The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.
This translation into Arabic was automatically generated through Google Translate.
English Version | Other Languages
1Center for Brain and Spinal Cord Repair, School of Allied Medical Professions, The Ohio State University, 2Spinal Cord Research Center, Drexel University College of Medicine
This article is a part of JoVE Clinical and Translational Medicine. If you think this article would be useful for your research, please recommend JoVE to your institution's librarian.
Recommend JoVE to Your LibrarianCurrent Access Through Your IP Address
Current Access Through Your Registered Email Address
Detloff, M. R., Fisher, L. C., Deibert, R. J., Basso, D. M. Acute and Chronic Tactile Sensory Testing after Spinal Cord Injury in Rats. J. Vis. Exp. (62), e3247, doi:10.3791/3247 (2012).
اصابات الحبل الشوكي (النخاع الشوكي) يضعف أنظمة حسية تسبب allodynia 1-8. لتحديد أسباب الخلوية والجزيئية من allodynia وحساسة والتجارب الحسية صالحة في نماذج الفئران اصابات النخاع الشوكي هو مطلوب. ومع ذلك، حتى وقت قريب، كان قد تم التحقق من صحة أي نهج اختبار واحد لاصابات النخاع الشوكي بحيث طرق موحدة لم يتم تنفيذها عبر المختبرات. وبالإضافة إلى ذلك، لا يمكن أن طرق الاختبار متاح تنفذ تماما، أو عندما حاد محرك العاهات وجدت، ومنع دراسات لتطوير اصابات النخاع الشوكي التي يسببها allodynia 3. هنا نقدم 2 التحقق من صحة طرق الاختبار الحسي باستخدام فون فراي الشعر (VFH) المجذوذه التي قياس التغيرات في العتبات الحسية عن طريق اللمس بعد اصابات النخاع الشوكي 4-5. اختبار واحد هو راسخة يصل أسفل اختبار والذي يدل على حساسية عالية وخصوصية عبر بالقسوة اصابات النخاع الشوكي مختلفة عند اختبار 5 مزمنة. الاختبار الآخر هو المطورة حديثا اختبار VFH الظهرية التي يمكن تطبيقها بشكل حاد بعد اصابات النخاع الشوكي عندماllodynia يتطور، وذلك قبل 4-5 استرداد السيارات. كل حيدة VFH ينطبق قوة معايرة عندما تطرق إلى الجلد من مخلب هند حتى ينحني. في طريقة ما يصل إلى أسفل، وتستخدم VFHs بالتناوب القوات أعلى أو أقل في قطاع جلدي في L5 أخمصي لتحديد عتبات انسحاب المثنية. وتطبق القوات أعلى تباعا حتى انسحاب يحدث بعد ذلك يتم استخدام VFHs أقل قوة حتى انسحاب يتوقف. عتبة اللمس يعكس القوة المطلوبة للحصول الانسحاب في 50٪ من المنبهات. لاختبار جديد، يتم تطبيق كل VFH إلى قطاع جلدي على ظهري L5 من مخلب في حين يتم اعتماد الفئران بواسطة الفاحص. تحفيز VFH يحدث في ترتيب تصاعدي من قوة حتى على الأقل 2 من 3 طلبات في قوة معينة تنتج انسحاب مخلب. عتبة الحسية عن طريق اللمس هو أدنى قوة للحصول انسحاب من 66٪ من الوقت. وصفت تأقلم والاختبار وإجراءات التسجيل. وتحدد التجارب الشاذة التي تحتاج إلى إعادة الإختبار والتجارب النموذجية. حيوان استخدام ثكما وافقت عليها ولاية أوهايو رعاية الحيوانات وجامعة لجنة الاستخدام.
