הצבת פקטור מצופה חרוזים צמיחה על עוברי תרנגולת בשלב מוקדם

1. הסר ביצים מן החממה

ב-E2 2.5 (~ 17 סנט HH), להסיר את הביצים ולהכין אותם בהתאם. הם יכולים להיות עבד או מיד חזר החממה עבור כמה שעות. הביצים ניתן להציב בטמפרטורת החדר בבטחה במשך יותר משעה. ביצים יכולים להישאר בחוץ למשך מניפולציות. לפעמים אלה יכול לקחת שעה או יותר.

הערה: ככל שהם בטמפרטורת החדר, סביר פחות הם לשרוד.

2. הכנת הודו דיו

1. הכן פתרון חדש של דיו הודו 4% PBS סטרילית.
2. ממלאים מזרק 3 מ"ל עם הפתרון.
3. מניחים 27, מחט מד ½ אינץ' על המזרק.
4. באמצעות זוג hemostats, לכופף את המחט עד זווית של 90 מעלות.

3. פתיחת ביצים הזרקת דיו הודו

1. בעזרת זוג מלקחיים, לקלף את הקלטת אחורה לפתוח את החלון, לקבע אותו באמצעות הצד ההפוך של הסרט בצד האחורי של הביצה.
2. מדריך את המחט בזווית עד שהוא נמצא ממש מתחת העובר. הנחת את המחט מתחת לדיסק צף מבטיח את הדיו, שהוא רעיל לעובר, לא יבוא במגע ישיר.
3. אתה צריך רק להזריק דיו מספיק כדי ליצור ניגוד נוח. זה בדרך כלל פחות מ ¼ מ"ל.

4. פתיחת בצינור העצבי

1. קח זוג מספריים לנתיחה בסדר לחתוך את קרום דק שמונח על גבי, או לפעמים סביב, את העובר.
2. קחו זוג 55 מלקחיים או בדיקה טונגסטן, לפתוח את הצינור העצבי מן האחורי כדי הקדמי. ודא פתיחת הוא גדול מספיק כדי למקם חרוז לתוך זה.

הערה: בהתאם לגיל, בדיקה טונגסטן קנס יכול לשמש כדי לעשות את אותו הדבר.

5. אחזור מצופי הפרין, אקריליק חרוז

1. בעזרת זוג מלקחיים 55, למצוא חרוז שלם בפתרון. תן חרוז לצרף את עצמו בקצה, לאט לאט לסגור את מלקחיים.
2. הסר את חרוז מפתרון ולהביא אותו על גבי הביצה.
3. לאחר חרוז הוא מתוך פתרון, הוא לא יבוא ככל הנראה מחוץ עד הושם על אלבומין.

6. הצבת חרוז

1. לאחר חרוז הושם על החלק העליון של היעד באזור, השתמש בדיקה טונגסטן כדי להנחות אותו לעבר המוח הקדמי או לתקן את זה למוח האחורי.
2. הוסף כמה טיפות של PBS בעזרת פיפטה μL 10.

7. סגירת ביצה

1. סגור את הביצה בעזרת חתיכה דקה של הקלטת לסגור את החלון.
2. חותם את הביצה על פי פרוטוקול prepping, זמין ב http://jove.com/index/Details.stp?ID=306 .

בהתאם החלבון אתה רוצה להשתמש, ישנם פרוטוקולים שונים על איך להכין את החרוזים. בניסויים אלה, אנו משתמשים הפרין, אקריליק חרוזים, אבל Affi ג'ל חרוזים יכול לשמש גם. מצאנו כי הפרין, אקריליק חרוזים קל יותר לתמרן בסביבה מימית של הביצה אלבומין. חרוזים הם ספוגים אני 5 של חלבון לילה בשעה 4 ° C. חרוזים בקרה ממוקמים PBS סטרילי עד ימי השמה. היתרון בשימוש בהכנת אובו היא כי העובר עדיין חי וחופשי לפתח בדרך כלל ^1. למרות הסביבה שבה explant נשמר ניתן לשלוט על משתנים מסוימים, העובר לגור מאפשר ייצוג מדויק של משפיע על חלבון על דפוסים התפתחותיים ^2-3. כל מבחני שבאפשרותך לבצע על explant, אתה יכול עם העובר.