The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.

Recommend to Librarian

Automatic Translation

This translation into Russian was automatically generated through Google Translate.
English Version | Other Languages

 JoVE General

Intravitreous для закачки Создание глазных болезней Модель

, ,

The University of Hong Kong - HKU

You must be subscribed to JoVE to access this content.

This article is a part of   JoVE General. If you think this article would be useful for your research, please recommend JoVE to your institution's librarian.

Recommend JoVE to Your Librarian

Current Access Through Your IP Address

You do not have access to any JoVE content through your current IP address.

IP: 54.224.79.93, User IP: 54.224.79.93, User IP Hex: 920670045

Current Access Through Your Registered Email Address

You aren't signed into JoVE. If your institution subscribes to JoVE, please or create an account with your institutional email address to access this content.

 

Video Article Chapters

Cite this Article: Intravitreous для закачки Создание глазных болезней Модель

Chiu, K., Chang, R. C., So, K. Intravitreous Injection for Establishing Ocular Diseases Model. J. Vis. Exp. (8), e313, doi:10.3791/313 (2007).

Abstract: Intravitreous для закачки Создание глазных болезней Модель

Intravitreous инъекции широко используемый метод в исследовании визуального наук. Он может быть использован для создания моделей на животных с глазных болезней или прямого применения местного лечения. Это видео представляет, как использовать простые и недорогие инструменты для отделки intravitreous процедуры инъекции. Использование 1 мл шприца, вместо шприца Хэмилтон, используется. Практические советы о том, как внести соответствующие игл инъекции с использованием стеклянных пипеток с совершенным советы, и как легко подключить иглу шприца со стеклянной пипетки плотно вместе, приведены.

Провести хорошее инъекции intravitreous, Есть три аспекта, которые необходимо соблюдать: 1) инъекции не должна нарушать структуру сетчатки, 2) кровотечения следует избегать, чтобы уменьшить риск заражения, 3) объектив должен быть нетронутым, чтобы избежать травматической катаракты. Короче говоря, самый важный момент состоит в сокращении прерывания нормального строения глазного яблока. Чтобы избежать остановки работы сетчатки, начальник носовой области крысы глаз был выбран. Кроме того, прокол точку игла по номинальной плоской, что составило около 1,5 мм от лимба области крысы глаз. Небольшое количество стекловидного мягко выталкивается через отверстие прокола снизить внутриглазное давление до инъекции. С углом 45 инъекций °, это менее вероятно, вызовет травматический катаракты у крыс глаз, что позволяет избежать осложнений и влияния факторов линзовидные. В этой операции, не было резки мышц конъюнктивы и глаз, без кровотечения. С быстрым и легким травмам, успешное введение intravitreous может быть сделано за считанные минуты.

Инъекции, описываемых в данном протоколе является специфическим для intravitreous инъекции. Тем не менее, методы и материалы, представленные здесь, могут также использоваться для других процедур, инъекций для доставки лекарств в мозг, спинной мозг или другие органы, в небольших млекопитающих.

Protocol: Intravitreous для закачки Создание глазных болезней Модель

  1. Подготовка стеклянной пипетки использованием пипетки съемник, подключите его к 1 мл шприц, и печатью связи с парафильмом. Вывод 2 мл раствора в кончике пипетки и получить готовый для инъекции.
  2. Анестезировать крыс внутри-перитонеального инъекции кетамина (80mg/kg) и ксилазина (8mg/kg) (объемное соотношение 2:1).
  3. Применяют по одной капле 0,5% alcaine для крыс глазах местных анестетиков перед intravitreous инъекции.
  4. Позиция крысы и выставить высший носовой области глаз.
  5. Используйте 30 иглой проколоть превосходной носовой склеры на уровне номинальной Плана. Старайтесь не прикасаться глазных мышц и сосудов.
  6. Дайте глазного яблока умеренное давление, чтобы избавиться от небольшого количества стекловидной через прокол отверстие с задней камеры.
  7. Вставьте кончик стеклянной пипетки через прокол отверстие под углом 45 ° через склеру в стекловидное тело. Inject 2 мл раствора в заднюю камеру и держать на месте в течение нескольких секунд, затем аккуратно удалить иглу. Старайтесь не касаться линзы и внутриглазного судов.
  8. После intravitreous инъекции, применять мазь офтальмологических Tobrex на крысу глаз, чтобы предотвратить инфекцию.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion: Intravitreous для закачки Создание глазных болезней Модель

Хорошо инъекции intravitreous полезно для создания модели животных, а также прямые внутриглазного лечения. Во-первых, место инъекции не должна нарушать структуру сетчатки. Во-вторых, кровотечения следует избегать, чтобы уменьшить риск заражения. В-третьих, объектив должен быть нетронутым, чтобы избежать травматической катаракты. Самое главное заключается в снижении прерывания нормального строения глазного яблока.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures: Intravitreous для закачки Создание глазных болезней Модель

Животных были обработаны в соответствии с протоколом для использования животных в исследованиях одобрена Комитетом по использованию живых животных в области преподавания и исследований (CULATR) из университета Гонконга и Ассоциация научных исследований в области зрения и офтальмологии отчетность за Использование животных в офтальмологический и Vision Research.

Acknowledgements: Intravitreous для закачки Создание глазных болезней Модель

Изучению глаукомы в этой лаборатории проводится при поддержке Национального Глаукома Исследования, проведенные американским фондом помощник здравоохранения.