1. أعلى / أسفل أخمصي فون فراي اختبار
والغرض من هذا الاختبار هو لتحديد حساسية اللمس عن طريق قياس مدى قوة مطلوبة كثيرا للحصول انسحاب مخلب من التحفيز. وتستخدم المتاحة تجاريا معايرة الشعر فراي المجذوذه فون التي تتراوح بين 4،56 و 6،10 لتحفيز مخلب. يمكن المدخلات الحسية الأخرى، مثل تصور من التحفيز أو استقبال الحس العميق نخلط التدابير عتبة اللمس حتى الردود على أساس المدخلات البصرية أو التحفيز غير صالحة. للحيلولة دون تصور للحيدة لمس الجلد، واختبار ونحن فقط في حين أن الفئران يأكل الحبوب. هذا تشويش المعرفي، ويضمن أيضا أن يتم اختبار جميع الفئران عند مستويات خط الأساس مماثلة من الراحة. لتجنب ردود بسبب التحفيز بدلا من المدخلات عن طريق اللمس، ونحن لا تشمل المحاكمات حيث حيدة ترفع أو نقل مخلب.
إجراءات التأقلم ألف لنهج UP-DOWN
إجراءات الاختبار باء للنهج UP-DOWN
جيم معالجه البيانات للنهج UP-DOWN
2. ظهري فون فراي اختبار
والغرض من هذا الاختبار هو لتحديد حساسية اللمس في الفئران مع مثل التحكم في المحركات الفقيرة التي لا يمكن اختبارها باستخدام طرق نموذجية VFH أخمصي. انه يحدد مدى قوة بكثير وهناك حاجة لمسة لإنتاج استجابة مكره. لتجنب الاستجابات للمؤثرات التحفيز، ونحن لا تشمل المحاكمات التي يتم نقل مخلب من خلال تطبيق VFH. بالإضافة إلى ذلك، نحن لا تشمل المحاكمات التي VFH ينزلق أو يتم تجاهل عبر السطح الظهري من القدم.
إجراءات التأقلم أ للحصول على الظهرية اختبار FREY VON
إجراءات الاختبار باء للالظهرية اختبار FREY VON
3. ممثل النتائج
وهناك تجربة ناجحة تؤدي إلى انسحاب فوري وسريع من مخلب هند إلى VFH تطبيقها عموديا الى المنطقة منتصف أخمصي (الشكل 1A) أو السطح الظهري بين ش 1 و 2 الثانية ومشط 1 سم من (1C الشكل) مشترك . وأحصت هذه الاستجابات لاشتقاق عتبة اللمس لكل مخلب هند. وأظهرت عتبات اللمس من الاختبارات VFH الظهري في النخاع الشوكي الحادة الاخلاص ممتازة مع عتبات VFH أخمصي اشتقاقد أحيانا مزمن (الشكل 2). انخفاض عتبات اللمس المستقاة من الاختبارات أخمصي أو ظهري يحدث لاصابات النخاع الشوكي متدرج (الشكل 3 3،5). هذه الحساسية تظهر في وقت مبكر بعد 7 أيام من اصابات النخاع الشوكي والتي تحتفظ لمدة التجربة 3-4،6. في حين أن مجموعة من بالقسوة اصابات النخاع الشوكي لا تؤثر على عتبات الحسية عن طريق اللمس من مخلب، وانخفاض في عتبات تحدث لاصابات النخاع الشوكي أكثر حدة (الشكل 3). الأهم من ذلك، وضع أقل من المستوى allodynia هو رد فعل كل شيء أو لا شيء يحدث عندما يكون هناك فقدان أكثر من 60٪ من المادة البيضاء في بؤرة الآفة. (الشكل 4 3).
ويمكن عن طريق اللمس عتبات الاضمحلال وتنتج ردود الاصطناعي لقوات VFH منخفض. يمكن أن اثنين على الأقل من شروط إنتاج الاضمحلال عتبة - تطبيق بسرعة VFH على الجلد بطريقة أو بدس لكز أو ليس انتظار طويلة بما فيه الكفاية بين التطبيقات التحفيز. أن تكون على ثقة من أنعلى عتبات اللمس هي حقيقية، لا بد من الحرص على تطبيق كل VFH استخدام نهج مماثل سرعة منخفضة، والفاصل الزمني interstimulus يجب أن تكون على الأقل 30 ثانية. أظهرنا أيضا أن تناول سلوك يقلل من تسوس عتبة 5.

