पालन ​​के लिए एक अनुकूलित प्रोटोकॉल Fopius arisanus Tephritid फलों की एक Parasitoid मक्खियों

Manoukis, N., Geib, S., Seo, D., McKenney, M., Vargas, R., Jang, E. An Optimized Protocol for Rearing Fopius arisanus, a Parasitoid of Tephritid Fruit Flies. J. Vis. Exp. (53), e2901, doi:10.3791/2901 (2011).

Fopius arisanus (Sonan) कम से कम दो कारणों के लिए एक Tephritid फल मक्खियों के महत्वपूर्ण parasitoid है. सबसे पहले, यह केवल तीन opiine parasitoids अंडा ¹ चरण के दौरान मेजबान को संक्रमित करने के लिए जाना जाता में से एक है. दूसरा, यह संभावित फल मक्खी मेजबान की एक विस्तृत श्रृंखला है. शायद अपने जीवन का इतिहास है, एफ के कारण arisanus सफलतापूर्वक कई उष्णकटिबंधीय क्षेत्रों ^2-4 में फल मक्खियों के जैविक नियंत्रण के लिए इस्तेमाल किया गया है. एक एफ के व्यापक उपयोग करने के लिए बाधा फल मक्खी नियंत्रण के लिए arisanus है कि यह एक स्थिर ^{प्रयोगशाला} 5-9 कॉलोनी की स्थापना के लिए मुश्किल है. इस कठिनाई के बावजूद, 1990 के दशक के USDA शोधकर्ताओं में एफ की प्रयोगशाला आबादी को बनाए रखने के लिए एक विश्वसनीय विधि विकसित ^10-12 arisanus. एफ में महत्वपूर्ण हित है arisanus ^13,14 जीव विज्ञान, विशेष रूप से Tephritid मेजबान की एक विस्तृत विविधता ^14-17 उपनिवेश स्थापित करने की क्षमता के ^बारे में, ब्याज विशेष रूप से पिछले 18 दशक में नए महाद्वीपों Bactrocera फल मक्खी कीट के खतरनाक प्रसार द्वारा संचालित है. एफ पर इसके अलावा अनुसंधान arisanus और एक जैविक नियंत्रण एजेंट के रूप में इस प्रजाति की अतिरिक्त तैनाती पालन के तरीकों के अनुकूलन और सुधार से लाभ होगा. इस प्रोटोकॉल और जुड़े वीडियो लेख में हम एफ पालन के लिए एक अनुकूलित विधि का वर्णन arisanus एक पहले से वर्णित ¹² दृष्टिकोण पर आधारित है . विधि हम यहाँ वर्णन एफ के पालन की अनुमति देता है फल के उपयोग के बिना एक छोटे पैमाने में arisanus, दुनिया भर में और अपेक्षाकृत कम शारीरिक श्रम की आवश्यकताओं के साथ उष्णकटिबंधीय क्षेत्रों में उपलब्ध सामग्री का उपयोग.

