצב הזרימה: 
איפה F הוא קצב הזרימה (mL / min) ו-D הוא הקוטר הפנימי של הטור (מ"מ). לדוגמה, 1.5 mL / min קצב הזרימה על עמודת ID 4.6 מ"מ משווה שיעור mL / min 25.6 לזרום על עמודה מזהה 19 מ"מ.
צבע דרוג
כאשר העמודים הם באורך זהה, אין שינויים לפרופיל צבע נדרשים. אם קנה המידה לעמודות ארוך או קצר, בהיקף קטע שיפוע חייבת להישמר כדי לשמר את פרופיל ההפרדה.
OBD ווטרס Prep מחשבון, הורדה חינם, (איור 2) מספק קל לשימוש בכלי המסייע בחישובים אלה אנליטית ל-preparative דרוג ( www.waters.com / prepcalculator ). מחשבון זה נעשה שימוש כדי להמיר את שיטת ההפרדה האנליטית לשיטות ההכנה ההפרדה המתואר זה Application לב.
איור 2. ווטרס OBD Prep מחשבון.
שימוש OBD ווטרס Prep מחשבון
כדי לחשב נפח הזרקה ספיקות, בחר לטעון המוני דרוג החישוב (איור 3) ממסך הפתיחה. קלט אנליטית שלך ממדים preparative טור, קצב הזרימה אנליטיות, נפח הזרקה; את המחשבון מחזיר את הערכים הנכונים preparative.
איור 3. ווטרס OBD מסה Prep מחשבון חישוב עומס דרוג.
אם מאמצים את הטור שלך זהים אתה יכול פשוט קלט ספיקות preparative לטבלה צבע באמצעות קטע פעמים באותו צבע כמו שיטה אנליטית שלך. לחלופין, עבור שיטות צבע, בחר צבע בסיסי חישוב סקלר (איור 4) ממסך הפתיחה, בחר אנליטית שלך ממדים preparative טור, שולחן קלט שיפוע אנליטית שלך, לחץ על לחצן לחשב. הטבלה שיפוע preparative מחושב באופן אוטומטי ומוצג על החצי התחתון של הדף. OBD ווטרס משתמש Prep מדריך מחשבון נותן הוראות מפורטות על השימוש בכל הפונקציות במחשבון.
איור 4. ווטרס OBD Prep מחשבון חישוב בסיסי סקלר הדרגתי.
תוצאות
כדי להדגים את הטכניקות המתוארות לעיל, שיטת ההפרדה האנליטית המתואר בסעיף הניסוי היה scaled עד שלוש עמודות שונות preparative מימד (10.0, 19.0, 30.0 ו מזהה מ"מ). שיעורי זרימת מדורגים ואמצעי אחסון הזרקה (מחושב כל שימוש OBD ווטרס Prep מחשבון) מוצגים בטבלה 1.
| קוטר פנימי (מ"מ) | קצב הזרימה (mL / min) | נפח הזרקה (μL) |
| 4.6 | 1.5 | 20 |
| 10.0 | 7.1 | 95 |
| 19.0 | 25.6 | 341 |
| 30.0 | 63.8 | 851 |
1. טבלת ווטרס OBD מחשבון Prep מדורגים זרימת שיעורי כרכים ההזרקה.
כל העמודים preparative הם SunFire preparative C 18, 5 מיקרומטר, 50 מ"מ אורך עם הטכנולוגיה OBD, וכל הפרדות בוצעו על מערכת זהה כרומטוגרפיה סולם אנליטית. כפי שניתן היה לראות באיור 5, ללא קשר לגודל, את כרומטוגרפיה (UV עוית) דומה מאוד.
איור 5. הפרדות הכנה Scaled, 10 מזהה מ"מ (למעלה), 19 מ"מ מזהה (באמצע), 30 מ"מ מזהה (התחתון)
כאשר לעומת היקף 4.6 מ"מ המקורי מזהה (איור 1), ניתן לראות כי מבחינת הרזולוציה זמן השמירה כרומטוגרפיה הוא שוב דומה מאוד. זה ניסוי פשוט מוכיח כי גישה שיטתית כדי הסולם למעלה עונה על המטרה של שמירה על רזולוציה chromatographic בין רכיבי מפתח ומאפשר למשתמשים לחזות טוב יותר את ביצועי chromatographic בין כרומטוגרפיה אנליטיים preparative. תרגיל זה גם מדגים את יכולת ייחודית של מערכת AutoPurification ווטרס, אשר מאפשר למשתמשים לבצע את שתי כרומטוגרפיה אנליטיים הכנה על אותה מערכת ללא פשרות בביצועים.
מסקנות
אין ניגודי אינטרסים הכריז.
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| AutoPurification System | Waters | More information available at www.waters.com | Preparative HPLC System |
| Prep OBD Calculator | Waters | More information available at www.waters.com | Software Tool |
| SunFire C18 Column, 5 μm, 4.6 x 50 mm | Waters | 186002557 | Analytical HPLC Chromatography Column |
| SunFire Prep C18 Column, 5 μm, 10 x 50 mm | Waters | 186002561 | Preparative HPLC Chromatography Column |
| SunFire Prep C18 OBD Column, 5 μm, 19 x 50 mm | Waters | 186002566 | Preparative HPLC Chromatography Column |
| SunFire Prep C18 OBD Column, 5 μm, 30 x 50 mm | Waters | 186002570 | Preparative HPLC Chromatography Column |
and Cancer Risk Estimation in the Atmosphere
1
ReplyPosted by: NarangerelFebruary 1, 2012, 5:30 AM