الشكل 1. تخطيطي وصورة مسيئة للموقع من التحفيز VFH لاختبار (VFH) أخمصي وظهري شعر فراي فون. أ) لاختبار VFH أخمصي، ينبغي تطبيق الشعر فراي فون عموديا إلى hindpaw منتصف أخمصي حوالي 1 سم الخلفي لحزب الكتائب الأوسط (كما يدل على ذلك المربع الأحمر في الرسم البياني لسطح أخمصي من hindpaw) في بطء سرعة تتفق حتى ينحني. باء وجيم) وبالنسبة للتقنية VFH ظهري، ومن لف فضفاضة الفأر في منشفة الجراحية كما هو مبين في الصورة. يتم تطبيق VFH على السطح الظهري للمخلب في مشط القدم بين approximatel في الأول والثانيذ 1 سم الأقرب إلى مشترك.

الشكل 2. الظهرية الشعر فراي فون العتبات الحسية متطابقة إلى VFH أخمصي القياسية. (N-44؛ بيرسون معامل = 0.503، P <0.01، R2 = 0.67). الخطوط المتقطعة تظهر عتبة قطع للإحساس allodynic باستخدام إما VFH الظهرية أو في أساليب VFH أخمصي وتشير إلى أن العتبات allodynic في 7 أيام بعد اصابات النخاع الشوكي باستخدام اختبار VFH الظهرية التنبؤ مزمن دون المستوى allodynia تحدده أساليب VFH أخمصي.

الشكل 3. المبكر ظهري الشعر فراي فون العتبات الحسية التنبؤ حساسية اللمس allodynic وغير allodynic، عبر بالقسوة اصابة في timepoints في وقت لاحق. العتبات الحسية للمقارنة وقعت في الفترة بين 7 أيام آخر VFH الظهرية اصابات النخاع الشوكي و 28 يوما آخر التدابير اصابات النخاع الشوكي VFH أخمصي. وقع التشابه الملحوظ لل ولاحظت مجموعة واسعة من اصابات النخاع الشوكي، مع allodynia كبيرة في متوسطة الى شديدة اصابات النخاع الشوكي (P <0.05 تشريد 1.1 ملم مقابل كل المجموعات الأخرى).

الشكل 4. النسبة المئوية من الفئران التي كانت تتلقى استئصال الصفيحه (لا توجد اصابات النخاع الشوكي) والجماعات اصابات النخاع الشوكي تظهر hindpaw allodynia في 6 أسابيع بعد اصابات النخاع الشوكي. كان ينظر فقط Allodynia في الفئران مع معتدلة أو شديدة ردود اصابات النخاع الشوكي في حين الفئران مع اصابات خفيفة (0.3، 0.5، 0.7 مم التشريد الحبل الشوكي) عرضت (جامعة ولاية أوهايو ESCID جهاز 0.9، 1.1، 1.25، 1.3 تشريد الحبل ملم) العادية لتحفيز عن طريق اللمس. ممثل الاكليلية أقسام النخاع الشوكي ملطخة للالمايلين في بؤرة آفة لاستئصال الصفيحه (مراقبة يصب بأذى)، خفيف (0.5 تشريد مم)، يتم تضمين معتدلة (1.1 تشريد ملم) وحاد (1.3 مم الإزاحة) كدمات في النخاع الشوكي لإظهار درجة من محور عصبي تجنيب مقترن هذه الحساسية المفرطة. (شريط مقياس = 0.5 مم).