1. Parasitization के लिए मेजबान फल मक्खी अंडे की तैयारी

1. भरा बर्तन, पक्ष के अनुसार लंबाई में 10 सेमी और 1.5 सेमी गहराई, फल मक्खी के लिए अगर (एक और अधिक लागत प्रभावी विकल्प वैकल्पिक रूप से, Gelcarin GP812, एफएमसी biopolymer, Ewing न्यू जर्सी) की तैयारी द्वारा parasitized अंडे के लिए एक सब्सट्रेट तैयार. अगर पानी की लीटर प्रति 9 ग्राम के एक एकाग्रता में तैयार करें.
2. तरल अगर (लगभग 70ml) के साथ रिम व्यंजन भरें, और उन्हें शांत करने के लिए जमना की अनुमति (कम से कम 45 मिनट).
3. एक बार अगर ब्लॉक ठोस हैं, टिशू पेपर के एक एकल परत (जॉर्जिया प्रशांत 'पसंद' के बैच ऊतक के एक एकल प्लाई) लागू होते हैं, प्रत्येक ब्लॉक के शीर्ष को कवर. ऊतक आसानी से सतह नमी की वजह से अगर रहना चाहिए.
4. लागू एक 0.5 मिलीलीटर मात्रा फल मक्खी अंडे पानी में अगर ब्लॉक के ऊतकों सतह को कवर करने के लिए निलंबित कर दिया. हमारे insectary में, यह अंडे Bactrocera dorsalis (12000 मिलीलीटर प्रति अंडे) के बारे में 6000 के बराबर है.
5. एक साफ 2.5 सेमी चौड़ा ब्रश पानी में डूबा हुआ फल मक्खी अंडे ऊतक सतह पर समान रूप से फैला का प्रयोग करें.
6. Parasitoid पिंजरों के नीचे स्क्रीन के नीचे फल मक्खी अंडे प्लेस oviposition की अनुमति है. मृत परजीवी जो अंडे बाधा डालती सकता है निकालने के नीचे स्क्रीन के नीचे ठोकर. यह सबसे अच्छा है अगर अंडे नीचे स्क्रीन स्पर्श नहीं करता है.
7. परजीवी oviposit रातोंरात और अगले दिन में, लगभग 21 घंटे की अनुमति दें. यह parasitized हो अंडे के एक उच्च प्रतिशत के लिए पर्याप्त समय है. अब जोखिम जोखिम superparasitization.

2. अंडे सेने और parasitized मेजबान फल के pupation मक्खियों

1. ऊपर की ओर का सामना करना पड़ रहा अंडे के साथ 3 से 3.5 फल मक्खी ¹⁹ आहार का 1.25 लीटर प्रति parasitized अंडे तैयार अगर ब्लॉक रखकर कंटेनर पालन तैयार.
2. एक बड़ा pupation कंटेनर में एक 1.5 सेमी ठीक ग्रेड vermiculite या धोया रेत की गहरी परत के ऊपर एक रिसर पर अंडे के साथ आहार कंटेनर रखें. कवर एक ढक्कन और टेप मास्किंग के साथ टेप के किनारों के साथ pupation कंटेनर. Vermiculite से sifting (नीचे देखें) के बाद reused किया जा सकता है.
3. सुनिश्चित करें कि वहाँ फल मक्खी लार्वा के लिए बाहर क्रॉल और नीचे vemiculite में ^'पॉप 20 के लिए आहार कंटेनर के ऊपर और pupation कंटेनर ढक्कन के बीच पर्याप्त जगह है.
4. 27 में एक कमरे में pupation कंटेनर ले जाएँ डिग्री सेल्सियस और एक सप्ताह के लिए 80% सापेक्ष आर्द्रता (आरएच). पहले चार दिनों के लिए एक काले कपड़े से कवर कंटेनर तो शेष दिनों के लिए कपड़े को हटा दें.
5. एक सप्ताह बाद लार्वा आहार निकालें, एक बार लार्वा popped और pupation लिए vermiculite प्रवेश. अगर वहाँ vermiculite में लार्वा हैं, उन्हें रात कोषस्थ कीट धारण करना करने के लिए अनुमति देते हैं.
6. Vermiculite से pupae चलनी. एक मोटे चलनी (लगभग 3 मिमी) के साथ प्रारंभ करें तो vermiculite के किसी भी शेष clumps को हटाने के लिए एक हाथ चलनी का उपयोग करने के लिए.