Materials: Intravitreous для закачки Создание глазных болезней Модель

Name Company Catalog Number Comments
Operating Microscope Olympus Corporation OME
Glass Pipettes World Precision Instruments, Inc.
Pipette Puller David Kopf Instruments
1ml syringes single use
30G needles single use
Ketamine Aldasan anesthetic
Xylazine Aldasan anesthetic
Alcaine Alcon 0.5% proparacaine hydrochloride
Tobrex Alcon ointment, 3% tobramyxin.

References: Intravitreous для закачки Создание глазных болезней Модель

1. Chiu, K., Lam, T. T., Ying Li, W. W., Caprioli, J., Kwong Kwong, J. M., 2005. Calpain and N-methyl-d-aspartate (NMDA)-induced excitotoxicity in rat retinas. Brain Research. 1046, 207-215.

2. Fisher,D., Pavlidis, M., Thanos, S., Cataractogenic lens injury prevents traumatic ganglion cell death and promotes axonal regeneration both in vivo and in culture. Investigative Ophthalmology & Visual Science. Vol. 41, 2000, pp. 3943-3954.

3. Ji, J.-Z., Elyaman, W., Yip, H. K., Lee, V. W. H., Yick, L.-W., Hugon, J., So, K.-F., 2004. CNTF promotes survival of retinal ganglion cells after induction of ocular hypertension in rats: the possible involvement of STAT3 pathway. European Journal of Neuroscience. 19, 265-272.

4. Lam, T. T., Abler, A. S., Kwong, J. M. K., Tso, M. O. M., N-Methyl-D-Aspartate (NMDA)-Induced Apoptosis in Rat Retina. Investigative Ophthalmology & Visual Science. Vol. 40, 1999, pp. 2391-2397.

Ask the Author: Intravitreous для закачки Создание глазных болезней Модель

8 Comments

Hello ma'am,
Video is really good.
i want to ask the folll questions:
1. After how much time interval we can do intravitreal injection
2. what dose should be ideally given?
3. How much vitreous is present in rat?
As in few papers they have gven 60 microlitre and in some 120 microlitre of vitreous is present in rat.

1

Reply

Posted by: Rupali October 9, 2010, 3:36 AM

1. Normally we do not do multiple injections. I believe time interval
depends on your experiment design. However, frequent injections will
lead to higher infection rate and there will be leaking of the
vitreous.
2. If you mean volume, I give 2 microliter. This is the volume will
not affect the IOP. About the dose you want to give, that depends on
the concentration of the drug.
3. I am not sure about the posterior chamber size of rats, but for
sure more than 5 microliter injection will result in sudden increase
in IOP and the outflow of the drug.

2

Reply

Posted by: Kin ChiuOctober 25, 2010, 10:02 PM

Dear Madam,
I would like to ask if this protocal is feasible in feline or rabit and whether this intravitreous injection can be used to establish a retinal detachment model for further trials of certain medical devices or drugs?
Thank you.

3

Reply

Posted by: AnonymousJanuary 6, 2011, 12:30 AM

Hi, I believe this method is feasible in feline or rabbit. Dependents on the position and deepth of the injection site, you can use this method to establish the retinal detachment model.
Good luck.

3.1

Reply

Posted by: kin ChiuJanuary 6, 2011, 9:07 PM

Dear Madam,
Thank you for your prompt reply, and a further question is how is the time for the retina to reattached after performing this procedure. Could the detached status be maintained for about 10 weeks?
Thanks again sincerely,
LS

3.1.1

Reply

Posted by: AnonymousJanuary 7, 2011, 2:07 AM

Sorry that I just see your question today. I think that you need to do the sub- retinal injection instead of an intravitreous injection. The time of detech depends on the amount of solution you injected at the position and also ocular reaction of different animals.

3.1.1.1

Reply

Posted by: kin CHIUMay 21, 2011, 4:22 AM

Hi Madam, I am trying to do intravitreous injection in mice with a 33 gauge needle, thus I am asking you whether it is possible for me acheive this just with this needle, and will 1.5 microlitter increase the IOP in sudden (for mice)? And one more question, are there any side effects when intravitreally inject DMSO as a solvent control?

4

Reply

Posted by: Chuanzhou liMay 21, 2011, 3:50 AM

Hi, I think 33G needle should be OK for the injection. To avoid sudden increase in IOP, you should release some of the vitrous before the injection, and do the injection nice and slowly for a prolonged duration.

4.1

Reply

Posted by: kin CHIUMay 21, 2011, 4:28 AM

For the DMSO, I believe you can try different dilution and then analyze the effect. Hope you can find an ideal dilution works well for your drug and do not affect the retinal as a solvent control.
Good luck.

4.2

Reply

Posted by: kin CHIUMay 21, 2011, 4:32 AM

Im very appreciated for your suggestion.

4.2.1

Reply

Posted by: Chuanzhou LiMay 22, 2011, 1:29 AM

Hi Madam, I am trying to do posterior chamber injections in rats with alpha-chymotrypsin. Do you have any recommended volumes and concentrations? Some papers showed 20 microliter is an acceptable volume. I just failed the trail.

5

Reply

Posted by: Tao jingMay 30, 2011, 6:21 AM

Hi, normally I do the intravitrous injection at 2 microliter, 3 microliter is the most. I do not want to cause any dramatic changes of the intraocular pressure. As you may know that high ocuar pressure either acute or chronic sustained, will damage the retinal neurons. The concerntration depends on the solubility and toxicity of your drug. Good luck.

6

Reply

Posted by: kin c.May 30, 2011, 9:03 AM

hi madam kin chiu, could you kindly provide me your email address? thanks..

7

Reply

Posted by: ooi y.June 30, 2011, 3:14 PM

hi, it is ckirisli@gmail.com

8

Reply

Posted by: chiu kinJuly 1, 2011, 3:39 AM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Waiting
simple hit counter