الشكل 5. ورقة بيانات العينة لمدة تصل إلى أسفل فون اختبار الشعر فراي. وتسجل قيمة الشعر والنتيجة (إيجابية أو سلبية) لكل محاكمة. لاحظت مؤشرات على وعي فوق الشوك للاختبار. في نهاية الاختبار، واذاعتها في الردود على كل قيمة الشعر. وحلقت قيمة العتبة المحددة للبيانات سبيل المثال.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
قدمت طرق الاختبار VFH هنا تمثل نماذج اختبار 2 التي تعتبر حساسة وصالحة للاستخدام في نماذج اصابات النخاع الشوكي على الفئران. الأهم من ذلك، تم إنشاء اختبار VFH ظهري لتقييم استعادة الاحساس باللمس من الكفوف هند بعد تماما في منتصف الصدر اصابات النخاع الشوكي عند الفئران غير قادرين على الوقوف على الخلف بهم. ويمكن أيضا اختبار هذا النموذج يتم استخدامها عند الفئران على استعادة القدرة على دعم وزنهم وعلى أطرافه الخلفية بعد اصابات النخاع الشوكي عنق الرحم.
أظهرت نماذج 2 الاستفادة من هنا VFH معايرة لتحديد عتبة عن طريق اللمس من كل مخلب هند. الأساليب الأخرى تحديد وتيرة انسحاب إما إلى التحفيز عادة حميدة أو ضارة عادة. لقد أظهرنا في وقت سابق ان التحسينات الصغيرة في العتبات عن طريق اللمس يمكن أن تمثل الفرق بين وجود آلام الأعصاب المزمنة والاحساس باللمس العادي. وبالتالي الاستفادة من طرق الاختبار التجريبي التي تستمد الألم عتبات مايو كرة القدمcilitate ترجمة من التدخلات العلاجية المحتملة إلى العيادة.
كما هو الحال مع جميع الاختبارات السلوكية، لا بد للتقليل من عدد من الإرباك داخل بيئة الاختبار التي قد تؤثر على نتائج الاختبار السلوكية 9. وبالتالي، فمن المهم أن كل دورة الاختبار يحدث في نفس الوقت من اليوم، في نفس درجة الحرارة والرطوبة تسيطر عليها غرفة. وبالإضافة إلى ذلك، منذ الفئران التواصل جهارا في نطاق الموجات فوق الصوتية، من المهم أن يتم الاحتفاظ الفئران انتظار لفحصها في غرفة منفصلة حتى تبدأ تجاربها. وأظهرت لانجفورد وآخرون 10 دليل على أن الحيوانات درامية ساذجة تجربة الألم بعد نشهد cagemate تتعرض لتحفيز الضارة. لمزيد من القضاء على التباين في التجارب الحسية عن طريق اللمس، ونحن الاستفادة من الحبوب مسكر باعتباره distractor المعرفية خلال اختبار VFH أخمصي. في القيام بذلك، ونحن على استقرار استجابات الحيوان. العتبة هو أقل عرضة للتسوس في جميع أنحاءاختبار عندما يتم توفير distractor من عند واحد ليست 5. هذا الاستقرار هو على الأرجح نتيجة لتلطيف من السلوكيات hypervigilant وcatastrophizing، دولتين الاستباقي حيث التهديد ألم ينشط الخوف والمراكز العاطفية في المخ.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
الكتاب ليس لديهم ما يكشف.
المعاهد الوطنية للصحة NS43798 (DMB)؛ المعاهد الوطنية للصحة F31 NS058138 (MRD)؛ P30-NS045758 (CBSCR)، ومشلولا المحاربين القدماء الامريكيين # 2451 (DMB) و # 2707 (MRD).
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Semmes-Weinstein Monofilaments | Stoelting Co. | 58011 | |
| Fish Breeder Box | Any Supplier | Hole drilled in side for cereal delivery | |
| Elevated wire mesh (1/4" X 1/4" grid) | Hardware Store | ||
| Elastic to hold fish breeder box in place | Any Supplier | ||
| Sugared Cereal | Grocery Store | ||
| Surgical Huck Towel 16"x 23" | Medical Supply Store | ||