3. सॉर्टिंग और चयन

1. कोषस्थ कीट युक्त एफ arisanus आंशिक रूप से आकार द्वारा unparasitized फल मक्खियों से अलग किया जा सकता है. कोषस्थ कीट व्यास में 1.65 और 2.26 मिमी के बीच ^{लीजिए} 12 Puparia के रूप में इन parasitized मक्खियों के लिए समृद्ध हो जाएगा जो छोटे होते हैं, ज्यादातर ख़राब parasitoids बड़ा कोषस्थ कीट ज्यादातर मक्खियों होते हैं .. यह भी ध्यान दें कि parasitized pupae के लिए ^{महिलाओं} का प्रतिशत 12 आकार के साथ सकारात्मक संबद्ध.
2. तरीकों की एक किस्म के आकार द्वारा pupae सॉर्ट करने के लिए नियोजित किया जा सकता है. हम एक यांत्रिक विधि का उपयोग एक कस्टम आकार ²¹ सॉर्टर का वर्णन करेंगे.
3. एक कंपन फीडर है जो धीरे धीरे आकार सॉर्टर फ़ीड के शीर्ष पर कीप में pupae रखें.
4. आकार सॉर्टर है, जो एक 30 ° कोण पर थोड़ा मुक़्तलिफ़ रोलिंग सलाखों के एक जोड़ी के होते हैं में pupae फ़ीड. आकार द्वारा pupae व्यक्तिगत स्लॉट है कि एक चिमनी के माध्यम से दस अलग कंटेनरों में खाली की एक सरणी में ड्रॉप.
5. 1.65 के आकार रेंज में कप से 2.26 मिमी pupae लीजिए और उन्हें एक उद्भव पिंजरे में अधिक 7 दिन के लिए जब तक ज्यादातर मक्खियों unparasitized pupae से उभरा है जगह.
6. अगले, एक प्रशंसक का उपयोग करने के लिए उन अभी भी युक्त कीड़ों से खाली puparia अलग.

4. एफ arisanus उद्भव और रखरखाव

1. एफ की कॉलोनी को बनाए रखने arisanus एक हटाने योग्य गिलास सामने के साथ एक parasitoid पकड़े पिंजरे का उपयोग, लगभग 25 सेमी पक्ष के अनुसार लंबाई में. पिंजरे और पक्षों के दो शीर्ष पर 1mm ² स्क्रीनिंग है. पिंजरे के पीछे पहुँच के लिए एक 9 सेमी छेद के साथ एक रबर शीट में शामिल किया गया है. पिंजरे के नीचे एक बाहर ² स्क्रीन काफी बड़े parasitoid oviposition के लिए फल मक्खी अंडे के साथ दो अगर ब्लॉकों के स्थान की अनुमति 1-2mm के साथ अंदर पर कवर में कटौती है.
2. पकड़े पिंजरों भी कांच के सामने नीचे तिमाही के साथ एक रंगा हुआ हिस्से को प्रकाश जो पिंजरे के सामने के साथ parasitoid भीड़ बनाने, ऊंचा मृत्यु दर में जिसके परिणामस्वरूप कर सकते हैं कम से कम होना चाहिए.
3. इन selec के लगभग 11 ग्राम निकालें.प्लास्टिक के कंटेनर में टेड pupae व्यास में लगभग 9 सेमी. इस पिंजरे प्रति 600-700 के बारे में परजीवी का उत्पादन करना चाहिए. साइज चयन के बारे में 60% महिलाओं में परिणाम चाहिए.
4. कंटेनरों जांच lids संलग्न. lids 2 मिमी ² स्क्रीनिंग, जो वयस्क एफ की अनुमति होगी के साथ कवर किया जाना चाहिए है उद्भव पर कंटेनर छोड़ arsianus लेकिन, किसी भी शेष फल मक्खियों में शामिल होंगे.
5. 24 में परजीवी बनाए रखें डिग्री सेल्सियस और के बारे में 45% आरएच 12:12 photoperiod और अच्छे वेंटिलेशन के साथ. यदि उच्च मृत्यु दर मनाया जाता है, पिंजरों कुछ घंटे एक दिन या बढ़ती वेंटिलेशन के लिए सड़क पर चलती इसे कम कर सकते हैं. परजीवियों के लिए oviposit तैयार एक अतिरिक्त सप्ताह में हो सकता है और दो सप्ताह के लिए उत्पादक होना चाहिए.
6. स्ट्रीक पिंजरों के शीर्ष के साथ घूमती शहद प्रति सप्ताह या जब भी उपलब्ध शहद सूखी है कम से कम तीन बार undiluted. संकीर्ण एक fingertip का उपयोग कर धारियाँ में काता शहद लागू करें. नोट कि अगर धारियाँ भी भारी हैं शहद पिंजरे में ड्रिप जाएगा, अगर भी प्रकाश शहद जल्दी बाहर सूखी और अक्सर reapplication की आवश्यकता होती है.
7. प्लेस पिंजरों के सबसे ऊपर परजीवी को नमी प्रदान करने पर अगर ब्लॉकों (10 सेमी x 10 सेमी x 4 सेमी). प्रति सप्ताह दो बार बदला जाना चाहिए.

5. प्रतिनिधि परिणाम:

हम यहाँ USDA-ARS एफ पर आयोजित गुणवत्ता नियंत्रण प्रक्रियाओं से परिणाम की रिपोर्ट arisanus पालन आपरेशन Hilo, हवाई में 5 जनवरी और 22 जून, 2010 के बीच . इस वीडियो लेख और प्रोटोकॉल में वर्णित पैमाने पर हिलो स्थान पर पालन अगस्त 2009 में शुरू किया गया था, और नए स्थान के साथ प्रारंभिक समस्याओं और समायोजन ज्यादातर जनवरी के द्वारा हल किया गया था. इसलिए, इन आंकड़ों परिणाम अन्य शोधकर्ताओं उनके कॉलोनी शुरू अगर वे प्रोटोकॉल का पालन के रूप में वर्णित प्राप्त हो सकता है के प्रतिनिधि हैं और अनुभव पालन कीड़े आमतौर पर है. इस अवधि के दौरान हम एफ के एक छोटे से कॉलोनी को बनाए रखने रहे थे arisanus: 4 parasitoid पकड़े प्रति सप्ताह उत्पादित पिंजरों, 3600 के बारे में एफ करने के लिए बराबर arisanus.

समृद्ध parasitization दरों का एक प्रारंभिक जांच 1.65 के आकार रेंज में pupae के 2 जी नमूना लेने के द्वारा आयोजित किया गया - एक होल्डिंग पिंजरे में एक विकास के अतिरिक्त सप्ताह (2.26 मिमी (समृद्ध) से पहले यानी तुरंत बाद लार्वा आहार हटा दिया गया था और pupae sifted और सॉर्ट किया गया आकार हम जल्दी pupae 'के रूप में इन करने के लिए देखें).. 2010 के पहले तीन महीनों के दौरान समृद्ध नमूने में मतलब अनुपात परजीवी 0.46 (एसडी = 0.18) था. निम्नलिखित तिमाही के दौरान इसका मतलब यह 0.58 (एसडी = 0.08) था, नए स्थान पर कॉलोनी और प्रक्रियाओं के पालन का स्थिरीकरण को दर्शाती है. ध्यान दें कि समृद्ध pupae जो सफलतापूर्वक parasitized नहीं थे उन लोगों के जो emergents उत्पादन नहीं किया था और उन है कि मक्खियों का उत्पादन शामिल है.

पकड़े खाली puparia के पिंजरे को हटाने में एक अतिरिक्त सप्ताह के बाद एक और दो ग्राम नमूना लिया गया था ('देर pupae'). फल मक्खियों इस दूसरे नमूने के 1% के नीचे का प्रतिनिधित्व किया. फल मक्खियों के कम प्रतिशत आंशिक रूप से पहले मक्खियों के परजीवी के साथ तुलना में उद्भव, तो सबसे होल्डिंग कंटेनर में बनी हुई मक्खियों के कारण है.

अंत में, चित्रा 1 pupal मास में उपज देता जनवरी से जून 2010 तक है. पैदावार pupae ब्याज की आकार सीमा में समृद्ध, 1.65-2.26 मिमी से मापा जाता है. वर्ष की शुरुआत में 'जल्दी pupae' के बड़े बड़े पैमाने पर फल मक्खियों और उस समय unemerged pupae की एक उच्च अनुपात का संकेत है, जबकि समायोजन नई सुविधा के लिए किए जा रहे थे.

चित्रा 1 जल्दी समृद्ध (pupal व्यास 1.65-2.26mm) के यील्ड (आकार चयन के तुरंत बाद) और 'देर' Hilo, हवाई में (एक सप्ताह के लिए पकड़ और खाली casings हटाने के बाद) ARS USDA एफ ariasnus कॉलोनी में pupae जनवरी - जून 2010

हम इस प्रोटोकॉल और साथ वीडियो लेख में वर्णित है और प्रदर्शन एफ पालन करने के लिए एक अनुकूलित प्रोटोकॉल ariasnus, Tephritid फल मक्खियों का एक एक प्रयोगशाला स्थापित करने में, parasitoid. इस प्रोटोकॉल से अधिक वर्षों के श्रम और विशेष उपकरणों की राशि के लिए एक कॉलोनी को बनाए रखने की जरूरत कम से कम परिष्कृत किया गया है. ध्यान दें कि हम एक अच्छी तरह से स्थापित है, मेजबान फल मक्खियों के उत्पादक और स्थिर कॉलोनी पालन parasitoids में किसी भी प्रयास के लिए आवश्यक है. हमारे insectary हम एक मेजबान फल मक्खी के रूप में Bactrocera dorsalis उपयोग करते हैं, लेकिन अन्य प्रजातियों के लिए सक्षम ^{मेजबान} के रूप में 14-17 अच्छी तरह से दिखाया गया है.

एफ के कई पहलुओं arisanus कॉलोनी रखरखाव के लिए पता लगाया जा रहते हैं. इन ¹⁰ प्रजातियों में प्रयोगशाला अनुकूलन की दर, ²² सीखने का तंत्र और आनुवंशिक परिवर्तन है कि अनुकूलन और तंत्र है जो मेजबान फल मक्खी plasticity में शामिल हो सकता है है के साथ हो सकता है शामिल हैं.

फ्रेंच पोलिनेशिया, बी बी dorsalis: पिछले दस वर्षों में दुनिया भर Dacine मक्खियों के प्रसार के कई उदाहरणों, विशेष रूप से उन जीनस Bactrocera में किया गया है दक्षिण अमेरिका, बी के कुछ हिस्सों में carambolae अफ्रीका और बी में invadens अफ्रीका और उत्तरी ^3,23,18 परीक्षण एफ जैसे जैविक नियंत्रण एजेंट की प्रभावशीलता भूमध्य में zonata अन्य Bactrocera प्रजातियों के खिलाफ arisanus एक उच्च प्राथमिकता होनी चाहिए, और यह हमारी आशा है कि इस प्रोटोकॉल और साथ वीडियो लेख में वर्णित विधियों के आवेदन एफ पर अनुसंधान में तेजी लाने ²⁴ स्थानों की एक व्यापक विविधता में arisanus. अंत में, आगे एक प्रारंभिक बिंदु के रूप में इस विधि का उपयोग अनुसंधान भी उपन्यास अंडे ^parasitoids की उपनिवेशण 25,1 करने के लिए महत्वपूर्ण जानकारी प्रदान कर सकता है

हम को रिपोर्ट करने के लिए ब्याज की कोई संघर्ष है.

हम insectary और नताशा Sostrom में सहायता के लिए कंप्यूटर ग्राफिक्स के साथ मदद के लिए कीथ Shigeteni धन्यवाद. इस काम USDA-ARS द्वारा वित्त पोषित किया गया था. राय, निष्कर्षों, निष्कर्ष या सिफारिशों इस प्रकाशन में व्यक्त उन लेखकों की हैं और USDA के विचारों को प्रतिबिंबित जरूरी नहीं. USDA एक समान अवसर प्रदाता और नियोक्ता है.

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